楊鳳莉

摘要：真菌毒素是真菌在其生長(zhǎng)環(huán)境里所產(chǎn)生的次級(jí)毒性代謝產(chǎn)物，其會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品大幅減產(chǎn)，使農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降，阻礙農(nóng)產(chǎn)品出口。本文就如何使用酶標(biāo)儀測(cè)定真菌毒素的原理及方法進(jìn)行了論述，并特別提出了酶標(biāo)儀使用注意事項(xiàng)，以提高測(cè)定樣品的精確度和工作效率。

關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀；真菌毒素；檢測(cè)技術(shù)

1.引言

我國(guó)地域廣闊，北起黑龍江南至廣東各省份都可以種植糧油作物，雖然各地氣候差異巨大，耕作方式不同，但作物受到真菌毒素污染的現(xiàn)象十分普遍。它的污染可發(fā)生在農(nóng)作物（例如：玉米、花生、小麥等）的田間生長(zhǎng)、收獲、貯藏、運(yùn)輸、加工階段；食品藥品（例如：啤酒、咖啡、調(diào)味料、中草藥等）的加工、儲(chǔ)藏階段。被真菌毒素污染的農(nóng)產(chǎn)品被人誤食后會(huì)對(duì)人體健康造成危害，另外用被真菌毒素污染的作物制成飼料，再去喂養(yǎng)禽類、畜類、魚(yú)類等動(dòng)物，真菌毒素可以由被污染的動(dòng)物性食品，最終通過(guò)食物鏈危害到人的健康。真菌毒素嚴(yán)重影響著農(nóng)產(chǎn)品、食品藥品的質(zhì)量安全、品質(zhì)，給人類和動(dòng)物造成危害。目前，許多國(guó)家依據(jù)公共衛(wèi)生意義和商業(yè)目的，都制定了食品和飼料中真菌毒素的限量。因此需要靈敏、精確地對(duì)樣品進(jìn)行分析的儀器，以確保其含量低于規(guī)定的限量。本文將介紹真菌毒素的種類、危害、以及酶標(biāo)儀測(cè)定真菌毒素檢測(cè)技術(shù)的原理及注意事項(xiàng)。

2.真菌毒素的種類及危害

真菌食物中毒是指產(chǎn)毒霉菌寄生在糧油、食品、中藥或飼料上，在適宜條件下產(chǎn)生有毒代謝物，人畜攝食后導(dǎo)致的中毒。中毒沒(méi)有傳染性，根據(jù)作用的靶標(biāo)器官或引起的病理現(xiàn)象，可將真菌毒素分為肝臟毒、腎臟毒、神經(jīng)毒等。食用被真菌毒素污染的食品有致癌、致畸、致突變的風(fēng)險(xiǎn)。人畜進(jìn)食被其污染的糧油食品可導(dǎo)致急、慢性真菌毒素中毒癥[1]。

2.1黃曲霉毒素

黃曲霉毒素早在1993年就被世衛(wèi)組織劃為一類致癌物。主要有B1、B2、G1、G2、M1、M2。它們的結(jié)構(gòu)式不同，其毒性及危害也有很大差異。其中，黃曲霉毒素B1的毒性及致癌性最強(qiáng)，對(duì)農(nóng)產(chǎn)品及食品的安全性影響很大，值得關(guān)注。

2.2赭曲霉毒素

在其眾多種類中，赭曲霉毒素A的毒性最強(qiáng)，其是自然界中的主要天然污染物。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）認(rèn)為赭曲霉毒素A是一種人類可能的致癌劑。除此之外，赭曲霉毒素A對(duì)人體的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)會(huì)造成危害以及可能致畸、致突變。

2.3展青霉毒素

展青霉毒素又叫棒曲霉毒素，是一種免疫抑制劑。展青霉毒素是一種神經(jīng)毒素，其能誘發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤，并對(duì)消化系統(tǒng)和皮膚組織具有損害作用，還具有致畸性、致突變性和致癌性。

2.4單端孢霉烯族化合物

這是一組生物活性和化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的有毒代謝產(chǎn)物。單端孢霉烯族化合物可影響動(dòng)物的免疫系統(tǒng)使免疫力下降，抗感染能力降低。

2.5玉米赤霉烯酮（ZEA）

玉米赤霉烯酮（ZEA）又名F-2毒素，會(huì)引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成危害，中毒后會(huì)產(chǎn)生諸如惡心、發(fā)冷、頭痛的癥狀。

3.酶標(biāo)儀測(cè)定真菌毒素檢測(cè)技術(shù)研究

3.1酶標(biāo)儀

酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（ELISA Reader），是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計(jì)，即用比色法來(lái)分析抗原或抗體的含量[2]。ELISA測(cè)定一般要求測(cè)試液的最終體積在250ul以下，用一般光電比色計(jì)無(wú)法完成測(cè)試。因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。

3.2酶標(biāo)儀測(cè)定的原理

在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。光通過(guò)被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測(cè)單位用OD值表示，OD是optical delnsity（光密度）的縮寫(xiě)，OD=1og（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)蘭伯―比爾定律，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：E=OD=logΙ0/Ι，其中：E表示被吸收的光密度；Ι0為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度；Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。

OD值由下述公式計(jì)算：E=OD=C×D×E其中：C為檢測(cè)物的濃度；D為檢測(cè)物的厚度；E為摩爾因子。

3.3 ELISA實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體，HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物顯色。底物在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)蛋白呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在（450nm）波長(zhǎng)下測(cè)定測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品濃度[3]。

3.4酶標(biāo)儀的使用注意事項(xiàng)

標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，還能夠延長(zhǎng)其使用壽命。

①儀器應(yīng)放置在無(wú)磁場(chǎng)和干擾電壓的位置；

②儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下；

③為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽(yáng)光直射；

④操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間；

⑤操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定；

⑥操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，以及足夠的操作空間。

3.5操作注意事項(xiàng)

酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：

①使用移液器加液，移液頭不能混用；

②洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染；

③嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確；

④請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手；

⑤如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說(shuō)明，以防對(duì)操作人員造成損害；

⑥不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源；

⑦對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果；

⑧使用后蓋好防塵罩。

4.總結(jié)

真菌毒素嚴(yán)重影響著農(nóng)產(chǎn)品、食品藥品的質(zhì)量安全、品質(zhì)，給人類和動(dòng)物造成危害。目前，許多國(guó)家依據(jù)公共衛(wèi)生意義和商業(yè)目的，都制定了食品和飼料中真菌毒素的限量。因此需要靈敏、精確地對(duì)樣品進(jìn)行分析的儀器，以確保其含量低于規(guī)定的限量。本文介紹了真菌毒素的種類、危害、以及如何利用酶標(biāo)儀測(cè)定真菌毒素的原理及注意事項(xiàng)，具有一定的實(shí)際意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]王紅星，桃正國(guó).飼料中的真菌毒素的危害性及其防治措施[J].獸藥與飼料添加劑，2005（03）：19-20.

[2]李萌萌，關(guān)二旗，卞科，崔貴金.真菌毒素的輻照降解及產(chǎn)物解析研究進(jìn)展[J].糧食與飼料工業(yè)，2013，（01）.

[3]胡娜，徐玲.真菌毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2007（08）.endprint