符金華， 楊琳芬*， 董澤民， 徐國茂， 姜文娟 ， 邢 磊，黃艷清， 李瑾瑾， 周仁丹， 葉 金， 吳 宇， 廖 豐

（1.江西省獸藥飼料監(jiān)察所，江西南昌 330029；2.南昌大學(xué)分析測試中心，江西南昌 330047；3.國家糧食局科學(xué)研究院，北京西城，100037；4.雙胞胎（集團(tuán)）股份有限公司，江西南昌 330096）

飼料中16種霉菌毒素液相色譜-三重四級桿/線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法的條件優(yōu)化

符金華1， 楊琳芬1*， 董澤民1， 徐國茂1， 姜文娟1， 邢 磊1，黃艷清1， 李瑾瑾1， 周仁丹2， 葉 金3， 吳 宇3， 廖 豐4

（1.江西省獸藥飼料監(jiān)察所，江西南昌 330029；2.南昌大學(xué)分析測試中心，江西南昌 330047；3.國家糧食局科學(xué)研究院，北京西城，100037；4.雙胞胎（集團(tuán)）股份有限公司，江西南昌 330096）

本文優(yōu)化并建立了飼料中16種霉菌毒素的多殘留提取、凈化及液相色譜-三重四級桿/線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜（Qtrap-LC-MS/MS）的檢測方法。 樣品經(jīng) 20 mL 乙腈/水/乙酸（V∶V∶V，70∶29∶1）溶液提取、稀釋和上機(jī)檢測。 采用 0.1%甲酸的1 mmol/L NH4Ac的水相作為弱洗脫流動相梯度洗脫程序，離子源溫度為500℃，采用分段MRM掃描模式，100 ms的駐留時間，16種霉菌毒素分離理想、基線平穩(wěn)、選擇離子信號強(qiáng)度高、干擾離子信號弱；同時，得到了與理論計算值非常接近的所有選擇離子精確質(zhì)量數(shù)。完成了16種毒素的Qtrap-LC-MS/MS方法條件優(yōu)化，成功的實現(xiàn)飼料中16種霉菌毒素的快速定性、定量分析。

霉菌毒素；液相色譜-三重四級桿/線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法；同位素內(nèi)標(biāo)；優(yōu)化

霉菌毒素是產(chǎn)毒真菌在一定環(huán)境條件下產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，可導(dǎo)致人類和動物急慢性中毒，具有致癌、致畸、致突變作用（朱聰英等，2010）。研究表明，飼料及其原料易被各種霉菌毒素污染（Binder等，2007），從而降低飼料的口感與質(zhì)量，甚至導(dǎo)致動物中毒，給畜牧業(yè)發(fā)展和畜產(chǎn)品安全造成極大的危害，更為嚴(yán)重的是部分毒素可進(jìn)入食物鏈威脅人類健康。其中，對動物生產(chǎn)影響較大的主要有黃曲霉毒素、嘔吐毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮等（Marin 等，2013；鄭翠梅等，2012）。

然而，飼料中毒素的含量很低，且基質(zhì)干擾嚴(yán)重，這對霉菌毒素進(jìn)行準(zhǔn)確快速定性和定量的檢測方法是巨大的挑戰(zhàn)。目前，有關(guān)霉菌毒素的檢測方法主要有薄層色譜法 （TLC）、酶聯(lián)免疫法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）及氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS）等（朱聰英等，2010；魏麗莉等，2008；Chiar等，2007；鮑蕾等，2005）。 在一定程度上，這些方法能夠滿足目前部分毒素的檢測，但也存在諸多問題，如TLC法的穩(wěn)定性和重復(fù)性差，易受外界環(huán)境的干擾；ELISA法通常作為篩選方法，不能準(zhǔn)確定量，且易出現(xiàn)假陽性；HPLC法容易受到基質(zhì)干擾，且部分毒素的檢測限達(dá)不到限量標(biāo)準(zhǔn)要求；GC-MS法的操作步驟繁瑣，衍生化的效率低等。另外，在實際的飼料樣品中霉菌毒素污染通常是多種霉菌毒素同時污染（Monbaliu等，2009），而這些方法只能對一種或結(jié)構(gòu)類似的毒素進(jìn)行檢測。

因此，開發(fā)同時檢測飼料中常見的多種霉菌毒素方法具有十分重要的現(xiàn)實意義。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）是一種集高效分離和多組分同時定性、定量于一體的檢測技術(shù)，具有較強(qiáng)抗基體干擾、高通量、高選擇性、高靈敏度等優(yōu)勢，成為近年來痕量檢測中發(fā)展非?？斓男录夹g(shù)之一 （Markus 等，2012；Johannes 等，2012；Mira 等，2010；Micheal等，2009）， 目前大多數(shù)HPLC-MS/MS法應(yīng)用需要專用的前處理設(shè)備和成本較高的免疫親和柱，提取凈化步驟較為繁瑣，而且同時檢測霉菌毒素的種類仍然比較窄（Shephard 等，2012；鄭翠梅等，2012；趙孔祥等，2011；應(yīng)永飛等，2010）。本研究旨在建立一種飼料及原料樣品經(jīng)簡單的提取、稀釋和加內(nèi)標(biāo)后直接上機(jī)，不需要過多功能凈化柱及脫脂等操作，實現(xiàn)一次前處理和一針進(jìn)樣,同時測定16種霉菌毒素的Qtrap-LC-MS/MS檢測方法，并對檢測條件進(jìn)行優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 質(zhì)譜型號為Sciex4500 Qtrap（美國Sciex公司）；液相為島津LC-20AD XR（日本Shimadzu公司）；赫西離心機(jī)（中國湖南赫西儀器裝備有限公司）；HY-3多功能振蕩器（中國江蘇光都機(jī)電設(shè)備有限公司）；Milli-Q超純水純化系統(tǒng)（美國 Millipore 公司）；METTLER TOLEDO ME104分析天平[中國梅特勒-托利多（上海）有限公司]。

雪腐鐮刀菌烯醇（NIV）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙?；撗跹└牭毒┐迹?-Ac-DON）、15-乙?；撗跹└牭毒┐?（15-Ac-DON）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷（DON-3G）、T-2 毒素（T-2）、HT-2 毒素（HT-2）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、赭曲霉毒素 A（OTA）、伏馬毒素 B1（FB1）、伏馬毒素 B2（FB2）、雜色曲霉毒素（ST）標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為 0.2~20 μg/mL，Romer公司）；黃曲霉毒素 B1（AFB1）、黃曲霉毒素 B2（AFB2）、黃曲霉毒素 G1（AFG1）、黃曲霉毒素 G2（AFG2）標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為 0.03~1 μg/mL，Sigma-Aldrich 公司）；13C 標(biāo)記的黃曲霉毒素（B1、B2、G1、G2）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙?；撗跹└牭毒┐肌⒂衩壮嗝瓜┩?、赭曲霉毒素A、伏馬毒素（B1、B2）、T-2 毒素、HT-2 毒素、雜色曲霉毒素的14種穩(wěn)定同位素標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為0.01~2.5 μg/mL，Romer公司）；甲醇、乙腈（HPLC 級，F(xiàn)isher公司）；乙酸銨、甲酸、乙酸（HPLC 級，美國Sigma 公司）；0.2 μm PTFE 膜針頭過濾器（PALL公司）；實驗用水為Milli-Q超純水。

1.2 試驗方法

1.2.1 液相色譜條件 Waters公司CORTECSTM UPLC C18柱 （100 mm × 2.1 mm，1.6 μm）； 柱溫40℃；進(jìn)樣量2 μL。流動相A為甲醇，B為含0.1%（體積分?jǐn)?shù)）的甲酸和1 mmol/L乙酸銨的水溶液，流速：0.3 mL/min。梯度洗脫。

1.2.2 質(zhì)譜條件 加熱電噴霧離子源 （HESI）溫度為500℃；毛細(xì)管電壓為3.2 kV；離子傳輸管溫度為320℃；鞘氣為35 unit，輔助氣為10 unit。fullscan/ddms2掃描模式：采集范圍為200~800Da，正離子采集；一級質(zhì)譜分辨率為70000 FWHM，二級質(zhì)譜分辨率為17500 FWHM；碰撞池能量（NCE）為 35 eV。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 分別移取一定體積的16種霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到16種霉菌毒素的混標(biāo)儲備液，于-20℃保存，濃度詳見表1。

表1 霉菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度及相應(yīng)的穩(wěn)定同位素混合溶液

穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液：根據(jù)表1相應(yīng)的穩(wěn)定同位素混合溶液的濃度，分別移取一定體積的14種霉菌毒素穩(wěn)定同位素單標(biāo)溶液于4 mL儲液瓶中，用水稀釋至2 mL配制穩(wěn)定同位素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分混勻后于-20℃避光保存。準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液適量，用乙腈-水-乙酸溶液（35∶64.5∶0.5）逐級稀釋，配制成不同濃度系列的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。向400 μL內(nèi)插管中加入20 μL 14種穩(wěn)定同位素混合工作液，再分別吸取180 μL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液于內(nèi)插管中，渦旋混勻后準(zhǔn)備上機(jī)檢測。

1.2.4 樣品前處理方法 稱取飼料樣品（5±0.1）g于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL乙腈/水/乙酸（V∶V∶V，70∶29∶1）提取溶劑，渦旋 2 min，振蕩30 min，以4000 r/min離心10 min使固液分離。準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移0.5 mL上清液于1.5 mL離心管中，加入0.5 mL水稀釋，渦旋混勻1 min，然后以12000 r/min離心10 min，取上清液用0.22 μm的PTFE濾膜過濾，吸取20 μL預(yù)先渦旋混勻的穩(wěn)定同位素混合溶液于400 μL內(nèi)插管中，再加入180 μL的樣品濾液，混合后待測。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇 本研究選擇的16種霉菌毒素目標(biāo)物涵蓋了我國食品安全限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，及歐盟已制定限量法規(guī)的霉菌毒素及其相關(guān)的衍生物。由于霉菌毒素的理化性質(zhì)相差較大，需要選擇合適的提取液和提取程序，否則容易造成毒素的損失。研究表明，霉菌毒素的提取溶劑常采用甲醇、乙腈等（薛毅等，2016；王瑞國等，2015；應(yīng)永飛等，2010）。本研究中鑒于16種毒素的極性，探究了甲醇、乙腈、純水、甲醇水和乙腈水的提取效率，結(jié)果見圖1。由圖1可見，可能與嘔吐毒素的水溶性較好有關(guān)，純水對12種毒素的提取效率比較低，均低于 55%，DON、DON-3G、3-AcDON、15-AcDON能夠達(dá)到82%以上；純乙腈和甲醇對12種組分的提取效率為71%~95%，而DON、DON-3G、3-AcDON、15-AcDON 的 提 取 效 率 均 低 于51%，甲醇水對16種毒素的提取效率均高于88%；而乙腈水對16種毒素的提取效率均高于90%，效果比甲醇水好。綜上所述，最終選擇乙腈水作為提取溶劑。

2.2 提取方式的選擇 一般在霉菌毒素的檢測中，前處理相對比較繁雜，占據(jù)了樣品檢測周期的大部分時間，從而使得檢測效率不高。同時，在繁雜的前處理凈化過程中，極易造成目標(biāo)物的損失，導(dǎo)致檢測結(jié)果的誤差。研究表明。MycoSep 226多功能凈化柱會吸附FBs、DON糖苷化衍生物和OTA等毒素，導(dǎo)致回收率降低（鄭翠梅等，2012）。然而，近年來隨著質(zhì)譜儀器抗干擾能力及靈敏度的不斷提升，直接提取稀釋法越來越多的被應(yīng)用。圖2為直接提取稀釋法與商品化的多毒素凈化填料（MycoSpin 400）凈化方法對16種目標(biāo)毒素的回收率，MycoSpin 400前處理方法按照其產(chǎn)品說明書進(jìn)行。結(jié)果顯示，MycoSpin 400對DON-3G、FB1、FB2及OTA 4種霉菌毒素的回收率不高，主要原因是填料對這4種毒素有一定的吸附性而導(dǎo)致?lián)p失，影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而直接提取稀釋法則可以有效避免該過程中目標(biāo)物的損失，16種毒素的回收率為91%~103%。同時，毒素的多功能凈化柱選擇性單一，且價格昂貴。因此，直接提取稀釋法憑借處理過程簡單、快捷和成本低廉而更適合于多種霉菌毒素的快檢前處理。

圖1 不同的提取液對于目標(biāo)毒素回收率（n=3）結(jié)果

2.3 檢測條件的優(yōu)化

2.3.1 流動相的優(yōu)化 對比含不同比例鹽和酸的弱洗脫流動相對16種霉菌毒素質(zhì)譜響應(yīng)的影響，結(jié)果見表2，以水為流動相時，大部分的離子響應(yīng)不高，加鹽后大多數(shù)毒素的響應(yīng)明顯提高，其中乙酸銨的增強(qiáng)效果比甲酸銨明顯，同時低濃度（1 mmol/L）鹽比高濃度（2 mmol/L 及 5 mmol/L）鹽的響應(yīng)信號更強(qiáng)。而FB1和FB2需要在0.1%甲酸存在時才有明顯的質(zhì)譜響應(yīng)，因此，最終選擇含有0.1%甲酸的1 mmol/L NH4Ac的水相作為弱洗脫流動相，洗脫程序見表3。

2.3.2 離子源溫度的優(yōu)化 圖3為離子源溫度

圖2 直接提取稀釋方法與商品化的多毒素凈化方法（MycoSpin 400）對于目標(biāo)毒素回收率（n=3）結(jié)果

表2 不同流動相對16種霉菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)的洗脫效果影響

表3 流動相梯度洗脫條件

450~550°C全掃描采集到的16種霉菌毒素混標(biāo)的TIC圖。由圖3可知，16組分的信號隨著源溫度升高其響應(yīng)值會升高，直至500℃時響應(yīng)值達(dá)到最大。繼續(xù)升溫至550℃時，信號強(qiáng)度沒有太大的變化，甚至部分毒素（DON、DON-3G等）的信號強(qiáng)度下降了。此外，一些難裂解的或結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的化合物在太高的離子源溫度條件下會失去一些高質(zhì)量的碎片離子。同時，高離子源溫度還可能使柱流失增強(qiáng)而導(dǎo)致基線增高。因此，綜合考慮16種毒素的高質(zhì)量離子信號強(qiáng)度，低的干擾離子信號及理想的峰形等因素，最佳的離子源溫度為500℃。

圖3 離子源溫度450～550°C全掃描采集到的16種霉菌毒素混標(biāo)的TIC圖

2.3.3 掃描模式的選擇 質(zhì)譜儀的一般掃描模式有全掃描（Full Scan）、選擇離子掃描（SIM）、子離子掃描 （Product Scan）、 母離子掃描（Precursor Scan）、中性碎片丟失掃描（Neutral Loss）和多反應(yīng)掃描（MRM）等模式。本文探究了以上幾種掃描模式條件下的16種毒素的掃描結(jié)果，發(fā)現(xiàn)只有在MRM模式下，得到的總離子圖中，16種毒素信號強(qiáng)度高、不會丟失部分信號及離子峰形勻稱飽滿。同時，比較了普通的MRM掃描模式和增強(qiáng)分段MRM掃描模式的效果，發(fā)現(xiàn)后者的噪音干擾更低，靈敏度較高。因此采用分段MRM掃描模式。

2.3.4 駐留時間的優(yōu)化 在質(zhì)譜的掃描過程中，駐留時間的長短會影響信號的點數(shù)，從而關(guān)系到所得到碎片離子的信息完整性，離子峰形對稱及基線噪聲干擾的大小。對于多組分同時測定時，如果駐留時間過長，會導(dǎo)致質(zhì)譜采集點數(shù)不夠，質(zhì)譜信息量降低，造成部分碎片離子信號的丟失，重現(xiàn)性降低，且得到的色譜峰峰形較差。如果駐留時間太短，會導(dǎo)致雜質(zhì)干擾信號比較大，靈敏度降低，從而不能對樣品中痕量目標(biāo)物的精確定量。因此，采取合適的駐留時間至關(guān)重要。本文探究了16種毒素分別在駐留時間為200、100 ms和50 ms的情況，由圖4可知，16種毒素在100 ms時的離子信息完全，噪音干擾低，靈敏度較高。因此，最佳的駐留時間為100 ms。

圖4 駐留時間為200、100 ms和50 ms全掃描采集到的16種霉菌毒素混標(biāo)的TIC圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣 按照上述優(yōu)化的各項條件，對16種霉菌毒素的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行上機(jī)分析，以穩(wěn)定同位素稀釋法進(jìn)行定量，相關(guān)結(jié)果見表4。結(jié)果表明，16種毒素標(biāo)準(zhǔn)品能夠有效分離，得到精確保留時間。同時，得到了所有的選擇離子精確質(zhì)量，質(zhì)量數(shù)與理論計算值非常接近。因此，16種毒素的HPLC/MS/MS方法條件優(yōu)化完成，可以滿足實際應(yīng)用于樣品的日常檢測。

表4 相關(guān)毒素的保留時間和選擇離子的精確分子質(zhì)量

3 結(jié)論

本文優(yōu)化了飼料中常見16種霉菌毒素的提取、凈化及高效液相色譜-三重四級桿/離子阱質(zhì)譜分析條件。得到了16種霉菌毒素的精確保留時間和選擇離子的精確質(zhì)量數(shù)，成功實現(xiàn)了16種霉菌毒素的同時快速定性和定量分析。該方法前處理簡單、快速、準(zhǔn)確度高，可滿足飼料中常見霉菌毒素的殘留檢測分析要求。

[1]鮑蕾，劉心同，張藝兵，等.多功能柱凈化高效液相色譜法檢測花生中的黃曲霉毒素[J].檢驗檢疫科學(xué)，2005，15（5）：23 ～ 25.

[2]魏麗莉.黃曲霉毒素對食品的污染及防治措施[J].糧油加工，2008，9：86～89.

[3]王瑞國，蘇曉鷗，程芳芳，等.維液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料原料中26 種霉菌毒素[J].分析化學(xué)研究報告，2015，43（2）：264 ～ 270.

[4]薛毅，張玥，吳銀良.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定飼料中17種霉菌毒素[J].飼料加工與檢測[J]，2016，52（19）：90 ～ 94.

[5]應(yīng)永飛，朱聰英，韋敏玨，等．液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料中14種霉菌毒素及其類似物[J].分析化學(xué)，2010，38（12）：1759 ～ 1764.

[6]朱聰英，應(yīng)永飛，韋敏鈺，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料中黃曲霉毒素的研究[J].質(zhì)譜學(xué)報，2010，31（4）：240 ～ 246.

[7]鄭翠梅，張艷，王雪松，等．液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用同時檢測糧食中多種真菌毒素的應(yīng)用進(jìn)展[J].糧食科技與經(jīng)濟(jì)，2012，37（1）：45 ～ 49.

[8]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2761-2011[S].食品中真菌毒素限量．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011-10-20.

[9]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB 13078-2001[S]．飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001-10-01.

[10]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 13078．2-2006[S].飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)—飼料中赭曲霉毒素 A和玉米赤霉烯酮的允許量．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006-07-01.

[11]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 13078．3-2007[S].配合飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的允許量．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007-03-01.

[12]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 21693-2008[S].配合飼料中T-2毒素的允許量．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008-07-01.

[13]趙孔祥，葛寶坤，陳旭艷，等．在線免疫親和柱-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測定中藥及中藥中10中真菌毒素 [J].分析化學(xué)，2011，39（9）：1341～1346.

[14]鄭翠梅，張 艷，王松雪，等．液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定小麥中 T-2、ZEN 及 DON3種鐮刀菌毒素[J].分析測試學(xué)報，2012，31（4）：383～ 389.

[15]Binder E M，Tan L M，Chin L J，et al．Worldwide occurrence of mycotoxins in commodities,feeds and feed ingredients[J].J Anim．Feed Sci．Technol．2007，137（ 3）：265 ～ 282.

[16]Chiar A C，Patrizia F.Determination of aflatoxins in olive oil by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].J Analytica Chimica Acta，2007，596 （1）：141 ～ 148.

[17]Johannes M W，Van D O，Ido P K.The role of liquid chromatographytandem mass spectrometry in the clinical laboratory [J].J Chromatogr B.2012，883（884）：18 ～ 32.

[18]Monbaliu S，van Poucke C，Detavernier C，et al．Occurrence of mycotoxins in feed as analyzed by a multi-mycotoxin LC-MS/MS Method[J].J Agr Food Chem，2009，58（1）：66 ～ 71.

[19]Marin S，Ramos A，Cano-Sancho G，et al.Mycotoxins：occurrence，toxicology，and exposure assessment[J].J Food Chem Toxicol，2013，60：218 ～ 237.

[20]Mira P，Marinella F，Miren A L，et al.Recent trends in the liquid chromatography mass spectrometry analysis of?organic contaminants in environmental samples[J].J Chromatogr A，2010，1217（25）：4004 ～ 4017.

[21]Markus H.10 years of MS instrumental developments--impact on LCMS/MS in clinical chemistry[J].J Chromatogr B，2012，3：883（884）：3 ～ 17.

[22]Micheal J，Riordan O，Martin G，et al.Comparison of analyticalmethods for aflatoxin determination in commercial chilli spicepreparations and subsequent development of an improved method[J].Food Control，2009，20（8）：700～705.

[23]Shephard G S，Berthiller F，Burdaspal P A，et al.Developments in mycotoxin analysis：an update for 2011-2012[J].J World Mycotoxin，2012，5（1）：3 ～ 30.■

The residue extraction，purification and liquid chromatography-triple level 4 bar/linear ion trap tandem mass spectrometry（Qtrap-LC-MS/MS） detection method of 16 kinds of mycotoxins in feed were optimized and established in this paper.Mycotoxins were extracted by 20 mL of acetonitrile/water/acetic acid （V∶V∶V，70∶29∶1） solution，diluted and detected.The gradient elution procedure was used with 0.1%formic acid and 1 mmol/L NH4Ac as weak elution mobile phase.The ion source temperature was 500 ℃ and dwell time was 100 ms，using segmented MRM scan mode.Mycotoxins were well separated with smooth baseline，high select ion signal intensity and the weak signal interference.All select ion mass numbers of mycotoxins were also obtained，which was very close to the theoretical calculation value.The optimization conditions for Qtrap-LC-MS/MS method of mycotoxins were found.It realized both qualitative and quantitative analysis of 16 kinds of mycotoxins in feed.

mycotoxin；qtrap-LC-MS/MS；isotope internal standard；optimization

S816.17

A

1004-3314（2017）21-0025-06

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20172106

江西省重點研發(fā)計劃項目（20161BBF60115）

*通訊作者