王 濤，張耀文，張寅生，楊小亮，蔡擴(kuò)軍，徐 敏

（1. 烏魯木齊市動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆烏魯木齊 830063；2. 烏魯木齊市達(dá)坂城區(qū)畜牧獸醫(yī)站，新疆烏魯木齊 830039）

口蹄疫O-A-Asia1型三價(jià)滅活疫苗免疫駱駝的安全性和最小免疫劑量試驗(yàn)

王 濤1，張耀文1，張寅生2，楊小亮1，蔡擴(kuò)軍1，徐 敏1

（1. 烏魯木齊市動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆烏魯木齊 830063；2. 烏魯木齊市達(dá)坂城區(qū)畜牧獸醫(yī)站，新疆烏魯木齊 830039）

為確定口蹄疫O-A-Asia1型三價(jià)滅活疫苗免疫駱駝的安全性和免疫效果，分別進(jìn)行了2倍注射劑量和3倍注射劑量的安全性試驗(yàn)和最小免疫劑量試驗(yàn)。結(jié)果顯示：該疫苗對(duì)6月齡以上駱駝安全，無(wú)任何毒副反應(yīng)；適宜的免疫劑量為6月齡以上駱駝每峰3.0 mL。該類型疫苗對(duì)駱駝安全，免疫效果良好；一次接種可同時(shí)預(yù)防O、A、Asia1 3個(gè)血清型的口蹄疫。

安全性試驗(yàn)；最小免疫劑量；口蹄疫滅活疫苗

駱駝作為體型比牛更大的反芻動(dòng)物，亦屬于口蹄疫易感動(dòng)物。目前我國(guó)對(duì)駱駝口蹄疫的研究主要集中在疫苗免疫等防控技術(shù)方面[1]。而國(guó)外研究者則著力研究不同品種駱駝之間口蹄疫病毒的感染及傳播情況等[2-3]。近年來(lái)，隨著人們對(duì)駱駝及其產(chǎn)品需求的加大，烏魯木齊市的駱駝養(yǎng)殖數(shù)量飛速增長(zhǎng)[4]，口蹄疫的發(fā)生幾率也隨之增加。目前國(guó)內(nèi)沒有針對(duì)駱駝的標(biāo)準(zhǔn)口蹄疫免疫方法。對(duì)其免疫，仍參照牛羊的口蹄疫免疫程序進(jìn)行。但由于駱駝在體型及生活習(xí)性等方面與牛羊存在差異，駱駝注射口蹄疫O、A、Asia1型三價(jià)滅活疫苗的安全性及最小免疫劑量有待確定[5]。本試驗(yàn)將駱駝分為4組進(jìn)行口蹄疫疫苗的安全性和最小免疫劑量試驗(yàn)，以期對(duì)烏魯木齊市乳用雙峰駝口蹄疫免疫程序的制定提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 口蹄疫滅活疫苗?？谔阋逴-A-Asia1型三價(jià)滅活疫苗，購(gòu)自金宇保靈生物藥品有限公司，生產(chǎn)批號(hào)5235007，規(guī)格為100 mL/瓶，2～8 ℃保存。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物。選擇健康成年（6月齡以上）駱駝70峰，均未免疫口蹄疫O-A-Asia1型三價(jià)滅活疫苗，免疫抗體效價(jià)≤1∶8。

1.1.3 試驗(yàn)試劑。O、A及Asia1型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)分別為20170210101-3、20170421103-1、201705093101-11。

1.2 方法

1.2.1 疫苗安全性試驗(yàn)。隨機(jī)從上述70峰駱駝中抽選10峰，分為2組，每組5峰。將口蹄疫O-AAsia1型三價(jià)滅活疫苗，分別按照6.0 mL（擬定注射量3.0 mL的2倍）和9.0 mL（擬定注射量3.0 mL的3倍），在頸后部通過(guò)肌肉注射方式免疫2組駱駝，連續(xù)觀察6 d，記錄試驗(yàn)駱駝是否出現(xiàn)不良反應(yīng)或中毒現(xiàn)象。使用前，檢查疫苗中是否有異物、瓶體是否有裂痕或封口不嚴(yán)實(shí)、變質(zhì)等情況。

1.2.2 最小免疫劑量試驗(yàn)。將剩下的60峰駱駝平均分為4組（A、B、C、D組），每組15峰；對(duì)每組駱駝在頸后部肌肉注射口蹄疫O-A-Asia1型三價(jià)滅活疫苗（ A、B、C、D組的注射量劑量分別為4.0、3.0、2.0、1 mL）；30 d后，檢測(cè)其免疫抗體合格率。試驗(yàn)成立條件為：病毒抗原對(duì)照平均OD92值在1.0～2.0范圍內(nèi)；陽(yáng)性對(duì)照血清抗體效價(jià)在1∶1 024 ±1 滴度以內(nèi)；陰性對(duì)照血清抗體效價(jià)＜1∶8。臨界值=病毒抗原對(duì)照平均OD492值×50%。樣品抗體效價(jià)≥1∶64為抗體合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 疫苗安全性試驗(yàn)

疫苗接種10峰駱駝后，在觀察期內(nèi)發(fā)現(xiàn)，2倍擬定劑量（6.0 mL）注射試驗(yàn)組，除體溫出現(xiàn)一過(guò)性升高外，無(wú)其他臨床癥狀或無(wú)不良反應(yīng)，精神、食欲正常，注射部位無(wú)明顯變化，泌乳正常；3倍擬定劑量（9.0 mL）試驗(yàn)組，有1峰體溫升高0.5～1 ℃，泌乳量呈一過(guò)性減少，其余駱駝無(wú)明顯臨床癥狀或不良反應(yīng)，延長(zhǎng)觀察期至2周，全部恢復(fù)正常。

2.2 最小免疫劑量試驗(yàn)

4組試驗(yàn)駱駝免疫1個(gè)月后的抗體合格率見表1，免疫抗體合格率與免疫劑量關(guān)系見圖1。按照我國(guó)重大動(dòng)物疫病免疫方案的要求：口蹄疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)的抗體效價(jià)在l∶64以上（含l∶64）為合格，即認(rèn)為免疫達(dá)到了保護(hù)要求；整體免疫抗體群體保護(hù)率≥70%，即為群體合格。從結(jié)果可以看出，免疫劑量為2.0 mL時(shí)，O、A、Asia1Ⅰ型的免疫抗體合格率均達(dá)到了70%以上，評(píng)定為口蹄疫免疫合格。

表1 口蹄疫免疫抗體合格率

圖1 三種血清型口蹄疫免疫抗體合格率與免疫劑量關(guān)系

3 討論

疫苗安全性試驗(yàn)結(jié)果顯示試驗(yàn)駱駝幾乎未出現(xiàn)疫苗不良反應(yīng)。該結(jié)果與王志剛[6]報(bào)道的疫苗存在不良反應(yīng)有所出入。其原因可能與疫苗本身的產(chǎn)品質(zhì)量、疫苗運(yùn)輸保存及使用的器械干凈衛(wèi)生程度有關(guān)。本次試驗(yàn)所用疫苗在運(yùn)輸途中嚴(yán)格保持在2～8 ℃；所有疫苗注射器械均經(jīng)嚴(yán)格消毒[7]；凡是疫苗中有異物、瓶體有裂痕及密封不嚴(yán)的疫苗均視為失效疫苗處理。注射時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行每注射1頭更換1次針頭。同時(shí)也可能與疫苗種類及免疫方式有關(guān)。王志剛[6]使用的是O和Asia1型單苗，分別注射，而本試驗(yàn)使用的是O-A-Asia1型三價(jià)滅活疫苗1次注射，因此引起的應(yīng)激反應(yīng)相對(duì)較小。

本試驗(yàn)所用疫苗的說(shuō)明書只對(duì)牛羊的免疫劑量做出了說(shuō)明，并未對(duì)駱駝及其他反芻動(dòng)物做詳細(xì)說(shuō)明。因此，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的劑量梯度是建立在疫苗說(shuō)明書基礎(chǔ)上的（牛羊免疫劑量為1.0 mL）。最小免疫劑量試驗(yàn)結(jié)果顯示，免疫劑量為2.0 mL時(shí)，能達(dá)到70%的免疫抗體群體保護(hù)率。疫苗免疫劑量過(guò)量，既造成浪費(fèi)，也會(huì)引起免疫抑制劑、免疫遲緩等現(xiàn)象[8]。但是考慮到駱駝絨皮較牛羊厚，性情沒有牛溫順，易出現(xiàn)吐胃液、甩脖子等現(xiàn)象，且在注射過(guò)程中存在沾壁、漏液等多種因素，為確保注入駱駝體內(nèi)疫苗的含量達(dá)到2 mL，建議將該疫苗的最佳免疫劑量定為3.0 mL/頭份。

[1] 武志峰. 駱駝口蹄疫疫苗免疫及免疫抗體監(jiān)測(cè)分析[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2009（6）：125-126.

[2] DU J，LARSKA M，CHANG H，et al. Molecular cloning and phylogenetic analysis of inte-grins αvβ1 and αvβ6 of one-humped camel（Camelus dromedarius）[J]. Veterinary immunology and immunopathology，2010，135（2）：164-171.

[3] ALEXANDERSEN S，WERNERY U，Nagy P，et al.Dromedaries（Camelus dromedarius）are of low susceptibility to inoculation with foot-and-mouth disease virus serotype O[J].Journal of comparative pathology，2008，13（4）：187-193.

[4] 葉爾江·色爾哈孜，賽力克·庫(kù)魯西，努爾蘭·木合買提，等. 烏魯木齊市駱駝養(yǎng)殖現(xiàn)狀與發(fā)展建議[J]. 新疆畜牧業(yè)，2016（8）：10-14.

[5] 陳文賢，范玉芳. 駱駝注射口蹄疫O型-亞洲I型二價(jià)滅活疫苗免疫抗體消長(zhǎng)檢測(cè)報(bào)告[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2010，17（1）：54-55.

[6] 王志剛. 駱駝注射口蹄疫疫苗后不良反應(yīng)的處置[J]. 當(dāng)代畜牧，2009（12）：18-20.

[7] JEAN-FRANCOIS V，INGRID B，ALEKSEY S，et al. Annual OIE/FAO：FMD reference laboratory network Rreport[EB/OL].[2017-07-01]. http∶//www.iah. bbsrc. ac. uk/vir/picornaviridae/aphtho-virus/index.html，January-November 2005.

[8] JEAN-FRANCOIS V，NICK K，ROSA F，et al. FMD global update 2003—2004[R]. Pirbright：FAO World Reference Laboratory for FMD，2004.

（責(zé)任編輯：朱迪國(guó)）

Safety and Minimum Immunization Dose Tests on FMD Trivalent Inactivated Vaccine of O-A-Asia1 Type for Camels

Wang Tao1，Zhang Yaowen1，Zhang Yinsheng2，Yang Xiaoliang1，Cai Kuojun1，Xu Min1
（1. Urumqi Animal Disease Control and Diagnosis Center，Urumqi，Xinkiang 830063；2. Dabancheng District Animal Husbandry and Veterinary Station，Urumqi，Xinkiang 830039）

In order to determine the safety and immunological effect of O-A-Asia1 type of FMD trivalent inactivated vaccine，the safety test and minimum immunological dose test were conducted for 2 and 3 fold injection dose of FMD，respectively . The results showed that the vaccine was safe for six-month or older camels without any side effects. The appropriate immunization dose was 3.0 mL per camel to six-month camels. This type of vaccine was safe and effective for camels. And O，A and Asia 1 type 3 serotypes of FMD could be prevented by only once vaccination.

safety experiment；minimum immunization dose；FMD inactivated vaccine

S851.3

A

1005-944X（2017）11-0086-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.11.023

新疆烏魯木齊市科技局項(xiàng)目（P151210001）

徐 敏