劉 兵 張愛(ài)泓 張 貞

UCA1、核因子、口腔菌群與口腔癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性

劉 兵 張愛(ài)泓 張 貞

目的探討尿路上皮癌抗原1(urethral epithelium cancer antigen，UCA1)、核因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)、口腔菌群與口腔癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。方法收集37例口腔癌患者臨床資料，并與同期37例口腔癌前病變的臨床資料對(duì)比。取口腔癌、癌前病變組織各1份，同時(shí)取口腔癌癌周正常組織1份，觀察三者UCA1、NF-κB、口腔菌群變化情況。對(duì)口腔癌患者均規(guī)范治療，觀察治療前后UCA1、NF-κB、口腔菌群變化。結(jié)果治療前口腔癌UCA1mRNA為(0.94±0.24)、NF-κB陽(yáng)性率為97.3%，口腔癌口腔菌群鏈球菌屬、耐瑟菌屬、葡萄球菌屬、白色念珠菌等優(yōu)勢(shì)菌比率分別為89.19%、72.97%、54.05%、37.84%，均顯著高于癌前病變組和口腔癌周正常組織組，和其他2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后口腔癌UCA1mRNA為(0.18±0.12)、NF-κB陽(yáng)性率為16.22%，口腔癌口腔菌群鏈球菌屬、耐瑟菌屬、葡萄球菌屬、白色念珠菌等優(yōu)勢(shì)菌比率分別為16.22%、16.22%、10.81%、8.11%，無(wú)優(yōu)勢(shì)菌占83.78%，與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論UCA1、NF-κB、口腔菌群水平變化能反映口腔癌的病情轉(zhuǎn)歸，臨床價(jià)值高。

尿路上皮癌抗原1；核因子κB；口腔菌群；口腔癌；相關(guān)性

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1423～1426)

口腔癌是口腔科常見(jiàn)惡性腫瘤，由于口腔內(nèi)血液循環(huán)豐富，加上舌機(jī)械運(yùn)動(dòng)頻繁，口腔內(nèi)菌群分布多樣，癌變后會(huì)造成口腔內(nèi)感染，菌群失調(diào)，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。目前對(duì)口腔癌在診斷上主要結(jié)合臨床表現(xiàn)、觸診和活檢等為主，但這些方法會(huì)增加患者痛苦，造成腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散，而尋找一個(gè)無(wú)創(chuàng)傷性、高特異性、高敏感性的口腔癌標(biāo)志物，對(duì)輔助和改善口腔癌的診斷方法有重要意義[1]。而長(zhǎng)鏈非編碼RNA表達(dá)失調(diào)和口腔腫瘤發(fā)生之間關(guān)系密切，UCA1就屬于其中一個(gè)重要指標(biāo)，NF-κB是核轉(zhuǎn)錄因子之一，被激活后從細(xì)胞質(zhì)位轉(zhuǎn)入核，能調(diào)控蛋白轉(zhuǎn)錄，其過(guò)度表達(dá)則和細(xì)胞癌變、腫瘤生物學(xué)行為有關(guān)?？谇痪菏д{(diào)是口腔癌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2010年5月至2015年4月共37例口腔癌患者臨床資料，與同時(shí)期口腔癌前病變37例進(jìn)行比較。口腔癌組男性22例，女性15例；年齡35～68(51.4±2.3)歲；文化程度：小學(xué)8例，初中19例，高中及以上10例?？谇话┣安∽兘M37例，男性20例，女性17例；年齡36～70(51.6±2.5)歲；文化程度：小學(xué)10例，初中18例，高中及以上9例。2組患者在年齡、性別、文化程度上比較無(wú)差異性(P>0.05)，具有可比性?？谇话┖桶┣安∽冋呤茉嚽?周均未行任何治療方法。排除嚴(yán)重肝腎功能損害者，排除受試前行相關(guān)治療影響結(jié)果者；排除未簽署知情同意書(shū)、未經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意者。

1.2 主要儀器和試劑

干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、電子分析天平、顯微照相儀、Olympus-BH-2顯微鏡等均購(gòu)自上海恒一科學(xué)儀器有限公司。兔抗人NF-κB克隆抗體購(gòu)自上海田源生物技術(shù)有限公司。低溫離心機(jī)、2450分光光度儀、PCR儀均購(gòu)自日本道鏡公司。

1.3 方法

取口腔癌、癌前病變組織各1份，同時(shí)取口腔癌癌周正常組織1份，裝入EP管中后送檢進(jìn)行RNA提取，切除取下組織后充分磨碎，UCA1檢測(cè)則留置5 min后加入氯仿，充分混勻后在室溫下放置3 min，3 000 r/min離心5 min，加入0.5 ml異丙醇，混勻，室溫放置10 min，去除上層清液，沉淀在空氣中后干燥5～10 min，加入去離子水溶解RNA，分光光度儀器檢測(cè)260比值，根據(jù)試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄cDNA，后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)UCA1mRNA在樣本中表達(dá)量。NF-κB則采用二步法免疫組化試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，NF-κB抗原采用微波熱修復(fù)，其陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞中出現(xiàn)黃色或棕黃色著色或顆粒，由2名副主任醫(yī)師以上職稱(chēng)雙盲法觀察。

口腔菌群標(biāo)本采集則用1 cm長(zhǎng)無(wú)菌紙對(duì)準(zhǔn)口腔癌、癌前病變、口腔正常組織黏膜，浸濕喉放入1 ml硫代乙醇鹽運(yùn)送液中，再將采集標(biāo)本用10倍系列稀釋至10-1，接種在血瓊脂培養(yǎng)基后置于厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，初代培養(yǎng)物進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)、菌落和菌細(xì)胞形態(tài)觀察。根據(jù)細(xì)菌學(xué)鑒定系統(tǒng)鑒定細(xì)菌種屬，計(jì)算細(xì)菌檢出率。

對(duì)口腔癌患者均進(jìn)行手術(shù)治療，術(shù)后進(jìn)行放化療，觀察治療前后UCA1、NF-κB、口腔菌群變化情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，或采用Fisher精確概率計(jì)算法，變量間相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三者UCA1、NF-κB情況比較

在UCA1含量和NF-κB陽(yáng)性率上以口腔癌最高，與其他2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在口腔菌群分布上，口腔癌鏈球菌屬、耐瑟菌屬、葡萄球菌屬、白色念珠菌等優(yōu)勢(shì)菌比率分別為89.19%、72.97%、54.05%、37.84%，顯著高于其他2組者(P<0.05)，見(jiàn)表1、2。

表1 三者UCA1、NF-κB情況比較

表2 三者口腔菌群分布情況比較(例，%)

2.2 口腔癌治療前后UCA1、NF-κB、口腔菌群比較

口腔癌治療后在UCA1含量和NF-κB陽(yáng)性率顯著低于治療前，口腔菌群分布上也顯著低于治療前，治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3、4。

表3 口腔癌治療前后口腔菌群分布情況比較(例，%)

表4 治療前后UCA1、NF-κB情況比較

3 討論

NF-κB是成熟B細(xì)胞和漿細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種廣泛存在真核生物中轉(zhuǎn)錄因子，在正常情況下，其和IκB家族緊密結(jié)合形成三聚體從而抑制NF-κB活性并滯留在胞質(zhì)內(nèi)，促使NF-κB處于無(wú)活性狀態(tài)。而當(dāng)細(xì)胞受到白細(xì)胞介素-1、致癌基因、促癌劑等外界因素刺激后，細(xì)胞核內(nèi)的κB就會(huì)和核內(nèi)DNA特異序列相結(jié)合，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[2-3]。故抑制NF-κB活性過(guò)程，防止過(guò)度活化，對(duì)改善惡性腫瘤預(yù)后至關(guān)重要。報(bào)道稱(chēng)，NF-κB能通過(guò)調(diào)控與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、抗凋亡、血管生成和轉(zhuǎn)移等相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)展[4]。結(jié)果顯示，NF-κB在口腔癌中陽(yáng)性率最高，較口腔癌前病變NF-κB陽(yáng)性率高，可見(jiàn)其有利于口腔癌的檢出率，這可推測(cè)出該指標(biāo)在口腔癌中普遍升高，且治療后陽(yáng)性率顯著下降，這說(shuō)明該指標(biāo)對(duì)口腔癌預(yù)后有一定指導(dǎo)價(jià)值。

UCA1是一個(gè)非編碼RNA，其在調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育和癌癥發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移中有重要作用。研究[5-6]指出，UCA1不直接參與基因編碼和蛋白合成，但在基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控、剪切和修飾過(guò)程中發(fā)揮重要作用。報(bào)道[7]通過(guò)對(duì)UCA1口腔癌和癌周正常組織表達(dá)情況分析，發(fā)現(xiàn)低分化、臨床分期中Ⅲ期、Ⅳ期患者，UCA1自身可嵌入基因啟動(dòng)子區(qū)域，會(huì)影響基因轉(zhuǎn)錄，且UCA1和腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，是腫瘤靶位點(diǎn)或早期診斷和預(yù)后分子標(biāo)志物[8]。結(jié)果顯示，UCA1mRNA表達(dá)在口腔癌患者中水平較高，且治療后UCA1mRNA水平較治療前顯著下降，這說(shuō)明該指標(biāo)能判斷口腔癌預(yù)后，可作為口腔癌臨床發(fā)生發(fā)展的指標(biāo)之一。

口腔癌患者口腔往往有潰瘍，表面不光滑，多存在糜爛，黏膜機(jī)械屏障受損，糜爛壞死組織為細(xì)菌提供大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，加上潰瘍腔隙降低了氧化還原電勢(shì)，促使厭氧菌容易定植和生長(zhǎng)[9-10]。同時(shí)癌癥會(huì)造成全身抵抗力下降，吞噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能下降顯著，特異性和非特異性免疫因子缺乏后會(huì)造成黏膜表面缺乏特異性抗體屏障，為細(xì)菌的定植和生長(zhǎng)提供良好環(huán)境。研究[11-12]指出，口腔癌患者表面有大量需氧菌和厭氧菌定植，多數(shù)是引起術(shù)后感染的致病菌，其表面需氧菌和厭氧菌數(shù)量高于正常黏膜。報(bào)道[13-14]稱(chēng)，口腔內(nèi)局部組織破壞，黏膜屏障受損會(huì)造成口腔菌群失調(diào)，優(yōu)勢(shì)菌會(huì)發(fā)生改變，白色念珠菌等細(xì)菌定植，增加感染機(jī)會(huì)。結(jié)果顯示，口腔癌鏈球菌屬、耐瑟菌屬、葡萄球菌屬、白色念珠菌等優(yōu)勢(shì)菌比率明顯偏高，這說(shuō)明口腔癌患者菌群失調(diào)發(fā)生率高，故在治療上對(duì)口腔癌患者要定期清潔口腔，主要防范口腔感染可能，同時(shí)治療后無(wú)優(yōu)勢(shì)菌明顯減少，這說(shuō)明治療后口腔菌群失調(diào)明顯下降，故對(duì)口腔菌群進(jìn)行研究對(duì)判斷口腔癌預(yù)后有重要價(jià)值。

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(編輯：甘艷)

StudyontheRelationshipbetweenUCA1,NuclearFactor,OralFloraandtheOccurrenceandDevelopmentofOralCancer

LIUBing,ZHANGAihong，ZHANGZhen.

AnyangSixthPeople'sHospital,Anyang，455000

ObjectiveTo investigate the correlation between the expression of UCA1,NF-kappa B,oral microflora and the occurrence and development of oral cancer.MethodsClinical data of 37 patients with oral cancer were collected and compared with the clinical data of 37 patients with oral precancerous lesions in the same period.1 case of oral cancer and precancerous lesions were collected,and 1 case of pericancerous tissue of oral cancer was collected.The changes of UCA1,NF-kappa B and oral flora were observed in the 3 groups.All the patients with oral cancer were treated with standard therapy,and the changes of UCA1,NF-kappa B and oral flora were observed before and after treatment.ResultsBefore the treatment,oral cancer UCA1mRNA (0.94±0.24),NF-kappa B positive rate was 97.3%,oral cancer oral bacteria Streptococcus,Neisseria spp,Staphylococcus aureus and Candida albicans bacteria ratios were 89.19%,72.97%,54.05%,37.84%,which were significantly higher than that of precancerous lesions and pericancerous tissues,there had statistical difference between the 2 groups (P<0.05).After the treatment of oral cancer UCA1mRNA (0.18±0.12),NF-kappa B positive rate was 16.22%,oral cancer oral bacteria Streptococcus,Neisseria spp.,Staphylococcus aureus and Candida albicans bacteria ratios were 16.22%,16.22%,10.81%,8.11%,no dominant bacteria accounted for 83.78%,compared with before treatment,there were statistically significant difference (P<0.05).ConclusionThe change of UCA1,NF-kappa B,oral flora can reflect the prognosis of oral cancer,and the clinical value is high.

UCA1；NF-kappa B;Oral microflora;Oral cancer;Correlation

455000 河南省安陽(yáng)市第六人民醫(yī)院口腔醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.008

R739.8

A

1001-5930(2017)09-1423-04

2017-04-05

2017-07-10)