王怡君，郭 磊，徐 斌，陳 佳，李嘉瑋，邱澤武，謝劍煒*

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100850；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院 中毒救治科，北京 100071)

臨床干血斑樣本中12種抗凝血鼠藥的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)定量檢測(cè)

王怡君1，郭 磊1，徐 斌1，陳 佳1，李嘉瑋2，邱澤武2，謝劍煒1*

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100850；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院 中毒救治科，北京 100071)

為應(yīng)對(duì)臨床中毒快檢的需求，建立了干血斑樣本中12種抗凝血鼠藥的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性定量方法。針對(duì)全打孔的干血斑樣本，考察了濾紙卡種類、潤(rùn)濕步驟、提取溶劑種類對(duì)提取效果的影響。采用C18色譜柱進(jìn)行分離，以乙酸銨(5 mmol/L)水溶液-乙酸銨(5 mmol/L)甲醇溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，在電噴霧負(fù)離子電離方式下使用三重四極多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)。結(jié)果表明，采用Whatman903濾紙卡為基底，以水為溶劑充分潤(rùn)濕，再以含內(nèi)標(biāo)的甲醇溶液提取5 min，各鼠藥的提取率為66%～115%，且結(jié)果穩(wěn)定(日內(nèi)RSD小于15%)。除殺鼠酮的線性范圍為20～500 ng/mL(r2=0.998 7)外，其它11種鼠藥的線性范圍為5～500 ng/mL(r2=0.998 8～0.999 6)；12種鼠藥的回收率為61%～105%，基質(zhì)效應(yīng)為71%～193%(日內(nèi)RSD小于15%)。該方法準(zhǔn)確、靈敏、快速且操作簡(jiǎn)便，成功應(yīng)用于3例臨床鼠藥中毒病人樣本的快速檢測(cè)，為臨床毒物檢測(cè)和法醫(yī)毒物分析的快速篩查和準(zhǔn)確定量提供了新的技術(shù)方法。

干血斑；抗凝血?dú)⑹笏帲灰合嗌V-串聯(lián)質(zhì)譜法；臨床中毒快檢

因劇毒鼠藥、農(nóng)藥等有毒化學(xué)品的誤服或蓄意投毒造成的臨床化學(xué)性中毒事件在我國(guó)每年均屢有發(fā)生，對(duì)民生造成了極大危害。臨床化學(xué)性中毒救治亟需快速響應(yīng)的毒物檢測(cè)和臨床診斷方法。臨床干血斑技術(shù)的出現(xiàn)，滿足了采樣方便、損傷小、樣本量低、便于運(yùn)輸及儲(chǔ)存等需要，也便于臨床中毒樣品的監(jiān)測(cè)及快速檢測(cè)。干血斑是一種新興的血液采集及保存方式，即將指尖或足尖血滴在濾紙卡上，常溫下干燥2 h以上完成制備[1-2]。其采血量一般少于100 μL；操作簡(jiǎn)便，病人或其家屬即可完成采血；蛋白質(zhì)和酶以非活性方式存在于干血斑中，細(xì)菌的生長(zhǎng)受到抑制，生物危害性低；不需低溫儲(chǔ)藏，運(yùn)輸時(shí)不需冷藏設(shè)備的輔助。目前，干血斑已應(yīng)用于臨床新生兒疾病篩查、藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究及臨床藥物監(jiān)測(cè)[3-4]等方面。例如，Heinig等[5]通過(guò)液質(zhì)方法進(jìn)行治療藥物的臨床監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)干血斑樣品與液態(tài)全血、液態(tài)血漿的藥物分析數(shù)據(jù)一致、可靠。但到目前為止，干血斑多在疾病標(biāo)志物、臨床藥物監(jiān)測(cè)方面展開(kāi)應(yīng)用，對(duì)臨床毒物監(jiān)測(cè)的研究尚處于起步階段[6-7]。

本文以常見(jiàn)的抗凝血鼠藥化學(xué)性中毒為例，對(duì)臨床干血斑樣本的抗凝血鼠藥檢測(cè)進(jìn)行方法學(xué)和初步應(yīng)用研究。以香豆素類和茚二酮類為代表的第二代抗凝血?dú)⑹笏?，通過(guò)抑制環(huán)氧化物還原酶，阻止維生素K還原，降低維生素K依賴性凝血因子活性，導(dǎo)致各臟器及粘膜大面積出血，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[8]。第二代抗凝血鼠藥具有脂溶性高、毒性強(qiáng)的特點(diǎn)，其半衰期長(zhǎng)，在體內(nèi)清除緩慢，病人治療依從性差，常需長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)監(jiān)測(cè)用藥后體內(nèi)清除進(jìn)程[9-10]。目前，針對(duì)血樣中抗凝血鼠藥的分析檢測(cè)方法主要包括液相色譜(LC)[11-12]、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)[13]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS/MS)[14-17]等。針對(duì)全血、組織等生物樣本，需經(jīng)有機(jī)溶劑提取、固相凈化或富集等步驟進(jìn)行前處理。本文在優(yōu)化干血斑樣本提取效率的基礎(chǔ)上，建立了普適快速的前處理方法，繼而基于液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(LC-QqQ-MS/MS)技術(shù)，建立了12種常見(jiàn)抗凝血鼠藥臨床干血斑樣本的定性定量檢測(cè)方法，并成功應(yīng)用于3例臨床中毒樣本的快速診斷，方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確快速、靈敏度高的特點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 6430型高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-QqQ-MS/MS，Agilent公司，美國(guó))，配備電噴霧離子源；R200D電子天平(Sartorius，德國(guó))；M-S渦旋混合器(Scilogex公司，美國(guó))；1-14型高速離心機(jī)(Sigma公司，美國(guó))；Milli-QA10超純水儀(Millipore公司，美國(guó))；Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)和保護(hù)柱(4.6 mm，0.2 μm，Agilent公司，美國(guó))；S-4800掃描電鏡(Hitachi公司，日本)。

12種抗凝血鼠藥對(duì)照品溶液(10 μg/mL)，包括克滅鼠、華法林、殺鼠酮、殺鼠醚、氯滅鼠靈、敵鼠、氯敵鼠、溴敵隆、溴敵隆酮、鼠得克、氟鼠酮和大隆(純度高于98%，Toronto Research Chemicals公司，加拿大)均由北京疾病預(yù)防控制中心配制并提供；霉酚酸(純度高于98%，Ark Pharm公司，美國(guó))；甲醇和乙腈(色譜純，Merck公司，德國(guó))；甲酸(純度98%，百靈威公司，北京)；乙酸銨(純度高于98%，Acros Organics公司，美國(guó))；Milli-Q超純水(電阻率為18.2 MΩ·cm)。

Whatman DMPK-A、DMPK-B、DMPK-C濾紙卡和903濾紙卡及打孔器(GE公司，美國(guó))。離心管(2.0 mL，Axygen公司，美國(guó))；全血取自Wistar大鼠(許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001，飼養(yǎng)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房)；患者中毒血樣由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院中毒救治科提供。

1.2 溶液及樣品制備

12種鼠藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：質(zhì)量濃度為10 μg/mL，溶于甲醇，于-20 ℃保存。

12種鼠藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，以甲醇逐級(jí)稀釋至質(zhì)量濃度為1 000、100 ng/mL，于4 ℃保存(需在1個(gè)月內(nèi)使用完畢)。

質(zhì)量控制(QC)溶液質(zhì)量濃度分別為5、20、50、100、200、500 ng/mL。

內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液：稱取2 mg霉酚酸，以甲醇配制成1 mg/mL溶液，于-20 ℃保存。

內(nèi)標(biāo)工作溶液：取適量?jī)?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，以甲醇稀釋至200 ng/mL，于4 ℃冰箱中保存(需在1個(gè)月內(nèi)使用完畢)。

干血斑樣本的制備：吸取20 μL全血滴在濾紙卡上(直徑約1 cm)，室溫下干燥2 h即得。

1.3 樣品前處理

選取整個(gè)干血斑，用打孔器取下，置于離心管中，加入20 μL水，待潤(rùn)濕后，加入80 μL內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋5 min，移取全部溶液，以12 000 r/min離心5 min，吸取上層清液至進(jìn)樣瓶。

1.4 色譜條件

固定相：ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)；保護(hù)柱(4.6 mm，0.2 μm)；流動(dòng)相：A為5 mmol/L 乙酸銨水溶液，B為5 mmol/L 乙酸銨的甲醇溶液；流速：0.2 mL/min；梯度洗脫程序：0～1.5 min，30%～80%B；1.5～6.0 min，80%～95%B；柱溫：50 ℃；進(jìn)樣體積：5 μL。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離源(ESI源)；掃描方式：負(fù)離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；噴霧壓力40.0 psi，離子源溫度100 ℃，霧化器溫度：325 ℃；霧化器流量：10.0 L/min；毛細(xì)管電壓：3.5 kV。

2 結(jié)果與討論

所考察的12種抗凝血?dú)⑹笏幙煞譃橄愣顾仡惡蛙岫悆煞N，其油水分布系數(shù)(logD)介于1.6～9.3之間，即極性分布范圍較寬，與濾紙卡間形成的作用力可能存在多種形式。按母核結(jié)構(gòu)及l(fā)ogD值排序，將12 種鼠藥分成4組：A組為殺鼠酮、敵鼠和氯敵鼠(茚二酮類，logD值1.6～5.3)，B組為克滅鼠、華法林和氯滅鼠靈(香豆素類，logD值2.6～4.0)，C組為殺鼠醚、溴敵隆和溴敵隆酮(logD值5.0～8.3)，D組為鼠得克、氟鼠酮和大隆(logD值8.4～9.3)，進(jìn)行干血斑處理及提取條件等因素的考察。

2.1 濾紙卡類型

濾紙卡由于其自身材質(zhì)和修飾方式的不同，與基質(zhì)及待測(cè)化合物可能呈現(xiàn)出不同的相互作用，從而影響待測(cè)化合物的提取效率。對(duì)于20 μL全血，選用Whatman型濾紙卡(厚度0.50～0.74 mm)，較之普通化學(xué)定量濾紙(厚度0.18 mm)更利于血液的集中分布，其擴(kuò)散半徑僅為0.5 cm。實(shí)驗(yàn)比較了903型、DMPK-A、-B、-C型4種類型的濾紙卡，其中903型和DMPK-C型未經(jīng)任何化學(xué)修飾，DMPK-A型以自由基抑制劑、DMPK-B型以離液等成分進(jìn)行修飾，均可起到變性蛋白、裂解細(xì)胞等作用[18]。各類型濾紙卡在滴加血液后的形態(tài)如圖1所示。與其它3種濾紙卡相比，僅DMPK-A型卡上的干血斑出現(xiàn)明顯的“咖啡環(huán)”效應(yīng)，DMPK -B型卡上的干血斑呈現(xiàn)中央聚集，提示其上存在一定修飾。DMPK -C型卡和903卡上的血滴分布相對(duì)較為均勻。在掃描電鏡下，DMPK-B型卡上纖維素表面更加粗糙。

針對(duì)12種抗凝血鼠藥，以甲醇進(jìn)行提取的結(jié)果表明，使用DMPK-A卡，未能檢測(cè)到溴敵隆和溴敵隆酮，其它10種鼠藥的絕對(duì)回收率在30%～98%之間。使用DMPK-B、DMPK-C卡、903卡，均可檢測(cè)到12種鼠藥，絕對(duì)回收率分別為10%～59%、43%～106%、65%～115%。4種類型的濾紙卡中，茚二酮類鼠藥在DMPK-A、DMPK-C卡上得到了相對(duì)較高的回收率(60%～90%)；而9種香豆素類抗凝血鼠藥在903卡上的回收率最高(65%～115%)。大部分化合物在DMPK-C和 903卡上響應(yīng)接近，考慮到903卡已獲得FDA認(rèn)證，且在臨床上應(yīng)用較為廣泛，因此選用903濾紙卡進(jìn)行后續(xù)研究。每組鼠藥在相同濾紙卡上的響應(yīng)差別小于10%，說(shuō)明數(shù)據(jù)重復(fù)性較好，分組亦較為合適。

圖1 光學(xué)顯微鏡(上)及掃描電鏡(下)下的干血斑在各濾紙卡上的形態(tài)Fig.1 The pattern of dried blood spots on different kinds of filter paper cards under microscope(upper) and scanning electron microscope (lower)A：DMPK-A card,B：DMPK-B card,C：DMPK-C card,D：903 card

2.2 樣品前處理步驟的優(yōu)化

在干血斑中，濾紙不僅作為血液樣本的承載基底，更能利用纖維素自身膨脹和吸附的特性與目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生作用。當(dāng)血液滲透濾紙時(shí)，經(jīng)氫鍵作用，纖維素鏈間結(jié)合了大量水分子，其結(jié)構(gòu)發(fā)生膨脹。同時(shí)，纖維素鏈相互交錯(cuò)形成空隙，小分子物質(zhì)可進(jìn)一步結(jié)合到纖維素鏈間，大分子物質(zhì)則留于空隙中或置于空隙外。當(dāng)水分丟失后，纖維素結(jié)構(gòu)趨向恢復(fù)自然狀態(tài)，各種物質(zhì)分布于濾紙的表面或較深處[19]。因此若先加入適量水使濾紙膨脹后，有可能利于小分子物質(zhì)從纖維素鏈間游離出來(lái)，從而提高提取效率，繼而可再加入有機(jī)溶劑進(jìn)行提取。結(jié)果表明，與直接用有機(jī)溶劑提取相比，先以水潤(rùn)濕再以有機(jī)溶劑提取的回收率提高了8%～30%。

圖2 4種溶劑的提取效果對(duì)比圖Fig.2 The extraction efficiency by four kinds of solvents

提取溶劑種類方面，比較了甲醇、含0.5%甲酸的甲醇、乙腈及甲醇-乙腈(1∶4)的提取效果(圖2)，發(fā)現(xiàn)純甲醇、乙腈提取時(shí)各鼠藥的提取率較高(60%～115%)，說(shuō)明濾紙卡上抗凝血鼠藥在提取溶劑中的分配與極性直接相關(guān)。因此本實(shí)驗(yàn)采用甲醇作為提取溶劑。

2.3 液相色譜條件優(yōu)化

使用乙酸銨水溶液(A)-乙酸銨甲醇溶液(B)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，各化合物在B相為80%～95%的梯度洗脫范圍內(nèi)流出，各峰的保留時(shí)間與logD基本呈正相關(guān)?？疾炝薈APCELL CORE C18(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)柱(Ⅰ)、Syncronis C18(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)柱(Ⅱ)和ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)柱(Ⅲ)的分離情況，結(jié)果顯示，采用色譜柱Ⅰ時(shí)，華法林、殺鼠醚等峰形不佳，出現(xiàn)肩峰；采用色譜柱Ⅱ時(shí)，各化合物的峰形較好，但分離時(shí)間較長(zhǎng)(達(dá)到14 min)；采用色譜柱Ⅲ時(shí)，各化合物的峰形對(duì)稱、分離好、洗脫時(shí)間短，故選用ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱。12種鼠藥的MRM參數(shù)見(jiàn)表1，MRM色譜圖見(jiàn)圖3。

表1 12種抗凝血鼠藥及內(nèi)標(biāo)的結(jié)構(gòu)式、logD值及MRM參數(shù)Table 1 The structures,logD values and MRM parameters of 12 anticoagulant rodenticides

(續(xù)表1)

CompoundType—RgrouplogDIonpair?Fragmentor/VCollisionenergy/eVChlorophacinone(氯敵鼠)5 3373→201?373→1451301822Mycophenolicacid(霉酚酸)IS2 8319→191?319→2501201822

*quantitative ion pair

圖3 12種抗凝血鼠藥的MRM色譜圖Fig.3 MRM chromatogram of 12 anticoagulant rodenticides peaks：1.coumafuryl；2.warfarin；3.pindone；4.coumatetralyl； 5.coumachlor；6.diphacinone；7.chlorophacinone； 8.bromadiolone；9.bromadiolonone；10.difenacoum； 11.flocoumafen；12.brodifacoum；IS：mycophenolic acid

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1定量下限與標(biāo)準(zhǔn)曲線針對(duì)所制備的干血斑樣品，以10倍信噪比(S/N=10)所對(duì)應(yīng)的濃度作為定量下限(LOQ)。以化合物與內(nèi)標(biāo)的定量離子對(duì)峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)，干血斑中化合物的質(zhì)量濃度(X，ng/mL)為橫坐標(biāo)，以1/X加權(quán)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。除殺鼠酮的線性范圍為20～500 ng/mL(r2=0.998 7)外，其余11種鼠藥的線性范圍均為5～500 ng/mL(r2=0.998 8～0.999 6)，滿足方法學(xué)要求，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 12種鼠藥的定量下限和線性范圍Table 2 The LOQ and linear range of 12 anticoagulant rodenticides

2.4.2準(zhǔn)確度與精密度對(duì)定量下限、低、中、高4個(gè)濃度進(jìn)行考察，其中低濃度點(diǎn)為2倍定量下限，中濃度選取線性范圍的中間濃度，高濃度點(diǎn)為80%定量上限。每個(gè)濃度獨(dú)立制備5份干血斑樣品，共測(cè)定3批樣品，按照前處理方法操作，其精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，各鼠藥的批內(nèi)和批間精密度、準(zhǔn)確度均滿足方法學(xué)要求。

2.4.3回收率與基質(zhì)效應(yīng)全血等復(fù)雜基質(zhì)組分一般會(huì)通過(guò)影響被測(cè)物的離子化效率而影響待測(cè)物的響應(yīng)，因此考察了基質(zhì)效應(yīng)。于低、高2個(gè)濃度分別制備3份樣品，結(jié)果顯示，該方法存在一定的基質(zhì)增強(qiáng)作用，但其精密度尚能滿足方法要求(RSD均小于15%，表3)。

表3 干血斑中12種抗凝血?dú)⑹笏幍呐鷥?nèi)和批間準(zhǔn)確度、精密度、回收率和基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Inter- and intra-batch accuracy and precision,recovery and matrix effect of 12 anticoagulant rodenticides in dried blood spots

圖4 患者干血斑樣本中檢測(cè)的抗凝血鼠藥的MRM色譜圖Fig.4 MRM chromatogram of anticoagulant rodenticides detected in the dried blood spotscoming from a clinical patient

2.5 應(yīng) 用

本研究收集并制備了3位疑似抗凝血鼠藥中毒患者的干血斑樣本?；颊咴谒歪t(yī)時(shí)，分別出現(xiàn)牙齦出血、尿血、鼻出血、尿色深等癥狀。經(jīng)詢問(wèn)，各患者口述均未接觸抗凝血鼠藥或藥物，初步推測(cè)為誤食或者投毒所致。采用上述建立的方法，在1名未經(jīng)維生素K治療的患者血液中檢出溴敵隆，質(zhì)量濃度為(1.62±0.02) μg/mL，未檢出其它鼠藥，其MRM色譜圖見(jiàn)圖4。在另兩位經(jīng)服用維生素K治療患者血液中檢出溴敵隆，質(zhì)量濃度為(0.13±0.01) μg/mL和(0.66±0.02)μg/mL，與其它報(bào)道的中毒濃度相當(dāng)[9,20-21]。

3 結(jié) 論

本研究針對(duì)臨床干血斑樣本，建立了以水潤(rùn)濕、甲醇提取等普適的前處理方法，以霉酚酸作為內(nèi)標(biāo)，采用液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)了對(duì)12種香豆素類和茚二酮類抗凝血?dú)⑹笏幍亩ㄐ远糠治觥＝Y(jié)果表明，在提取過(guò)程中加入適量的水潤(rùn)濕濾紙卡，有助于目標(biāo)化合物從纖維素鏈上游離出來(lái)并獲得較高的提取回收率。DMPK-A、DMPK-B、DMPK-C和903等4種濾紙卡對(duì)于抗凝血鼠藥的干血斑分析存在差異，以903濾紙卡為基底時(shí)，各鼠藥提取率均較高且結(jié)果穩(wěn)定。該方法成功應(yīng)用于臨床實(shí)際中毒樣本的檢測(cè)，滿足臨床中毒快檢的需求，為抗凝血鼠藥中毒的診斷救治提供了可靠的新技術(shù)方法。

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Simultaneous Determination of Twelve Anticoagulant Rodenticides in Clinical Dried Blood Spots by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

WANG Yi-jun1,GUO Lei1,XU Bin1,CHEN Jia1,LI Jia-wei2，QIU Ze-wu2,XIE Jian-wei1*

(1.State Key Laboratory of Toxicology and Medical Countermeasures,Institute of Pharmacology and Toxicology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China；2.Department of Poisoning and Treatment,The Affiliated Hospital of Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China)

To address the fast detection need towards poisoned patients in clinic,a sensitive,accurate liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method was developed here for the qualitative and quantitative determinations of twelve anticoagulant rodenticides in dried blood spots.For the thoroughly punched dried blood spots,conditions influencing the extraction efficiency,including the kind of filter paper card,the water-soaking step and the kind of extraction solvent were investigated.A C18column was employed as separation phase while ammonium acetate in water (5 mmol/L)-ammonium acetate in methanol(5 mmol/L) was used as mobile phase by gradient elution.Then the sample was detected using negative electrospray ionization under multiple reaction monitoring mode.The results showed that,with the 903 type filter card as supporting matrix and a water-soaking step,followed by an extraction with methanol solvent containing internal standard for 5 min,the extraction efficiencies of the twelve rodenticides ranged from 66%to 115%with their intra-day relative standard deviations less than 15%.Good method validation results were obtained for all the anticoagulant rodenticides.The linearity for pindone was from 20 to 500 ng/mL with a correlation coefficient(r2) of 0.998 7,and that for the other eleven analytes were from 5 to 500 ng/mL with theirr2of 0.998 8-0.999 6.The recoveries for all the analytes ranged from 61%to 105%,with the matrix effects of 71%-193%and the intra-day relative standard deviations less than 15%.The established method was accurate,sensitive,rapid and convenient,and was successfully applied in the rapid detection of rodenticides in three clinic blood samples.It provides a new approach for clinical diagnosis and forensic toxicant analysis on anticoagulant rodenticide intoxication accidents.

dried blood spot；anticoagulant rodenticide；liquid chromatography-tandem mass spectrometry；fast detection on poisoned clinical samples

2017-06-20；

2017-07-20

全軍醫(yī)學(xué)科技“十三五”重大項(xiàng)目(AWS15J007))

*

謝劍煒，博士，研究員，研究方向：體內(nèi)外毒物分析、質(zhì)譜分析，Tel:010-66931649，E-mail:xiejw@bmi.ac.cn

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.11.002

O657.7；O657.63

A

1004-4957(2017)11-1296-08