覃艮艷，張又瑋，彭曉芳，王 英，彭 俊，彭清華

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

密蒙花顆粒對(duì)亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)中SD大鼠血液生化指標(biāo)的分析

覃艮艷，張又瑋，彭曉芳，王 英，彭 俊*，彭清華*

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

目的觀察密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠的亞慢性毒性作用及其血液生化指標(biāo)變化情況。方法80只SD大鼠隨機(jī)分為4組（雌雄各半），即空白對(duì)照組及密蒙花顆粒低、中、高劑量組，進(jìn)行為期3個(gè)月的亞慢性毒理實(shí)驗(yàn)，其中3個(gè)給藥組分別將密蒙花顆粒23.75 g、45 g、95 g溶于100 mL生理鹽水中，灌胃體積為20 mL/kg，空白對(duì)照組予以同等灌胃體積生理鹽水灌胃，觀察各實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組血常規(guī)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素、總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖、血鉀、血鈉、血氯、肌酸激酶等指標(biāo)變化情況，從而進(jìn)一步評(píng)價(jià)密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血液系統(tǒng)、肝臟、腎臟、心臟等的毒性作用。結(jié)果密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血液生化相關(guān)指標(biāo)無(wú)不良影響。結(jié)論密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血液生化指標(biāo)無(wú)明顯慢性毒性反應(yīng)，可在臨床推廣應(yīng)用。

密蒙花顆粒；亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)；SD大鼠；血液指標(biāo)；生化指標(biāo)

密蒙花顆粒是彭清華教授治療干眼癥的臨床組方，由密蒙花、枸杞子等6味中藥組成。前期試驗(yàn)研究表明[1]：雄激素、黃酮類(lèi)物質(zhì)均為雜環(huán)多酚類(lèi)化合物，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有相似性，已證明某些黃酮類(lèi)化合物具有擬雄激素作用，且黃酮可與細(xì)胞雄激素受體（AR）結(jié)合，密蒙花顆粒的君藥密蒙花有效部位為黃酮類(lèi)物質(zhì)，可以和淚腺細(xì)胞中AR結(jié)合，產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，通過(guò)擬雄激素效應(yīng)的途徑，治療雄激素水平下降所致的干眼癥，臨床具有相當(dāng)?shù)膽?yīng)用價(jià)值。但目前國(guó)內(nèi)外研究尚缺乏本方毒理學(xué)的數(shù)據(jù)資料。本研究團(tuán)隊(duì)在初步明確其口服劑型最大給藥量（MFD）無(wú)毒性反應(yīng)的基礎(chǔ)上進(jìn)行3個(gè)月密蒙花顆粒的亞慢性毒理實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步評(píng)價(jià)其應(yīng)用的安全性。

1 材料與方法

1.1 材料和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

密蒙花顆粒：由密蒙花、枸杞子等六味中藥組成，均選擇道地藥材，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供（生產(chǎn)批號(hào)：20160406），由湖南國(guó)華制藥有限公司制備。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)SD大鼠80只（合格證編號(hào)：43004700024634），雌雄各半，每只體質(zhì)量 80～100g，均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)動(dòng)物房，飼養(yǎng)溫度22～25℃，濕度40%～60%，自然采光，定量添加足量的飼料，動(dòng)物自由攝食，飲用水瓶供應(yīng)足量的三級(jí)飲用水，動(dòng)物自由飲用，每日更換飲水瓶及飲用水，所有動(dòng)物到達(dá)本實(shí)驗(yàn)室后均要進(jìn)行檢疫觀察7 d以上，在此時(shí)間內(nèi)，觀察動(dòng)物的疾病和死亡指征，任何異?，F(xiàn)象均向負(fù)責(zé)人和臨床獸醫(yī)報(bào)告，異常動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組給藥前進(jìn)行剔除，若在給藥前個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)異常，用健康動(dòng)物進(jìn)行替換。

1.2 試驗(yàn)主要設(shè)備與試劑

水合氯醛（上海國(guó)藥集團(tuán)生產(chǎn)），真空采血管、一次性采血針，止血鉗、組織剪、有齒鑷，希森美康XN全自動(dòng)血液分析流水線（XN9000，日本Sysmex公司），羅氏CCM全自動(dòng)生化免疫流水線（羅氏cobas 8000，瑞士）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組 將80只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白對(duì)照組、密蒙花顆粒低劑量組、密蒙花顆粒中劑量組、密蒙花顆粒高劑量組4組，每組20只，雌雄各10只。

1.3.2 試驗(yàn)方法 空白對(duì)照組予以生理鹽水灌胃，灌胃體積為20 mL/kg；實(shí)驗(yàn)組分為密蒙花顆粒低劑量組、密蒙花顆粒中劑量組、密蒙花顆粒高劑量組，分別予以密蒙花顆粒237.5 g/Kg（成人用量53倍）、475 g/Kg（成人用量105倍）、950 g/Kg（成人用量211倍）,溶于100 mL生理鹽水中，灌胃體積為20 mL/kg，每天灌胃1次，連續(xù)給藥3個(gè)月。在給藥3個(gè)月結(jié)束后第1天將半數(shù)動(dòng)物麻醉取材送檢。余下動(dòng)物停藥觀察15 d，觀察時(shí)間結(jié)束后第1天將剩余動(dòng)物麻醉取材。(備注：所有動(dòng)物給藥劑量按“人-動(dòng)物體表面積等效劑量比值表”折算，折算系數(shù)W=0.018，折算公式：W×成人用量（g）/動(dòng)物體重（kg），其中成人用量參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版。)1.3.3 取材 （1）取材時(shí)相第1時(shí)相：灌胃3個(gè)月結(jié)束后第1天；第2時(shí)相：停藥觀察15 d結(jié)束后第1天。（2）取材方法以5%水合氯醛150 mg/kg進(jìn)行腹腔麻醉，麻醉成功后進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，采血成功后立即將血液標(biāo)本送往湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行血常規(guī)及血生化相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 血液學(xué)檢查 測(cè)定白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、平均紅細(xì)胞體積、平均血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白量、RDW-CV、血小板等。

1.4.2 生化指標(biāo)測(cè)定 測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素、總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖、血鉀、血鈉、血氯、肌酸激酶等。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用“±s”表示，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布者，多組計(jì)量資料采用單因素方差分析，方差齊者用LSD和SNK法，方差不齊者用Tamhane’s T2或Dunnett’s T3法；不符合正態(tài)分布者采用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 密蒙花顆粒對(duì)大鼠血常規(guī)的影響

密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血常規(guī)的影響如表1～2所示，密蒙花顆粒低、中、高劑量組與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組用藥后 3個(gè)月與停藥觀察15 d后兩個(gè)時(shí)相比較，各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果顯示：密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)無(wú)明顯影響。

2.2 密蒙花顆粒對(duì)大鼠血生化相關(guān)指標(biāo)的影響

密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血生化指標(biāo)如表3～4所示，實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。各組用藥后3個(gè)月與停藥觀察15 d兩個(gè)時(shí)相比較，各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果顯示：密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血生化相關(guān)指標(biāo)無(wú)影響。

表1 用藥后3個(gè)月大鼠血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

表1 用藥后3個(gè)月大鼠血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

組別空白對(duì)照組低劑量組中劑量組高劑量組F P WBC/×109·L-1 3.93±2.18 3.29±1.73 4.37±2.72 3.64±1.10 0.435 0.729 RBC/×1012·L-1 8.32±0.78 9.01±0.63 9.00±0.92 8.86±0.56 1.35 0.279 HGB/g·L-1 145.5±12.34 147.67±5.50 148.63±13.94 149.00±8.16 0.155 0.925 HCT/%43.78±4.30 46.04±2.80 47.21±4.29 45.29±6.22 0.694 0.564 MCV/fL 52.67±2.24 51.12±2.32 52.54±1.80 53.65±1.78 2.205 0.111 MCHC/g·L-1 332.83±8.38 340.33±8.87 338.50±5.24 336.25±5.55 1.444 0.252 MCH/Pg 17.50±0.56 17.36±0.48 17.76±0.52 17.38±0.31 1.312 0.291 RDW-CV/fL 19.05±2.17 19.56±1.10 19.53±2.81 20.83±1.09 1.195 0.33 PLT/×109·L-1 1035.5±142.03 1044.67±135.11 1098.88±80.99 1062.25±85.78 0.465 0.709

表2 停藥后15 d大鼠血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

表2 停藥后15 d大鼠血常規(guī)相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

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表3 用藥后3個(gè)月大鼠血生化相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

表3 用藥后3個(gè)月大鼠血生化相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

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表4 停藥后15 d大鼠血生化相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

表4 停藥后15 d大鼠血生化相關(guān)指標(biāo)結(jié)果 （±s，n=5）

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續(xù)表4

3 討論

干眼癥是最常見(jiàn)的眼表疾病，為近年眼科的研究重點(diǎn)、熱點(diǎn)及難點(diǎn)。干眼癥發(fā)病率極高，2007年國(guó)際干眼工作組（DWES）調(diào)查顯示：全球平均發(fā)病率為14～33%[2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)干眼癥發(fā)病率最高可達(dá)59.1%[3]，已嚴(yán)重影響國(guó)民的生活質(zhì)量，因此，干眼癥的防治問(wèn)題亟待解決。

干眼癥發(fā)病原因復(fù)雜，目前西醫(yī)的治療方法均不理想，各類(lèi)西藥存在各自的局限性，療效不滿(mǎn)意，甚至造成許多難以避免的副作用[4-5]，因此，擁有豐富天然藥物資源的中醫(yī)藥在干眼癥治療領(lǐng)域擁有廣闊的前景，有發(fā)現(xiàn)創(chuàng)新藥物的巨大潛力。干眼癥屬于中醫(yī)“白澀癥”“神水將枯”、“干澀昏花癥”范疇，《審視瑤函》謂其“視珠外神水枯澀，而不潤(rùn)瑩”。本課題組根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，以密蒙花為君藥創(chuàng)制密蒙花顆粒，臨床療效確切。前期臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明[6-8]，密蒙花總黃酮制劑，能夠有效提高患者和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的淚液基礎(chǔ)分泌量，維持淚膜穩(wěn)定性；體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，密蒙花總黃酮可明顯抑制淚腺上皮細(xì)胞（LGEC）的局部炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，對(duì)TGF-β1、Bcl-2等關(guān)鍵細(xì)胞因子產(chǎn)生影響。前期臨床及實(shí)驗(yàn)研究說(shuō)明本方值得臨床推廣[9]，但目前國(guó)內(nèi)外研究尚缺乏關(guān)于本方的毒性學(xué)數(shù)據(jù)資料。

課題組通過(guò)為期3個(gè)月的密蒙花顆粒亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，同一時(shí)相密蒙花顆粒低、中、高劑量組與對(duì)照組比較，白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、平均血紅蛋白量（MCH）、RDW-CV、血小板（PLT）等差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血液系統(tǒng)無(wú)毒副作用；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠肝功能影響不大；肌酐（CREA）、尿素（UREA）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠腎功能影響不大；肌酸激酶（CK）等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠心功能影響不大；血鉀（K）、血鈉（Na）、血氯（Cl）等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠電解質(zhì)無(wú)影響；總膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血脂、血糖等代謝指標(biāo)無(wú)影響。

不同時(shí)相密蒙花顆粒低、中、高劑量組與對(duì)照組比較，白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均血紅蛋白量（MCH）、RDWCV、血小板（PLT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、肌酐（CREA）、尿素（UREA）、肌酸激酶（CK）、血鉀（K）、血鈉（Na）、血氯（Cl）、總膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血液系統(tǒng)、肝腎功能、心功能、電解質(zhì)、血脂、血糖等無(wú)影響或影響甚微。

綜上所述，密蒙花顆粒對(duì)SD大鼠血常規(guī)和血生化相關(guān)指標(biāo)影響極小，均未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，提示其不良反應(yīng)小，安全度高，可在臨床推廣應(yīng)用。

[1]彭清華,姚小磊,吳權(quán)龍,等.密蒙花提取物滴眼劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性干眼癥大鼠淚腺組織雄激素受體數(shù)量的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,32（1）:72-75,114.

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[3]NN Liu,L Liu,J Li,et al.Prevalence of and risk factors for dry eye symptom in mainland china:a systematic review and metaanalysis[J].Journal of Ophthalmology,2014，2014:1-8.ID：748654.

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（本文編輯 李 杰）

Sub-chronic Toxicity Study of Buddleja Officinalis Granules on Indexes of Hematology and Serum Biochemistry in SD Rats

QIN Genyan,ZHANG Youwei,PENG Xiaofang,WANG Ying,PENG Jun*,PENG Qinghua*
（Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China）

ObjectiveTo observe the chronic toxicity effects of Buddleja Officinalis granules and the changes of indexes about hematology and serum biochemistry in SD rats.Methods80 SD rats were randomly divided into 4 groups (male and female are fifty-fifty),including the control group and experiment groups.Experiment groups were divided into low,middle and high dose which were fed with 23.75 g,45 g and 95 g of Buddleja Officinalis granules mixed with 100 mL physiological saline for the three months'subchronic toxicity test.The gavage administration was 20 mL/kg,and the control group was given equivalent physiological saline.The indexes of white blood cell,red blood cell,hemoglobin,hematokrit,Mch,RDW-CV,blood platelet,glutamic-pyruvic transaminase,glutamic-oxalacetic transaminase,creatinine,urea,creatine kinase,kalium,serum sodium,blood chloride,cholesterol total,glycerin trimyristate,blood glucose were observed in four groups to evaluate the toxic and side effect of buddleja Officinalis granules on blood system,liver,kidney,heart.ResultsBuddleja Officinalis granules had no bad influence on the indexes of hematology and serum biochemistry.ConclusionBuddleja Officinalis Granules have no chronic toxicity on SD rats and can be extended to application in clinic.

Buddleja Officinalis granules;chronic toxicity experiment;SD rats;hematology;biochemical index

R289.5；R392

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.11.005

本文引用：覃艮艷，張又瑋，彭曉芳，王 英，彭 俊，彭清華.密蒙花顆粒對(duì)亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)中SD大鼠血液生化指標(biāo)的分析[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（11）：1188-1191.

2017-5-30

國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目（30772824，81574031）；湖南省高層次衛(wèi)生人才“225”工程培養(yǎng)項(xiàng)目資助；湖南省科技廳科研基金資助項(xiàng)目（2015SF2016-6）；湖南省發(fā)展改革委科研基金資助項(xiàng)目（湘發(fā)改投資[2014]658號(hào)）；長(zhǎng)沙市科技計(jì)劃重大專(zhuān)項(xiàng)（K1501014-31）；湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生創(chuàng)新項(xiàng)目（2016CX19）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)眼科學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目；湖南省中醫(yī)五官科學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目。

覃艮艷，在讀碩士，研究方向：眼表疾病、青光眼、眼底病。

* 彭清華，二級(jí)教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，E-mail：pqh410007@126.com；彭 俊，男，碩士，E-mail：154451101@qq.com。