宮惠敏 張弘馳 張瑞敏

牙周基礎(chǔ)治療對口腔扁平苔蘚伴慢性牙周炎患者外周血MMP-3及IFN-γ水平的影響

宮惠敏 張弘馳 張瑞敏

目的觀察牙周基礎(chǔ)治療前后口腔扁平苔蘚伴慢性牙周炎患者血清中基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)和干擾素-γ(IFN-γ)濃度的變化。方法選取60 例診斷為伴有牙周炎的糜爛型口腔扁平苔蘚患者，隨機(jī)分為2 組，其中實(shí)驗(yàn)組30 例進(jìn)行牙周基礎(chǔ)治療聯(lián)合藥物治療，治療前后，檢測牙周指數(shù)PD、AL、BI和PLI。對照組30 例采取藥物治療。用ELLSA檢測治療前后2 組患者血清中MMP-3及IFN-γ的表達(dá)水平，分析各組細(xì)胞因子濃度的差異。結(jié)果治療后實(shí)驗(yàn)組牙周指數(shù)明顯下降(P<0.05)；2 組患者血清中的MMP-3及IFN-γ表達(dá)水平與治療前相比下降(P<0.05)；經(jīng)過治療后，實(shí)驗(yàn)組MMP-3及IFN-γ表達(dá)水平下降趨勢較對照組明顯(P<0.05)。結(jié)論牙周基礎(chǔ)治療在口腔扁平苔蘚治療中起到了積極作用，可有效降低炎癥水平。

口腔扁平苔蘚(OLP)； 慢性牙周炎(CP)； 干擾素-γ； 基質(zhì)金屬蛋白酶-3； 牙周基礎(chǔ)治療

口腔扁平苔蘚(oral lichen planus,OLP)是一種常見的口腔黏膜炎性疾病，病因尚不明確。局部免疫反應(yīng)在OLP的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，其炎癥情況由局部細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)決定[1]。牙周病的發(fā)生涉及一系列免疫炎癥反應(yīng)。干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)作為最典型的Th1型細(xì)胞因子，在免疫應(yīng)答過程中能激活巨噬細(xì)胞，提高吞噬作用，增加炎性細(xì)胞因子(如IL-12)的分泌[2]。MMP-3作為基質(zhì)金屬蛋白酶家族(matrix metalloproteinases,MMPs)中的一員，其主要作用是降解IV型膠原和層黏連蛋白，還能激活基質(zhì)中的proMMP-1和proMMP-9[3]。

本研究通過檢測OLP伴慢性牙周炎(chronic periodontitis, CP)患者在牙周基礎(chǔ)治療前后，血清中MMP-3及IFN-γ的表達(dá)水平，觀察比較其變化，探討牙周干預(yù)對OLP患者治療的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2013～2014 年在哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院牙周黏膜科診斷為糜爛型OLP伴有CP患者60 例作為研究對象，其中男性23 例，女性37 例。將其隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組30 例和對照組30 例，2 組患者在年齡、性別上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。所有患者均知情同意并有良好的依從性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《口腔黏膜病學(xué)》第4版提出的OLP診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②符合1999 年國際牙周病新分類CP診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，全口余留牙數(shù)大于20 顆。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有糖尿病、類風(fēng)濕或心血管等全身系統(tǒng)性疾??；②有傳染性疾病或感染性疾病；③6 個(gè)月內(nèi)采用抗生素及免疫調(diào)節(jié)藥物治療；④1 年內(nèi)接受過牙周治療；⑤有長期吸煙史；⑥妊娠期及哺乳期女性。

1.2 牙周臨床檢查

牙周檢查均由同一名口腔醫(yī)師完成，檢查包括使用牙周探針在每顆牙齒的6 個(gè)位點(diǎn)(頰、舌面的近中、中央、遠(yuǎn)中)測量其探診深度(probing depth, PD),附著喪失(attachment loss,AL)，出血指數(shù)(bleeding index,BI)和菌斑指數(shù)(plaque index,PLI)。其中出血指數(shù)采用Mazzad 的記分標(biāo)準(zhǔn)0，1，2，3，4，5；菌斑指數(shù)采用 Silness和L?e的記分方法，記分標(biāo)準(zhǔn)分為0，1，2，3。

1.3 治療方法

對照組患者采用地塞米松局部應(yīng)用聯(lián)合口服羥氯喹及白芍總苷膠囊的藥物治療。實(shí)驗(yàn)組患者在同對照組治療的基礎(chǔ)上接受牙周基礎(chǔ)治療，包括口腔衛(wèi)生宣教，全口齦上潔治術(shù)、齦下刮治術(shù)等。治療4周后復(fù)查，記錄治療前及治療4 周后牙周臨床指標(biāo)。

1.4 MMP-3及IFN-γ的檢測

分別采集2 組患者治療前和治療4 周后清晨空腹外周靜脈血5 ml，離心后取上清液，保存于-80 ℃冰箱備用。采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測各組血清中MMP-3及IFN-γ的表達(dá)水平，操作嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)組經(jīng)牙周基礎(chǔ)治療后，牙周指標(biāo)PD，AL，BI，PLI顯著低于治療前水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表 1)。

實(shí)驗(yàn)組經(jīng)牙周基礎(chǔ)治療后，血清中MMP-3及IFN-γ表達(dá)水平與治療前相比下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對照組單純藥物治療后相比，血清中MMP-3及IFN-γ表達(dá)水平下降明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表 2)。

3 討 論

研究表明，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)與OLP的發(fā)生密切相關(guān)。T細(xì)胞被激活產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子(如IL-2，IFN-γ等)促進(jìn)了T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。IFN-γ是Th1 細(xì)胞的特征型細(xì)胞因子,能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化和Th1細(xì)胞的分化。在OLP患者的血清和口腔黏膜中檢測到高水平表達(dá)的IFN-γ，浸潤的T淋巴細(xì)胞中也含有IFN-γ mRNA[6]。Zhu等[7]通過檢測3 種不同類型扁平苔蘚患者和對照組人群唾液和血清中IFN-γ濃度，得出IFN-γ在OLP的發(fā)展中具有重要作用的結(jié)論。多年前已有報(bào)道表明T細(xì)胞在慢性牙齦炎癥中扮演了重要角色，T細(xì)胞及其分泌的一些細(xì)胞因子也是牙周炎發(fā)展過程的關(guān)鍵因素。Takashi研究團(tuán)隊(duì)選取23 名牙周病患者(包括牙周炎和牙齦炎)，經(jīng)過基礎(chǔ)治療后行牙齦活組織檢查及免疫組化，發(fā)現(xiàn)生成IFN-γ的細(xì)胞廣泛存在于牙齦結(jié)締組織中，且其數(shù)量隨著炎癥的嚴(yán)重程度和探診深度的增加而增加，并得出IFN-γ與嚴(yán)重牙周組織損害相關(guān)的結(jié)論[8]。之后Giovanna等[9]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)與健康對照組相比，IFN-γ在患有慢性牙周炎的實(shí)驗(yàn)組牙齦標(biāo)本中高表達(dá)，再次證明了IFN-γ與慢性牙周炎的密切聯(lián)系。

MMPs是一系列能降解結(jié)締組織基質(zhì)蛋白的酶類，其中MMP-3能降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，還能降解基底膜的主要成分Ⅳ型膠原及層粘連蛋白等。OLP病理變化之一是基底細(xì)胞液化變形、基底膜發(fā)生改變，基底膜的改變可能引起角化細(xì)胞凋亡，角化細(xì)胞的凋亡又加快了基底膜的損傷，如此機(jī)制造成了疾病的慢性過程[10]。Farzneh等[11]通過ELISA在OLP患者和口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)患者的唾液和血清中均檢測到MMP-3的存在，且OSCC患者組的MMP-3濃度是OLP患者組的2 倍之多，表明了MMP-3濃度與OLP及OSCC相關(guān)。Mazzarella等[12]通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)糜爛型OLP 患者中MMP-3的表達(dá)高于斑紋型OLP患者，MMP-3和MMP-9在糜爛型OLP中呈有意義的正相關(guān)關(guān)聯(lián)。作為口腔免疫炎癥性疾病的牙周炎，有學(xué)者實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明MMP-3和MMP-8在慢性牙周炎患者中的濃度高于健康對照組，且在非手術(shù)治療后，高濃度的MMP-3和MMP-8顯著降低，提示MMP-3參與了慢性牙周炎發(fā)展過程中組織破壞環(huán)節(jié)[13]。還有學(xué)者選取美國青少年局限性侵襲性牙周炎患者，經(jīng)過牙周基礎(chǔ)治療、刮治術(shù)、根面平整術(shù)及藥物治療后，證明牙周治療可有效減少患者M(jìn)MPs表達(dá)水平[14]。以上都表明了MMP-3可能作為OLP患者嚴(yán)重程度和牙周炎患者預(yù)后的動(dòng)態(tài)檢測指標(biāo)之一。

本研究選擇MMP-3及IFN-γ作為檢測指標(biāo)，對照OLP患者在藥物治療基礎(chǔ)上進(jìn)行牙周治療前后血清濃度及臨床療效?？诜u氯喹和白芍總苷的藥物治療，不僅可以降低羥氯喹的副作用，而且對于糜爛型損害的療效較佳[15]。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組血清中MMP-3及IFN-γ下降趨勢較對照組顯著，充血糜爛面積明顯縮小，疼痛減輕，在一定程度上表明牙周干預(yù)能降低炎癥水平，與Daniela S等相關(guān)研究結(jié)果一致[16]。由于OLP伴牙齦病損通常持久而痛苦,從而限制有效刷牙，這將導(dǎo)致菌斑堆積,牙齦炎癥水平上升，可能會(huì)增加慢性牙周炎的可能性[17]。OLP引起的炎性浸潤可能加重牙周組織的破壞，而牙周組織狀況作為局部刺激因素同樣會(huì)加重OLP的癥狀[18]。本課題組前期發(fā)現(xiàn)OLP患者經(jīng)牙周治療后，血清中TNF-α、OPN及IL-17顯著降低，IL-6有降低趨勢[19-20]。提示了牙周炎癥可能是OLP危險(xiǎn)因素之一，去除局部刺激因素可降低炎癥水平。以上都間接表明了OLP和牙周炎的密切聯(lián)系，因此OLP患者在藥物治療的同時(shí)，輔助牙周基礎(chǔ)治療不可忽視。而牙周感染與OLP相互影響的具體機(jī)制仍需更大的樣本量和遠(yuǎn)期療效觀察進(jìn)行深入研究。

[1] Boorghani M, Gholizadeh N, Taghavi Zenouz A, et al. Oral lichen planus: Clinical features, etiology, treatment and management; a review of literature[J]. J Dent Res Clin Dent Prospects, 2010, 4(1): 3-9.

[2] Bai J, Lin M, Zeng X, et al.Association of polymorphisms in the human IFN-gamma and IL-4 gene with oral lichen planus: A study in an ethnic Chinese cohort[J].J Interferon Cytokine Res, 2008, 28(6): 351-358.

[3] Zhou XJ, Sugerman PB, Savage NW, et al. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in oral lichen planus[J]. J Cutan Pathol Pathol, 2001, 28(2): 72-82

[4] 陳謙明. 口腔黏膜病學(xué)[M]. 4版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社， 2012: 103-110.

[5] 孟煥新. 牙周病學(xué)[M]. 4版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社， 2013: 168-171.

[6] Simark Mattsson C, Jontell M, Bergenholtz G, et al. Distribution of interferon-gamma mRNA-positive cell in oral lichen planus lesions[J]. J Oral Pathol Med, 1998, 27(10): 483-488.

[7] Zhu JH, Liu N, Zhao CR,et al.Interferon-gamma and interleukin-10 levels in serum and saliva are related to different types of oral lichen planus[J]. 中國組織工程研究, 2015， 819(2): 236-239.

[8] Ukai T, Mori Y, Onoyama M, et al. Immunohistological study of interferon-γ and interleukin-4-bearing cells in human periodontitis gingiva[J]. Arch Oral Biology, 2001, 46(10): 901-908.

[9] Souto GR, Queiroz-Junior CM, de Abreu MH, et al. Pro-inflammatory,Th1,Th2,Th17 cytokines and dendritic cells: A cross-sectional study in chronic periodontitis[J]. PLoS One, 2014, 9(3): e91636.

[10]Roopashree MR, Gondhalekar RV, Shashikanth MC, et al.Pathogenesis of oral lichen planusa-A review[J]. J Oral Pathol Med, 2010, 39(10): 729-734.

[11]Agha-Hosseini F, Mirzaii-Dizgah I, Mahboobi N, et al. Serum and saliva MMP-3 in patients with OLP and oral SCC[J]. J Contemp Dent Pract, 2015, 16(2)： 107-111.

[12]Mazzarella N, Femiano F,Gombos F, et al．Matrix metalloproteinase gene expression in oral lichen planus: Erosive vs.reticular forms[J]． J Eur Acad Dermatol Venereol, 2006,20(8): 953-957.

[13]Romero AM, Mastromatteo-Alberga P, Escalona L, et al. MMP-3 and MMP-8 levels in patients with chronic periodontitis before and after nonsurgical periodontal therapy[J]. Invest Clin, 2013, 54(2): 138-148.

[14] Gon?alves PF, Huang H, McArinley S, et al. Periodontal treatment reduces matrix metalloproteinase levels in localized aggressive periodontitis[J]. J Periodontol, 2013, 84(12): 1801-1808.

[15]唐國瑤, 周曾同. 口腔黏膜病臨床治療IV.口腔扁平苔蘚的診斷及治療進(jìn)展[J]. 中華口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 41(112): 697-699．

[16]Salgado DS, Jeremias F, Capela MV, et al.Plaque control improves the painful symptoms of oral lichen planus gingival lesions. A short-term study[J]. J Oral Pathol Med, 2013, 42(10): 728-732.

[17]López-Jornet P, Camacho-Alonso F. Periodontal conditions in patients with oral lichen planus: A pilot study[J]. Quintessence Int, 2012, 43(2): 147-152.

[18]Ertugrul AS, Dursun R, Dundar N, et al.MMP-1, MMP-9, and TIMP-1 levels in oral lichen planus patients with gingivitis or periodontitis[J]. Arch Oral Biol, 2013, 58(7): 843-852.

[19]徐曉滿, 詹淵博, 張瑞敏. 牙周基礎(chǔ)治療對口腔扁平苔蘚患者外周血TNF-α及IL-6水平的影響[J]. 口腔醫(yī)學(xué)研究, 2014, 30(9): 854-857.

[20]張弘馳, 劉麗莎, 張瑞敏. 牙周基礎(chǔ)治療對扁平苔蘚患者血清中OPN和IL-17水平的影響[J]. 口腔醫(yī)學(xué)研究, 2016, 22(2): 165-167.

TheimpactofinitialperiodontaltherapyontheperipheralbloodMMP-3andIFN-γlevelsinpatientswithorallichenplanusandchronicperiodontitis

GONGHuimin,ZHANGHongchi,ZHANGRuimin.

150086，DepartmentofOralMedicineandPeriodontics,TheSecondClinicalCollege,HarbinMedicalUniversity,China

Objective: To investigate the significance of periodontal treatment on the levels of MMP-3 and IFN-γ in the serum of patients with oral lichen planus(OLP) and chronic periodontitis(CP) before and after treatment.Methods60 patients with erosion OLP and CP were divided into 2 groups randomly(n=30). The patients in experimental group

basic periodontal treatment combined with drug therapy, those in control group received drug therapy only. Before and after treatment the periodontal indexes of PD, AL, BI and PLI were measured in the experimental group, the levels of MMP-3 and IFN-γ in serum were tested by ELISA in the 2 groups, the differences of the data between 2 groups were statistically analysed.ResultsAfter treatment the periodontol indexes were decreased in the experimental group(P<0.05), the serum MMP-3 and IFN-γ levels were lower than those before treatment in 2 groups(P<0.05),and the decline of MMP-3 and IFN-γ in experimental group was more obvious than those in the control group(P<0.05).ConclusionPeriodontal initial therapy has positive influence on the treatment of OLP and can reduce the level of inflammation.

Orallichenplanus(OLP);Chronicperiodontitis(CP);IFN-gamma;MMP-3;Periodontalinitialtherapy

150086, 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院口腔牙周黏膜科

張瑞敏 E-mail: yzzhangrm@126.com

R781.5

A

10.3969/j.issn.1001-3733.2017.04.025

(收稿： 2016-12-03 修回： 2017-04-29)