楊曉芳　王欣

【摘要】本文通過了解昌吉地區(qū)丙型肝炎基因分型的分布情況并探討其臨床意義，得出結(jié)論，昌吉地區(qū)丙型肝炎病毒基因型流行株為1b和2a型，其次為3b.3a，其中以1b型和2a為主，研究本地區(qū)HCV基因分型對(duì)HCV感染制定個(gè)體化治療方案提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】丙型肝炎；基因分型分布特點(diǎn)；臨床意義

【中圖分類號(hào)】R512.63 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2017.11..01

丙型肝炎病毒（HCV）感染是引起全球肝炎，肝硬化，肝腹水，肝癌的重要因素之一，根據(jù)HCV基因型可以了解不同基因型和亞型的地理分布，明確病毒的種系發(fā)育和傳播途徑，由于不同的基因型對(duì)藥物敏感程度不同，歐洲肝臟研究學(xué)會(huì)2013年HCV感染診治指南中，各基因型HCV的治療方案也有區(qū)別[1]，明確HCV的基因分型，有助于判讀治療的難易程度及制定抗病毒治療的個(gè)體化方案。本文旨在初步了解昌吉地區(qū)丙型肝炎患者的病毒基因分布情況，并探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取2015年5月～2016年12月昌吉地區(qū)HCV確診患者125例的外周靜脈血血清，其中男67例，女58例，男性患者年齡20～79歲，女性患者年齡22～76歲，且排除其他類型肝炎病毒感染的病例。

1.2 主要儀器和試劑

7300型熒光實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀為美國AB公司產(chǎn)品，HCV RNA基因檢測試劑盒為廣州達(dá)安基因有限公司提供。

1.3 方法

HCV基因檢測：血清標(biāo)本處理及逆轉(zhuǎn)錄，RNA的提取在200 uL血清標(biāo)本中加入50 uL蛋白酶K，，加入200 uL病毒裂解液（已含Carrier RNA）振蕩混勻，高速離心10 s（防止混勻時(shí)產(chǎn)生氣泡），72度放置10 min，同時(shí)洗脫液置于-72度預(yù)熱。加入250 uL，無水乙醇振蕩混勻，將混合液全部吸入離心柱，12000 rpm離心1 min，將離心柱至新的收集管加入500 uL抑制物去除液，12000 rpm離心1 min，再將離心柱注入新的收集管，加入500ul去離子水，12000 rpm離心1 min，此步驟重復(fù)兩遍，最后14000 rmp離心3 min，72度干浴2 min，在離心柱中加入30 uL洗脫液，靜止1分鐘，12000 rmp離心1 min，取HCV-RNA反應(yīng)管若干，分別加入制備的RNA30ul瞬時(shí)離心，將各反應(yīng)管放入PCR擴(kuò)增儀中，按下列條件50度逆轉(zhuǎn)錄25 min，95度15 min預(yù)變性，然后按（94度30 s，55度40 s，72度45 s）45個(gè)循環(huán)擴(kuò)增）

1.4 雜交反應(yīng)

膜條進(jìn)行編號(hào)，將純化的產(chǎn)物用斑點(diǎn)反向雜交法進(jìn)行雜交。嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行操作。最后將膜條上顯色的位點(diǎn)與試劑盒所給出的標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行比對(duì)，確定HCV的基因型。

2 結(jié) 果

2.1 HCV基因型結(jié)果分析

125例HCV患者血清標(biāo)本中，115例能檢出HCV基因分型，檢出率為92%，10例患者因病毒載量太低，無法進(jìn)行基因分型檢測，115例標(biāo)本中檢出5種基因型分別為1b、2a、3b、3a、6a，其中所占比例為1b 51.2%（64/125），2a 26.4%（33/125），3b為4.8%（6/125），3a 5.6（7/125），混合型的為三種1b+2a位2.4%，（3/125），2a+6a 0.8%（1/125），1b+2a 0.8%（1/125）。

2.2 HCV基因型的性別、年齡分布

對(duì)HCV基因不同組進(jìn)行比較，基因1b64例其中男性28例占43.7%，基因2a為33例，其中男性占19例占57.5%。按年齡分組其中>50歲患者62例，≥50歲患者53例，進(jìn)行組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≥0.05）。

3 討 論

丙型肝炎病毒在全球廣泛流行，據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，全球約1.7億人感染丙肝，感染率為3%，每年新發(fā)HCV感染病例約為300萬～400萬[2]。人感染丙型肝炎病毒后比感染乙型肝炎病毒更容易轉(zhuǎn)化成慢性肝炎，并可能發(fā)展成肝硬化和肝癌。HCV基因型的檢測與HCV感染者抗病毒治療的療程，及預(yù)后等方面都有很大的相關(guān)性。HCV基因型的研究一直是丙型肝炎病毒研究的熱點(diǎn)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在我國不同地區(qū)HCV基因也存在一定的差異性，我國的主要基因型為1b型，其次為2a型?；旌闲蛣t主要在輸血史及吸毒患者中相對(duì)多見[3]。本研究結(jié)果顯示昌吉地區(qū)HCV存在5種基因型，5種基因型分別為1b、2a、3b、3a、6a，其中所占比例為1b 51.2%（64/125），2a 26.4%（33/125），3b 4.8%（6/125），3a 5.6%（7/125），混合型的為三種1b+2a為12.4%（3/125），2a+6a 0.8%（1/125），1b+2a 0.8%（1/125），有10例HCV患者因RNA含量低，外周靜脈血未檢出基因型。HCV基因型的性別，年齡進(jìn)行組間比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同基因型丙型肝炎患者的臨床癥狀、疾病發(fā)展以及預(yù)后均存在一定差異，對(duì)HCV基因型的研究有助于了解丙型肝炎的危險(xiǎn)因素，及肝臟疾病的進(jìn)展情況，從而為疾病治療方案的個(gè)體化制定提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 曾勁峰，盧 亮，孫元璋，等.國產(chǎn)HCV-RNA分型試劑盒檢測結(jié)果分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，38（2）：157-159.

[2] 耿 田.丙型肝炎病毒基因分型的檢測方法及臨床意義[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，22（16）：1925-1928.

[3] 冀 敏.丙型肝炎患者基因分型與抗HCV、HCV-RNA的相關(guān)性研究[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2017，35（2）：48-49.

本文編輯：劉欣悅endprint