蜜柚中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法初探

蜜柚是我國特色的農(nóng)產(chǎn)品之一。福建省平和縣作為我國最大的蜜柚種植產(chǎn)業(yè)園，承載著生產(chǎn)和出口兩大任務(wù)。近年來，蜜柚的銷量不斷增長，成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的主要收入來源。蜜柚種植過程中，雖然對(duì)果實(shí)進(jìn)行套袋的農(nóng)事操作，并且延長了采摘前噴藥的時(shí)間間隔，但蜜柚中仍會(huì)存在一定的農(nóng)藥殘留，這給蜜柚產(chǎn)品的出口和銷量帶來了巨大影響，同時(shí)也給種植蜜柚的農(nóng)民造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。所以，為了保障農(nóng)民的正常收入，提高蜜柚的銷售額，提出一種有效的蜜柚中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法是我們目前需要解決的主要問題。

實(shí)驗(yàn)材料和主要方法

快速檢測(cè)需要的材料：氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器、高速冷凍離心機(jī)、超聲波清洗劑、固相萃取裝置、乙腈等試劑、混合器、DN-24A氮吹儀以及一些農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物等。

快速檢測(cè)的方法：首先，進(jìn)行檢測(cè)的提取過程，將一定的蜜柚樣品放置在50ml的離心管當(dāng)中，并且放入10ml的乙腈試劑，利用超聲波提取蜜柚樣品中的農(nóng)藥殘余物質(zhì)10分鐘左右，再往離心管當(dāng)中加入少許的氯化鈉，進(jìn)行離心操作，大約5分鐘之后，將離心后的上層物質(zhì)放入到試劑瓶當(dāng)中，重復(fù)提取的過程，接下來把有機(jī)層混合起來，進(jìn)行蒸發(fā)、濃縮，其次進(jìn)入到凈化的實(shí)驗(yàn)過程。在進(jìn)行凈化時(shí)，我們使用固相萃取的凈化方法，可提高樣品的凈化程度。

氣相色譜以及質(zhì)譜條件：(1)氣相色譜需要的條件。利用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，其載氣是高純度的氦氣，純度高達(dá)99.9%；色譜柱儀器要符合檢測(cè)的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)樣口的溫度要保持在230℃左右，并且以脈沖不分流進(jìn)樣的方式進(jìn)去，進(jìn)樣量不得高于1.0ul。其次，柱升溫裝置的起始溫度為50℃，在后續(xù)的反應(yīng)過程中，要以相應(yīng)的速度持續(xù)增溫。(2)質(zhì)譜需要的條件。質(zhì)譜檢測(cè)需要的條件包括：電子能量70eV，其質(zhì)譜檢測(cè)手段可以采用SIR每一種化合物選取一種定量離子以及2種定性離子，每種農(nóng)藥的檢測(cè)條件不同。此外，質(zhì)譜檢測(cè)要求傳輸線的溫度要達(dá)到280℃，而離子源溫度要達(dá)到230℃，質(zhì)譜的參數(shù)可以通過自動(dòng)調(diào)節(jié)生成快速檢測(cè)需要的參數(shù)。

蜜柚中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的過程

快速檢測(cè)預(yù)處理的條件需求：可以選擇乙腈作為提取劑，其通用性能較好，不僅可以把大部分的農(nóng)藥殘留溶解，而且吸入的油脂量也較少。此外，氯化鈉物質(zhì)可以去除樣品中的一些雜質(zhì)，同時(shí)分離水相和有機(jī)相，可以有效地提高農(nóng)藥殘留提取的精確度。

色譜柱的選?。嚎梢愿鶕?jù)色譜分離的基本原理，對(duì)樣品中的不同組分進(jìn)行有效的分離實(shí)驗(yàn)。色譜柱的選取對(duì)檢測(cè)過程非常重要，根據(jù)農(nóng)藥的不同性質(zhì)來選擇色譜柱，針對(duì)本文檢測(cè)的農(nóng)藥殘留，我們可以選擇DB-35MS毛細(xì)管柱。

基質(zhì)效應(yīng)的消除：基質(zhì)效應(yīng)是指標(biāo)本中除分析物以外的其他成分對(duì)分析樣測(cè)定值的影響，即基質(zhì)對(duì)分析方法準(zhǔn)確測(cè)定分析物的能力的干擾。影響基質(zhì)效應(yīng)的因素有很多種。我們通過對(duì)蜜柚基質(zhì)干擾物的檢測(cè)，發(fā)型主要的基質(zhì)物質(zhì)是烯烴類化合物以及脂肪酸等，其干擾物都會(huì)使得蜜柚中的基質(zhì)效應(yīng)提高。為了有效地消除基質(zhì)效應(yīng)，使用PSA和Amino等小柱物質(zhì)，將兩者結(jié)合起來可以達(dá)到有效消除蜜柚樣品中基質(zhì)效應(yīng)的目的。

快速檢測(cè)結(jié)果：為了檢測(cè)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法對(duì)蜜柚中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)是否有效，我們可以在市場(chǎng)上隨機(jī)挑選一些蜜柚產(chǎn)品，對(duì)其樣品用上述的方法進(jìn)行快速檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，此方法可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出蜜柚樣品中農(nóng)藥殘留量和農(nóng)藥物質(zhì)。

通過對(duì)蜜柚中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法的探析，我們了解到，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的檢測(cè)方法可以快速、準(zhǔn)確檢測(cè)出蜜柚產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留。通過實(shí)驗(yàn)材料與裝置的選擇，建立合適的氣相色譜以及質(zhì)譜條件，預(yù)處理的條件以及色譜柱的選擇，基質(zhì)效應(yīng)的消除等一系列的過程，可以有效地檢測(cè)出蜜柚中的農(nóng)藥殘留。

乙酸酐和三乙胺組合衍生在水產(chǎn)品中氯霉素測(cè)定的應(yīng)用

氯霉素廣泛應(yīng)用于動(dòng)物傳染性疾病的治療，曾在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中得到廣泛的應(yīng)用，但同時(shí)也帶來了嚴(yán)重的殘留問題，氯霉素能夠抑制人體骨髓造血功能，引起貧血等。因此對(duì)水產(chǎn)品中的氯霉素的檢測(cè)具有特殊意義。

國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道氯霉素類藥物的檢測(cè)方法主要采用氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法靈敏度高，但價(jià)格昂貴，一般基層實(shí)驗(yàn)室不配備這樣的儀器，因此不適合于基層實(shí)驗(yàn)室大量檢測(cè)市場(chǎng)上水產(chǎn)品中氯霉素的含量。氣相色譜儀價(jià)格便宜，適合于我們?nèi)粘Ｉ钪兴a(chǎn)品中氯霉素的檢測(cè)。國內(nèi)外檢測(cè)氯霉素的常用方法大多數(shù)與國家標(biāo)準(zhǔn)SC/T 3018-2004方法類似，利用N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）作為衍生劑,吡啶作為催化劑。但BSTFA對(duì)環(huán)境的濕度很敏感，需要嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，并且衍生后的氮-硅鍵和氧-硅鍵在氣相色譜的加熱環(huán)境下有可能分解，影響測(cè)定和實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性。吡啶是一個(gè)具有惡臭的有毒氣體，應(yīng)用吡啶作為催化劑具有二次污染和對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成危害。

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，我們研發(fā)了一種新的氯霉素測(cè)定方法。

實(shí)驗(yàn)部分 材料、試劑、儀器：檢測(cè)的樣品為魚、蝦和蟹。甲醇、正己烷、乙腈；乙酸乙酯。氣相色譜儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；電子天平；旋渦混合器；毛細(xì)管氣相色譜柱RTX-5ms。氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品來自于德國Dr.Ehrenstorfer標(biāo)準(zhǔn)品公司，純度≥99%。

方法 氣相色譜的條件為：采用RTX-5ms作為固定相的毛細(xì)管柱，所述毛細(xì)管柱的柱長為30m、內(nèi)徑為0.25mm、膜厚度為0.25μm；柱溫為程序升溫，初始溫度150℃，保持1min，以15℃/min的速率升溫至260℃，保持10min，再以30℃/min的速率升溫至280℃，保持5min；總運(yùn)行時(shí)間為24min；載氣為氦氣，純度≥99.99%；采用恒流模式，線速度為31.1cm/s；進(jìn)樣口溫度為260℃，不分離進(jìn)樣；檢測(cè)器為63Ni電子捕獲檢測(cè)器。

樣品處理 樣品預(yù)處理：取待測(cè)水產(chǎn)品，取肌肉部分，稱取5g置于離心管中，加入20mL乙酸乙酯，均質(zhì)機(jī)均質(zhì)1min，4000r/min離心3min，得到的混合液轉(zhuǎn)移到細(xì)口雞心瓶中；再向離心管加入10mL乙酸乙酯，均質(zhì)1min,4000r/min離心3min，合并乙酸乙酯提取液，于40℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。

樣品凈化：向雞心瓶中加入1mL甲醇旋渦混合溶解經(jīng)樣品預(yù)處理處理的樣品殘留物，再加入15mL正己烷和25mL4%氯化鈉溶液，振蕩混合1min后轉(zhuǎn)移到離心管中，4000r/min下離心2min，棄去上層正己烷相；再向水相中加入10mL正己烷，振蕩、離心后棄去正己烷相；向所述水相中加入15mL乙酸乙酯，旋渦混合2min，3000r/min離心3min，吸取乙酸乙酯層，經(jīng)過無水硫酸鈉柱脫水過濾于50mL雞心瓶中；再向水相中加入5mL乙酸乙酯，旋渦混合、離心后吸取乙酸乙酯層，經(jīng)無水硫酸鈉柱脫水過濾；用少量乙酸乙酯淋洗無水硫酸鈉柱，合并提取液，40℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。

樣品及標(biāo)準(zhǔn)品的衍生化 樣品的衍生化：往旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干的提取物中加入2mL乙酸乙酯溶解并轉(zhuǎn)移到離心管中，再用1-2mL乙酸乙酯洗滌提取物，合并乙酸乙酯，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋渦2min，得到樣品溶液，供氣相色譜分析備用；標(biāo)準(zhǔn)品的衍生化：取適量標(biāo)準(zhǔn)品于離心管中，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋渦2min，得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液，供氣相色譜分析備用。

氣相色譜檢測(cè) 分別吸取衍生后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液，注入氣相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定。

結(jié)果與討論 取衍生后的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見圖1。從圖1可以看出，標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖峰形尖銳、對(duì)稱，與鄰近峰完全分離。

圖1 氯霉素衍生后的氣相色譜圖

催化劑的選擇：本實(shí)驗(yàn)室嘗試過采用乙酸酐和吡啶作為組合衍生試劑，效果良好。但吡啶具有惡臭和對(duì)人體毒性大，經(jīng)過考慮，本實(shí)驗(yàn)室采用價(jià)格更便宜的，極少采用的三乙胺催化劑來代替吡啶，減少對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的傷害。

衍生試劑的選擇：N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺/三甲基氯硅烷是一組經(jīng)常使用的衍生試劑，但其對(duì)環(huán)境要求嚴(yán)格，衍生試劑昂貴，不能大量使用。改用乙酸酐后，乙酸酐價(jià)格便宜，能夠大量使用，并且對(duì)水的穩(wěn)定性比較好。

標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限、回收率與精密度：在20-250μg/L范圍內(nèi)，氯霉素濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,其線性回歸方程為：Y=8665.5X，相關(guān)系數(shù)為0.9990，檢出限為3μg/L。取一份經(jīng)檢測(cè)不含有氯霉素的樣品作為空白樣品，測(cè)得平均加標(biāo)回收率大于72%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%～5.8%。

□ 簡小君 平和縣農(nóng)業(yè)局檢測(cè)中心

□ 潘金銅 浙江海洋大學(xué)羅杰鴻 廣州京誠檢測(cè)技術(shù)有限公司