戴鵬秀 ， 馬琳珊 ， 高永平 ， 宮曉文 ， 張翊華 ， 張欣珂

(西北農(nóng)林科技大學(xué) ， 陜西 楊凌 712100)

西安周邊流浪動(dòng)物救助中心犬牙科疾病調(diào)查報(bào)告

戴鵬秀 ， 馬琳珊 ， 高永平 ， 宮曉文 ， 張翊華 ， 張欣珂

(西北農(nóng)林科技大學(xué) ， 陜西 楊凌 712100)

犬的牙科疾病具有較高的臨床發(fā)病率，但由于未得到臨床獸醫(yī)和動(dòng)物主人的足夠重視，往往引起牙齒脫落等嚴(yán)重后果，甚至引發(fā)其他系統(tǒng)性疾病。為了初步明確犬牙科疾病的流行病學(xué)特征，本研究針對西安市某流浪動(dòng)物救助中心內(nèi)的130只犬進(jìn)行了完整的牙科檢查，并在其中隨機(jī)選取動(dòng)物進(jìn)行口腔細(xì)菌分離鑒定。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，該中心內(nèi)犬只以牙結(jié)石發(fā)病率最高，其次為牙齦炎、牙周炎、牙齒過度磨損及齒折；口腔細(xì)菌分離鑒定得到細(xì)菌37株，包括革蘭陽性需氧菌3個(gè)菌屬的10株菌，革蘭陰性需氧菌9個(gè)菌屬的21種菌，3個(gè)菌屬的6種厭氧菌。分離到的細(xì)菌中條件性致病菌占大多數(shù)。

流浪犬 ； 牙科疾病 ； 臨床調(diào)查 ； 口腔病原菌分離

小動(dòng)物牙科疾病具有發(fā)病率高，發(fā)病隱蔽等特點(diǎn)，因此往往得不到足夠的重視。隨著病程的發(fā)展，常引起口炎、疼痛、進(jìn)食困難、口腔異味、流涎等癥狀，嚴(yán)重的還可導(dǎo)致胃腸道、心血管、腎臟等其他系統(tǒng)性疾病[1-2]。犬作為雜食性動(dòng)物，其采食習(xí)慣、動(dòng)物主人飼養(yǎng)習(xí)慣等因素會(huì)加大牙科疾病的發(fā)病率和嚴(yán)重程度[3]。在對犬的研究中發(fā)現(xiàn)，牙菌斑與牙周疾病，尤其是牙齦疾病呈正相關(guān)關(guān)系，牙菌斑和牙結(jié)石對牙周組織造成的刺激會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的炎癥[1,4]。并且隨著犬年齡的增長，牙齒折斷或磨損加重，由細(xì)菌引起的牙科疾病發(fā)病率還會(huì)升高[5]。

對于本地區(qū)犬牙科疾病的流行病學(xué)調(diào)查仍處于空白階段，臨床醫(yī)生缺乏一手資料學(xué)習(xí)相關(guān)疾病的預(yù)防及治療方法。鑒于此，本調(diào)查針對西安市某流浪動(dòng)物救助中心內(nèi)的130只犬進(jìn)行了詳細(xì)的牙科檢查，統(tǒng)計(jì)并分析了各類牙科疾病的發(fā)病率及發(fā)病特征，同時(shí)對部分犬采集了牙菌斑樣本，進(jìn)行后續(xù)的分離培養(yǎng)以及API生化鑒定、PCR鑒定，以期為本地區(qū)犬牙科疾病的診療提供理論依據(jù)，并對流浪動(dòng)物救助機(jī)構(gòu)的動(dòng)物飼養(yǎng)管理提供建議和指導(dǎo)。

1 試驗(yàn)動(dòng)物

本研究樣本來自于西安市某流浪動(dòng)物救助中心所救助的犬，所有犬只均來自西安市及周邊地區(qū)的流浪犬或棄養(yǎng)犬，其中71%的犬為成年犬，29%的犬為老年犬。

2 方法

2.1 牙科檢查 牙科檢查項(xiàng)目包括：牙齦炎指標(biāo)(GI)、牙周組織指標(biāo)(PDI)、牙結(jié)石指標(biāo)(CI)、齒折指標(biāo)(FrI)、牙齒磨損情況(TW)、齒缺等。

2.2 牙菌斑病原菌分離鑒定 在犬絕育手術(shù)麻醉期間使用滅菌的牙科刮匙對其牙菌斑進(jìn)行取樣，并將樣本接種于不同的培養(yǎng)基，于37 ℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行初代培養(yǎng)，對平板上長出的菌落種類及相對數(shù)量進(jìn)行觀察，記錄菌落的顏色、大小、凸起和表面性狀等特性。根據(jù)菌落生長的形態(tài)、大小、邊緣形狀、溶血特性等形態(tài)和培養(yǎng)特性上的不同，區(qū)分不同菌落，并挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)。取單個(gè)菌落于LB液體培養(yǎng)基，37 ℃，180 r/min搖床進(jìn)行過夜培養(yǎng)。

使用接種環(huán)挑取適量的分離菌純培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色，油鏡觀察。根據(jù)觀察結(jié)果選取不同的API試劑對細(xì)菌進(jìn)行鑒定，使用API Staph對革蘭陽性球菌進(jìn)行鑒定，使用API Coryne對革蘭陽性桿菌進(jìn)行鑒定，使用API 20E對革蘭陰性桿菌進(jìn)行鑒定，使用API NH對嗜血菌、奈瑟菌進(jìn)行鑒定，使用API 20A對厭氧菌進(jìn)行鑒定。

以菌液作為PCR的模板，選用16S rRNA通用引物[8](27F：5′-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3′，1492R：5′-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3′；1F：5′-GATTAGATACCCTGGTAGTCCAC-3′，1R：5′-CCCGGGAACGTATTCACCG-3′)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用DNA純化回收試劑盒對PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA片段回收及測序，測序結(jié)果于NCBI上進(jìn)行比對。

3 結(jié)果

3.1 牙科檢查結(jié)果 本次對救助中心的130只犬進(jìn)行了牙科檢查(檢查統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖1)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)81.5%的犬患有不同程度的牙結(jié)石，70.8% 的犬患有牙齦炎；而牙周炎的發(fā)病率為55.4%。同時(shí)發(fā)現(xiàn)牙齒出現(xiàn)磨損的情況較多，為57.0%，且磨損大多為1～2級，下頜切齒磨損較為嚴(yán)重。另外，在檢查中發(fā)現(xiàn)有11只犬患有口炎，8只犬患有多生齒，19只犬具有咬合不正的問題。

圖1 牙科疾病檢查統(tǒng)計(jì)

3.2 牙菌斑病原分離鑒定結(jié)果 本調(diào)查研究針對130只救助犬只的24個(gè)樣本進(jìn)行分離，通過生化及分子學(xué)鑒定得到37個(gè)菌株(見圖2)，試驗(yàn)結(jié)果如下：

圖2 牙菌斑病原分離鑒定結(jié)果

(1)革蘭陽性需氧菌共發(fā)現(xiàn)3個(gè)菌屬的10種革蘭陽性需氧菌，包括葡萄球菌屬(金黃色葡萄球菌、偽中間型葡萄球菌、馬胃葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、科氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌、琥珀葡萄球菌)、腸球菌屬(糞腸球菌)、放線菌屬(黏性放線菌、溶齒放線菌)。

(2)革蘭陰性需氧菌共發(fā)現(xiàn)9個(gè)菌屬的21種革蘭陰性需氧菌，包括埃希菌屬(大腸埃希菌)、奈瑟菌屬(腦膜炎奈瑟球菌、淋病奈瑟球菌、黏液奈瑟球菌)、不動(dòng)桿菌屬(溶血不動(dòng)桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、魯氏不動(dòng)桿菌、瓊氏不動(dòng)桿菌)、蒼白桿菌屬(中間蒼白桿菌)、假單胞菌屬(惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌、銅綠假單胞菌)、沙門菌屬(腸道沙門菌)、嗜冷菌屬(肺嗜冷桿菌、糞嗜冷桿菌)、志賀菌屬(索氏志賀菌屬、弗氏志賀菌屬)、巴斯德菌屬(犬巴斯德菌、侵肺巴斯德菌、多殺性巴斯德菌、溶血巴斯德菌)。

(3)厭氧菌共發(fā)現(xiàn)3個(gè)菌屬的6種厭氧菌，包括擬桿菌屬(普通擬桿菌、多形擬桿菌、解脲擬桿菌、埃氏擬桿菌)、鏈球菌屬(厭氧消化鏈球菌)、短桿菌屬(乳酸短桿菌)。

4 討論

4.1 牙科疾病分析 犬在進(jìn)食后，牙齒表面會(huì)附著一定量的粘性食物殘?jiān)?，在微生物與唾液的長期作用下形成牙菌斑，牙菌斑進(jìn)一步鈣化形成結(jié)石樣物質(zhì)覆蓋在牙齒表面而形成牙結(jié)石[9]。牙結(jié)石對牙周深層組織的蔓延引起的牙齦黏膜的炎癥稱為牙齦炎，當(dāng)牙齦炎繼續(xù)發(fā)展而得不到治療時(shí)就會(huì)發(fā)展為牙周炎，并出現(xiàn)不可逆的癥狀及病變，牙周骨組織丟失、牙齦的腫脹或萎縮牙周袋形成是牙周炎最重要的病理性改變[1]。這些牙科疾病可以引發(fā)嚴(yán)重的口腔異味、齒齦出血、齲齒、齒折與齒根膿腫等癥狀，犬表現(xiàn)為輕度食欲減退，進(jìn)食困難甚至發(fā)展為停止進(jìn)食，隨后動(dòng)物可能出現(xiàn)消瘦和營養(yǎng)不良[9]。本次對西安市某流浪動(dòng)物救助中心救助的犬進(jìn)行牙科檢查發(fā)現(xiàn)，大部分的犬患有牙結(jié)石，牙齦炎，牙周炎等問題，個(gè)別犬只因?yàn)檫@些問題已出現(xiàn)食欲減退等問題。該救助中心在本次調(diào)查研究之前一直給動(dòng)物飼喂用雞骨架湯泡軟的狗糧，偏軟性的食物容易導(dǎo)致食物粘附在牙齒表面和牙周袋內(nèi)，引發(fā)各類口腔問題。此外，由于該中心飼養(yǎng)的犬只數(shù)量過多，以及其他多方面條件的限制，無法對所有動(dòng)物進(jìn)行應(yīng)有的口腔護(hù)理，中心管理人員也沒有對該類疾病有充分的認(rèn)識。這些因素共同導(dǎo)致了中心內(nèi)動(dòng)物牙周疾病的高發(fā)病率。目前，此動(dòng)物救助中心已經(jīng)針對這一情況通過飲食結(jié)構(gòu)改變以及改善管理來減少犬牙科疾病的發(fā)生，并且后期會(huì)根據(jù)犬只的牙齒疾病情況而制定具體的治療措施。

動(dòng)物牙齒磨損的程度與多種因素有關(guān)，諸如動(dòng)物的食性、行為、年齡及環(huán)境等都是其重要誘發(fā)因素，其嚴(yán)重程度與年齡呈正相關(guān)。引起犬發(fā)生齒折的原因主要有兩個(gè)：外力作用或鈣攝人不足。在本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，有超過50%的犬牙齒出現(xiàn)不同程度的磨損，這可能與犬只的年齡結(jié)構(gòu)有關(guān)；齒折的發(fā)生率相對較低，這可能是因?yàn)榱骼藙?dòng)物救助中心對于所救助的犬實(shí)行分舍飼養(yǎng)，輪流活動(dòng)，這很大程度上避免或減少了犬只之間的打斗，從而降低了齒折及其他外傷的發(fā)生概率。而救助中心對于犬的飼喂，做到了營養(yǎng)充足甚至過量，因此由鈣攝入不足而引起齒折的發(fā)生率非常小，所以這些犬的齒折問題大都是由于啃咬舍門造成或者是在進(jìn)入救助中心之前就已發(fā)生齒折。

4.2 牙菌斑病原菌與牙科疾病 犬的口腔內(nèi)聚積著大量各種各樣的微生物，這些微生物的組成結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，其中包含大量不同種類及不同毒性的細(xì)菌，這為牙菌斑(粘附于牙體表面、牙齒間隙等硬的口腔結(jié)構(gòu)表面軟而未礦化的細(xì)菌生物膜)的形成提供了重要條件[10]。牙菌斑的形成大致可分為獲得性薄膜的形成、細(xì)菌的粘附和集聚以及牙菌斑的成熟這3個(gè)階段，其是牙周病的重要致病因素[11]。本次調(diào)查對取自被救助的流浪犬的24個(gè)牙菌斑樣本進(jìn)行了病原菌分離鑒定，并對37個(gè)菌株進(jìn)行了生化及分子學(xué)鑒定。其中包括革蘭陽性需氧菌的3個(gè)菌屬10種菌、革蘭陰性菌的9個(gè)菌屬21種菌以及3個(gè)菌屬的6種厭氧菌，這些菌屬及菌株與之前人、犬、貓的口腔病原菌的研究較為接近。

大多數(shù)常見的口腔感染包括牙周病、牙髓炎及牙根尖周炎與口腔中積聚的牙菌斑及牙結(jié)石密切相關(guān)，這些病理過程往往是由于細(xì)菌引起[10]。動(dòng)物試驗(yàn)表明，鏈球菌屬和放線菌屬均可誘導(dǎo)牙周的骨吸收，并且放線菌常作為球菌粘附的支架，參與并加速牙菌斑形成，厭氧消化鏈球菌是口腔中的條件致病菌，可從牙周炎、牙髓炎等牙科疾病的臨床標(biāo)本中分離出來[12]。假單胞菌在環(huán)境中大量存在，也屬于條件性致病菌，但在口腔環(huán)境正常的犬中，其檢出率較低[13]。在本次的調(diào)查中均鑒定出了上述致病菌，這些致病菌的存在會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致犬牙科疾病的發(fā)展，應(yīng)給予及時(shí)的治療。犬口腔中的不動(dòng)桿菌在一定條件下可引起呼吸道感染、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、傷口及皮膚感染、泌尿生殖道感染等[14]，在本次調(diào)查研究中同樣被檢出。同時(shí)某些致病性葡萄球菌(如：金黃色葡萄球菌、偽中間葡萄球菌、腐生葡萄球菌)，致病性巴斯德菌(如：溶血巴斯德菌、侵肺巴斯德菌)也被檢出[14]。上述細(xì)菌可能是引起犬其他疾病的重要因素，包括呼吸系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病等[15]。同時(shí)，這些細(xì)菌也可通過被犬咬傷，與犬親密接觸等途徑引發(fā)嚴(yán)重的感染而威脅到人的健康和安全。綜上所述，救助中心所救助的犬口腔中的微生態(tài)平衡大多已遭到一定程度的破壞，因此在治療犬牙科疾病時(shí)，不能僅僅通過飲食結(jié)構(gòu)改變以及改善管理來減少犬牙科疾病的發(fā)生，應(yīng)該結(jié)合特定的治療方法，恢復(fù)正常菌群的比例和作用，從而達(dá)到預(yù)期效果。

5 結(jié)論

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)此流浪動(dòng)物救助中心所救助的犬口腔中的微生態(tài)平衡已遭到一定程度的破壞，絕大多數(shù)犬患有牙結(jié)石、牙齦炎及牙周病等牙科疾病，牙齒磨損情況較多，但齒折的發(fā)生相對較少。因此此流浪動(dòng)物救助中心應(yīng)根據(jù)犬只的牙科疾病情況改善飼養(yǎng)方式，并進(jìn)一步制定具體的預(yù)防及治療措施，也希望此調(diào)查結(jié)果能夠?yàn)榧茵B(yǎng)犬牙科疾病的診斷和治療提供參考。

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S858.292

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0529-6005(2017)09-0082-03

2017-04-25

戴鵬秀(1991-)，男，博士生，研究方向?yàn)閯?dòng)物臨床疾病與組織工程，E-mail:dpx910405@163.com

張欣珂，E-mail:zhxk1983@sina.com