季艷艷 楊正貴 張宏艷

耐亞胺培南肺炎克雷伯菌耐藥基因的檢測分析

季艷艷 楊正貴 張宏艷

目的分析耐亞胺培南肺炎克雷伯耐藥基因檢測效果，并對耐藥機制進行分析。方法選取近3年分離出的260株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌，采用新型耐藥基因檢查方法，對藥物濃度進行分析。結(jié)果Hodge檢查結(jié)果顯示，260株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌中240株檢查結(jié)果為陽性，20株為陰性，陽性率為92.3%。對β-內(nèi)酰胺酶基因分析顯示，有225株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌產(chǎn)生KPC-2型碳青霉烯酶，其余耐亞胺培南肺炎克雷伯菌擴增出SHV型β-內(nèi)酰胺酶基因。結(jié)論耐亞胺培南肺炎克雷伯菌的衍生因素比較復(fù)雜，在實踐階段需要做好耐藥基因檢查工作，只有做好檢測工作，才能確定病菌類型。

耐亞胺培南肺炎克雷伯菌；耐藥性；基因檢測

作者單位：553536 六盤水，貴州省盤江煤電投資控股集團公司總醫(yī)院檢驗科

肺炎克雷伯菌是臨床研究中常見的一種致病菌類型，其耐藥性逐漸提高。碳青霉烯類藥物在治療革蘭氏陰性菌引起的各種感染中有重要的作用[1]。耐亞胺培南肺炎克雷伯耐藥基因檢測是當前臨床研究的重點所在，醫(yī)護人員需要了解耐藥性相關(guān)工作，按照要求進行檢測和分析，提高檢測準確率[2]。為了分析耐亞胺培南肺炎克雷伯菌耐藥基因檢測效果，對耐藥機制進行分析，本研究選取分離出的260株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌，采用新型耐藥基因檢查方法，對藥物濃度進行分析。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 選取近3年分離出的260株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌，采用新型耐藥基因檢查方法，對藥物濃度進行分析。

1.2 菌株測定 采用本院現(xiàn)有的鑒定方式進行，掌握藥敏實驗流程，按照菌株鑒定和藥物敏感要求進行測定。

1.3 細菌基因模板檢查 根據(jù)細菌基因模板檢查方法的具體要求，對革蘭氏陰性桿菌檢測采用復(fù)合板條（BDPhoe-nixTMNMIC/ID-4）進行菌株鑒定及藥物敏感試驗。此外需要進行模板制備，采用OMEGA-bio-tek公司生產(chǎn)的小量質(zhì)粒試劑盒進行抽取和檢查，質(zhì)粒最終設(shè)定為50 μL。

1.4 耐藥性檢查 耐藥性檢查以PCR為主，檢查方式以頭孢素酶和超光譜β-內(nèi)酰胺酶為主，耐藥基因檢查結(jié)果可直接對檢測效果產(chǎn)生影響，因此必須按照流程進行。此外在整合子檢查階段，采用PCR方式，根據(jù)序列的應(yīng)用要求進行。避免出現(xiàn)產(chǎn)物測試不合理或者其他現(xiàn)象。根據(jù)產(chǎn)物含量以及指標具體要求，可采用直接測試的方式，所測定的序列需要和數(shù)據(jù)庫保持一致。

2 結(jié)果

2.1 Hodge檢查結(jié)果 Hodge檢查結(jié)果顯示，260株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌中240例檢查結(jié)果為陽性，20例為陰性，陽性率為92.3%。

2.2 β-內(nèi)酰胺酶基因檢查結(jié)果 β-內(nèi)酰胺酶基因檢查結(jié)果顯示，有225株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌產(chǎn)生KPC-2型碳青霉烯酶，其余耐亞胺培南肺炎克雷伯菌擴增出SHV型β-內(nèi)酰胺酶基因，見圖1。

2.3 敏感性分析 對耐藥率分析顯示，抗菌藥物中頭孢西丁、氨曲南、頭孢他啶、頭孢曲松的耐藥率無明顯變化，見表1。

圖1 KPC-2實驗菌株分析

表1 耐藥性分析

3 討論

耐亞胺培南肺炎克雷伯菌屬于有條件性的致病菌，老年人比較常見，耐藥菌株比較多，只有做好耐藥性檢查工作，才能滿足實驗檢查要求[3]。

部分患者病情比較嚴重，機體免疫力低下，抗感染能力差，患者接受較多的治療和監(jiān)護，在治療階段大量應(yīng)用抗生素，對患者自身有一定的消極影響[4]。此外重癥監(jiān)護室采用的是封閉或者半封閉管理模式，室內(nèi)消毒存在問題，感染幾率比較高，對患者產(chǎn)生直接影響。醫(yī)院感染的發(fā)生幾率較高，產(chǎn)生耐藥菌的機會也高于普通病房，在檢查過程中需要做好患者病情分析工作，合理采取藥物進行治療。碳青霉烯類抗菌藥物在臨床研究中有重要的作用，也被臨床研究人員認為是治療多重耐藥菌的最后一道防線，隨著臨床用藥的逐漸深入，在藥物檢查過程中需要以抗菌藥物的具體檢查作為基礎(chǔ)，保證耐藥性的有效性[5]。

為了避免出現(xiàn)耐藥性檢查不合理或其他現(xiàn)象，需要做好抑制劑的應(yīng)用工作，以β-內(nèi)酰胺藥物為主，對轉(zhuǎn)到普通病房的患者進行細菌檢查，分子生物學(xué)檢查可知，在藥物機制判斷過程中，需要做好布局工作，保證病房通風(fēng)，避免出現(xiàn)感染的現(xiàn)象[6,7]。

本研究中，Hodge檢查結(jié)果顯示，260株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌中240例檢查結(jié)果為陽性，20例為陰性，陽性率為92.3%。本研究中，β-內(nèi)酰胺酶基因檢查結(jié)果顯示，有225株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌產(chǎn)生KPC-2型碳青霉烯酶，其余耐亞胺培南肺炎克雷伯菌擴增出SHV型β-內(nèi)酰胺酶基因。結(jié)果證實耐藥性比較特殊，需要醫(yī)護人員提前掌握細菌類型，根據(jù)檢查流程進行，保證整體檢測的合理性和準確性。說明在實踐檢查中對患者采用基因檢查方式，可提升檢查的準確性，由于數(shù)據(jù)本身不具有同源性，需要進一步證實。

1 曹慧玲,舒釗徹,楊琳,等.亞胺培南與舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用對多重耐藥肺炎克雷伯菌的體外試驗研究.實用醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(3): 475-478.

2 馮福英,洪宇,楊湘越,等.耐亞胺培南肺炎克雷伯菌耐藥基因檢測與分子流行病學(xué)研究.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2016,26(12): 2650-2653.

3 豆清婭,鄒明祥,李春輝,等.耐亞胺培南肺炎克雷伯菌的耐藥機制研究.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2016,26(13): 2906-2909.

4 徐祥,歐琴,李蓓.1株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌分型、耐藥機制及毒力研究.臨床檢驗雜志,2013,31(2): 155-157.

5 王冬國,張麗婷,戚永蕭,等.老年患者多藥耐藥肺炎克雷伯菌的耐藥性分析與耐藥基因檢測.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(12): 2392-2395.

6 陰晴,吳琳,成靜,等.一株耐亞胺培南肺炎克雷伯菌耐藥的分子機制探討.江蘇醫(yī)藥,2011,37(11): 1301-1304.

7 倪桂蓮,王冬國.神經(jīng)內(nèi)科住院患者感染肺炎克雷伯菌耐藥性分析與產(chǎn)ESBLs酶耐藥基因檢測.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(16): 3326-3328.

Detection and analysis ofKlebsiellaresistance gene in imipenem-resistant pneumonia

Yanyan JI,Zhenggui YANG,Hongyan ZHANG
Department of Clinical Laboratory,Panjiang Coal and Electricity Investment Holding Corporation General Hospital,Liupanshui 553536,China

ObjectiveTo analyze the detection effect ofKlebsiellaresistance gene in imipenem-resistant pneumonia.MethodsIn this study,260 strains ofKlebsiellapneumoniae were selected as the research object,and the drug concentrations were analyzed by the new drug resistance method.ResultsThe results of Hodge examination showed that 240 cases inhibited positive results and 20 cases inhibited negative results and the positive rate was 92.3%.β-lactamase gene analysis showed that 225 strains of imipenem-resistantKlebsiellapneumoniae produced KPC-2 carbapenemase,and others could amplify SHV type β-lactamase gene.ConclusionThe factors of resistance to imipenem pneumoniaKlebsiellawere more complicated.In the practical stage need,drug resistance check work should be paid more attention.

Imipenem-resistant pneumoniaKlebsiella; Drug resistance; Gene detection