趙翠楊，夏丹英，馬蕾

（1.上海交通大學(xué)附屬蘇州九龍醫(yī)院 皮膚性病科，江蘇 蘇州 215028；2.山東省濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 皮膚科，山東 濱州 256600）

rhEGF聯(lián)合點陣激光對痤瘡疤痕患者皮膚屏障功能及TLR2水平的影響

趙翠楊1，夏丹英1，馬蕾2

（1.上海交通大學(xué)附屬蘇州九龍醫(yī)院 皮膚性病科，江蘇 蘇州 215028；2.山東省濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 皮膚科，山東 濱州 256600）

目的探討基因重組人表皮生長因子（rhEGF）聯(lián)合點陣激光對痤瘡疤痕患者皮膚屏障功能及Toll樣受體2（TLR2）的影響。方法選取2014 年1 月-2015 年12 月之間收入該院的60例痤瘡疤痕患者為研究對象，根據(jù)隨機數(shù)字法分為對照組和研究組，每組各30 例。對照組患者給予點陣超脈沖CO2激光治療，研究組患者在點陣超脈沖CO2激光治療后外用rhEGF 凝膠。比較兩組患者的療效、外周血CD14+單核細胞TLR2表達率及皮膚屏障功能。結(jié)果兩組患者的治療總有效率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），研究組高于對照組（93.33 % vs 70.00 %）。治療后，兩組患者的經(jīng)皮水份丟失（TEWL）、皮膚紅斑情況（a值）均較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），研究組低于對照組；兩組患者的pH值較治療前均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），研究組低于對照組；兩組患者的角質(zhì)層含水量較治療前均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），研究組高于對照組。治療后，兩組患者的乳酸刺激實驗總分、粘脫蛋白質(zhì)含量較治療前均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），研究組低于對照組。治療后，兩組患者的TLR2表達率較治療前均降低，研究組患者低于對照組。研究組患者的瘢痕增生、色素沉著及持久性潮紅的發(fā)生率低于對照組。結(jié)論rhEGF聯(lián)合點陣激光對治療痤瘡疤痕具有良好的治療效果，能夠降低TLR2表達水平，改善皮膚屏障功能，減少不良反應(yīng)，值得臨床推廣應(yīng)用。

重組人表皮生長因子；點陣激光；痤瘡疤痕；皮膚屏障功能；Toll樣受體2

痤瘡疤痕是由青春期內(nèi)分泌失調(diào)造成皮脂腺或毛囊發(fā)炎，在痤瘡恢復(fù)后留下的疤痕[1]。目前，痤瘡的發(fā)病機制復(fù)雜，但普遍認為其是一種炎癥反應(yīng)。Toll樣受體是一類蛋白質(zhì)分子，其能夠參與天然免疫，并且能夠連接特異性和非特異性免疫[2]。研究報道痤瘡丙酸桿菌能夠活化Toll樣受體，進而分泌細胞因子，最終引發(fā)炎癥[3]。研究發(fā)現(xiàn)點陣超脈沖CO2激光對于治療痤瘡疤痕具有一定的效果，但是術(shù)后色素沉著、紅斑等問題仍影響患者的生活質(zhì)量[4]。隨醫(yī)學(xué)水平的提高，痤瘡疤痕患者對美的追求也得到提升。重組人表皮生長因子（recombinant human epidermal growth factor，rhEGF）凝膠做為一種生物制品，能夠高效修復(fù)皮膚組織，淡化色斑，且毒副作用小[5]。本研究選取2014 年1 月-2015 年12月之間收入上海交通大學(xué)附屬蘇州九龍醫(yī)院的60例痤瘡疤痕患者為研究對象，根據(jù)隨機數(shù)字法分為對照組和研究組，通過比較兩組患者的Toll樣受體2（toll-like receptor 2，TLR2）表達水平及皮膚屏障功能相關(guān)指標的差異，進而探討rhEGF聯(lián)合點陣激光對痤瘡疤痕患者皮膚屏障功能及TLR2的影響，為治療提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

60例痤瘡疤痕患者根據(jù)隨機數(shù)字法進行分組，分別為對照組和研究組，每組30例。對照組男性16例，女性14例；年齡18～30歲，平均年齡為（24.8±1.54）歲；病程2～9年，平均病程為（6.02±0.58）年；Fitzpatric皮膚分型：Ⅲ型15例，Ⅳ型15例；痤瘡疤痕權(quán)重評分（42.84±2.73）分。研究組男性14例，女性16例；年齡18～30歲，平均年齡為（25.7±1.32）歲；病程3～8年，平均病程為（5.43±0.63）年；Fitzpatric皮膚分型：Ⅲ型14例，Ⅳ型16例；痤瘡疤痕權(quán)重評分（43.27±2.58）分。兩組患者的性別、年齡等資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。納入標準：①符合痤瘡疤痕診斷標準[6]；②病變位于面部，且皮損穩(wěn)定半年以上；③痤瘡Pillsbury分類為Ⅲ～Ⅳ型；④患者知情且同意本研究方案。排除標準：①孕婦、哺乳期婦女；②瘢痕體質(zhì)；③凝血障礙性疾病者；④明顯活動性痤瘡皮損3個月以上；⑤單純皰疹患者；⑥治療前4個月內(nèi)外用含堿性成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子藥物者；⑦治療前6個月內(nèi)面部做過化學(xué)、激光剝脫、填充劑治療、口服維甲酸類藥物者；⑧皮膚腫瘤患者。本研究獲本院倫理委員會批準，所有患者均自愿參加實驗并簽署知情同意書。

1.2 治療方法

對照組患者給予點陣超脈沖CO2激光治療，研究組患者在點陣超脈沖CO2激光治療后外用rhEGF凝膠。

點陣超脈沖CO2激光儀KL型（吉林科英激光公司），功率1～25 W，波長10 600 nm，微脈沖能量10～100 mJ，脈寬 ＜1 ms。

兩組患者在治療前均進行面部清潔，涂抹復(fù)方利多卡因并覆蓋密封的敷膜（紫光復(fù)方利多卡因乳膏，北京紫光制藥有限公司，國藥準字H20063466），使用點陣超脈沖CO2激光治療。微脈沖能量為30～50 mJ，點陣覆蓋率為9%-25%或能量密度為14～22 J/cm2，治療區(qū)域為方形或圓形。研究組患者在點陣超脈沖CO2激光治療后外用rhEGF凝膠（易孚，桂林華諾威基因藥業(yè)股份有限公司，國藥準字S20020112），3次/ d，共7 d。每組各治療3次，每次治療間隔1～2個月。所有患者不得擅自使用消毒劑，保持創(chuàng)面清潔干燥，創(chuàng)面愈合后注意防曬和保濕。

1.3 觀察指標

1.3.1 療效評價指標 所有患者于治療前及第3次治療后2個月拍照，由2名皮膚科醫(yī)師對患者治療前后的照片進療效評價，包括創(chuàng)面愈合情況、腫脹、色素沉著、瘢痕增生等，記錄患者的不良反應(yīng)及患者滿意程度。療效判定分為痊愈、顯效、有效、無效4個等級[7]，痊愈：患者的新生皮膚平坦，80%以上疤痕得到修復(fù)，膚色正常，且患者滿意；顯效：患者的新生皮膚較平坦，60%～80%疤痕得到修復(fù)，膚色有輕微色素沉著，且患者較滿意；有效：40%以下疤痕得到修復(fù)，膚色有明顯色素沉著，色素沉著消退較慢；無效：疤痕修復(fù)不明顯，色素沉著1年內(nèi)未消退，且患者不滿意。有效率=（痊愈+顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3.2 TLR2表達水平 所有患者于治療前及第3次治療后2個月空腹抽取外周肝素抗凝靜脈血5 ml，分裝成3 管，采用流式細胞儀Cytomics FC 500（美國貝克曼）檢測外周血CD14+單核細胞TLR2表達率，采用Cell Quest 軟件分析，以CD14和TLR2抗體染色雙陽性細胞百分率記錄結(jié)果。

1.3.3 皮膚屏障相關(guān)指標 ①皮膚生理指標。所有患者于治療前及第3次治療后2個月清潔面部后，在恒濕恒溫環(huán)境中30 min 后，采用TM300、pH900及CM825檢測經(jīng)皮水分丟失（transepidermal water loss，TEWL）、pH值及角質(zhì)層含水量，采用CR200檢測皮膚紅斑情況（a值）。②乳酸刺激實驗。所有患者于治療前及第3次治療后2個月，將50μl的5%乳酸滴到直徑0.5 cm的濾紙上，置于患者鼻唇溝處，分別于0、2.5、5.0、8.0 min詢問患者刺痛感，根據(jù)4分法計算總分，3分為重度刺痛，2分為中度刺痛，1分為輕度刺痛，0分為無刺痛。③角質(zhì)層完整性檢測。所有患者于治療前及第3次治療后2個月，使用D-squame膠帶連續(xù)粘脫20次，得到角質(zhì)層樣本，將樣本浸泡于1%的三氯醋酸溶液中，4℃過夜，采用BCA蛋白分析試劑盒檢測蛋白質(zhì)含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的療效比較

研究組患者的治療總有效率為93.33%（28/30），對照組患者的治療總有效率為70.00%（21/30），經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.601，P=0.035），研究組患者的治療總有效率高于對照組，說明rhEGF聯(lián)合點陣激光對痤瘡疤痕具有較好的治療效果。見表1。

2.2 治療前后兩組患者皮膚生理指標比較

治療前，兩組患者的TEWL、pH值、角質(zhì)層含水量、a值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的TEWL、a值均較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且研究組低于對照組；兩組患者的pH值較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且研究組低于對照組；兩組患者的角質(zhì)層含水量較治療前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且研究組高對照組，見表2。

2.3 治療前后兩組患者乳酸刺激、角質(zhì)層完整性比較

治療前，兩組患者的乳酸刺激實驗總分、粘脫蛋白質(zhì)含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的乳酸刺激實驗總分、粘脫蛋白質(zhì)含量均較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且研究組低于對照組，見表3。

2.4 治療前后兩組患者TLR2表達率比較

治療前，兩組患者的TLR2表達率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的TLR2表達率較治療前降低，且研究組患者低于對照組（P＜0.05），見表 4。

2.5 兩組患者的不良反應(yīng)比較

兩組患者的不良反應(yīng)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 5。

表1 兩組患者的療效比較 例（%）

表2 治療前后兩組患者皮膚生理指標比較 （±s）

表2 治療前后兩組患者皮膚生理指標比較 （±s）

t值 P值治療前 治療后 治療前 治療后研究組（n =30） 23.03±6.53 19.03±4.25 2.810 0.007 6.12±0.38 5.65±0.52 3.321 0.002對照組（n =30） 22.86±6.47 21.67±5.78 0.750 0.456 5.97±0.42 5.89±0.46 1.140 0.258 t值 0.101 2.021 1.451 0.869 P值 0.923 0.048 0.152 0.389 TEWL / [g/（h·m2）]pH值組 別t值 P值t值 P值治療前 治療后 治療前 治療后研究組（n =30） 31.45±11.21 46.24±15.63 4.211 0.000 21.34±3.32 15.73±2.56 7.331 0.000對照組（n =30） 31.36±11.34 36.85±16.75 1.491 0.143 21.25±3.46 19.81±2.67 1.800 0.076 t值 0.030 2.239 0.100 6.040 P值 0.975 0.029 0.918 0.000角質(zhì)層含水量/AU a值組 別t值 P值

表3 治療前后兩組患者乳酸刺激、角質(zhì)層完整性比較 （±s）

表3 治療前后兩組患者乳酸刺激、角質(zhì)層完整性比較 （±s）

t值 P值治療前 治療后 治療前 治療后研究組（n =30） 4.02±3.05 1.84±2.21 3.170 0.002 39.67±13.25 30.57±10.24 2.981 0.004對照組（n =30） 3.97±2.95 3.25±2.42 1.031 0.306 39.74±13.18 36.34±11.35 1.070 0.289 t值 0.059 2.360 0.020 2.007 P值 0.949 0.022 0.984 0.043乳酸刺激實驗總分 粘脫蛋白質(zhì)含量/μg組別t值 P值

表4 治療前后兩組患者TLR2表達率比較 （%，±s）

表4 治療前后兩組患者TLR2表達率比較 （%，±s）

t值 P值治療前 治療后研究組（n =30） 85.63±11.46 29.82±6.51 26.780 0.000對照組（n =30） 85.11±12.43 35.64±7.28 18.810 0.000 t值 0.191 3.260 P值 0.846 0.002 TLR2表達率組別

表5 兩組患者的不良反應(yīng)比較 例（%）

3 討論

目前，臨床上治療痤瘡疤痕主要采用超脈沖CO2激光，通過熱凝固和熱剝脫形成微創(chuàng)小孔，創(chuàng)傷后的小孔與小孔間正常組織產(chǎn)生熱橋接，啟動皮膚創(chuàng)傷修復(fù)機制（炎癥階段、增值階段、重塑階段）新生大量膠原蛋白，達到真皮框架結(jié)構(gòu)重建，痤瘡瘢痕撫平[8]。點陣激光治療是利用激光在皮膚上打出均勻分布的小孔，從而引發(fā)皮膚一系列的生化反應(yīng)，達到換膚的效果，該技術(shù)能夠保留部分的正常皮膚，因此，患者的恢復(fù)較快[9]。點陣超脈沖CO2激光治療效果較好，術(shù)后瘢痕發(fā)生率低，且術(shù)后需要休息的時間大大縮短。rhEGF能夠促進皮膚創(chuàng)面組織修復(fù)過程中合成DNA、RNA和羥脯氨酸，從而加速創(chuàng)面上皮細胞的增殖和肉芽組織的生成，進而縮短創(chuàng)面愈合時間，提高修復(fù)質(zhì)量[10]。此外，rhEGF還能夠促進細胞外透明質(zhì)酸、糖蛋白等大分子的合成和分泌，保持創(chuàng)面濕潤環(huán)境，有利于細胞生長；并且可以在創(chuàng)面表面形成一層薄膜，具有屏障保護作用，防止細菌感染[11]。

本研究結(jié)果顯示，研究組患者的治療總有效率（93.33%）高于對照組（70.00%），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。說明rhEGF聯(lián)合點陣激光對治療痤瘡疤痕具有良好的治療效果。一方面是由于點陣超脈沖CO2激光治療具有汽化功能和真皮熱刺激功能，另一方面是由于rhEGF能夠促進細胞分裂，使得患者的治療效果較為理想。

痤瘡患者由于面部皮脂分泌旺盛，造成角質(zhì)細胞間脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)被破壞，皮膚屏障功能受損，而皮膚屏障功能受損會加重患者的炎癥反應(yīng)，使患者病情發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組患者的TEWL、a值均較治療前降低，且研究組患者低于對照組；兩組患者的pH值較治療前降低，且研究組患者低于對照組；兩組患者的角質(zhì)層含水量較治療前升高，且研究組患者高對照組。治療后，兩組患者的乳酸刺激實驗總分、粘脫蛋白質(zhì)含量均較治療前降低，且研究組患者低于對照組。說明rhEGF聯(lián)合點陣激光治療能夠改善痤瘡疤痕患者的皮膚屏障功能，提高患者的皮膚角質(zhì)層含水量，改善皮膚紅斑情況。由于痤瘡患者的皮膚屏障功能受損，造成經(jīng)表皮失水量增加，表皮角化過度，促進粉刺形成。痤瘡疤痕患者激光治療后給予rhEGF凝膠，能夠提高患者的皮膚角質(zhì)層含水量，增強皮膚對微生物的抵御力，同時降低皮膚的敏感性，進而達到治療效果。

在機體的毛囊皮脂腺單元中存在多種微生物，當細菌異常增多時，出現(xiàn)痤瘡；抑制細菌生長能夠緩解痤瘡。痤瘡作為一種皮膚病，在其發(fā)生、發(fā)展過程中痤瘡丙酸桿菌能夠誘導(dǎo)皮膚的局部炎癥反應(yīng)以及機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。TLR作為跨膜非催化性蛋白質(zhì)，當病原菌侵入機體物理屏障時，TLR識別并激活機體產(chǎn)生免疫細胞應(yīng)答反應(yīng)。研究報道[12]痤瘡丙酸桿菌能夠活化TLR2，進而分泌IL-12等細胞因子，最終引發(fā)炎癥，且TLR2活化及IL-1分泌均可能導(dǎo)致粉刺，因此，TLR2在痤瘡的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組患者的TLR2表達率較治療前降低，且研究組患者低于對照組。說明痤瘡疤痕患者給予rhEGF聯(lián)合點陣激光治療后，能夠降低患者TLR2的表達水平，從而使細胞因子的水平降低，進而減輕炎癥反應(yīng)，最終使患者病情好轉(zhuǎn)。推測在痤瘡發(fā)生、發(fā)展過程中，痤瘡丙酸桿菌在毛囊內(nèi)定植，TLR2能夠識別痤瘡丙酸桿菌細胞壁肽聚糖，進而激活多種信號傳導(dǎo)途徑，從而上調(diào)TLR2表達，誘導(dǎo)機體的免疫應(yīng)答，促進多種促炎因子釋放，使免疫活性細胞在痤瘡丙酸桿菌入侵部位聚集，導(dǎo)致炎癥發(fā)生，最終引起各種痤瘡皮損。痤瘡疤痕患者激光治療后給予rhEGF凝膠，能夠提高患者的皮膚表皮細胞數(shù)量，增加表皮層厚度，從而增強皮膚屏障功能，防止感染；同時能夠保持創(chuàng)面濕潤，間接減輕炎癥反應(yīng)，降低炎癥因子水平，進而達到治療效果。

此外，本研究結(jié)果顯示，兩組患者的不良反應(yīng)比較無統(tǒng)計學(xué)差異。說明rhEGF聯(lián)合點陣激光對于治療痤瘡疤痕安全性良好。痤瘡疤痕患者激光治療后給予rhEGF凝膠，能夠改善患者激光治療的疼痛、紅斑等癥狀，減輕色素沉著，縮短結(jié)痂時間，有助于患者術(shù)后恢復(fù)。

綜上所述，rhEGF聯(lián)合點陣激光對治療痤瘡疤痕具有良好的治療效果，能夠降低患者的TLR2表達水平，改善皮膚屏障功能，降低不良反應(yīng)，值得臨床推廣應(yīng)用。但由于本研究的樣本數(shù)較少，且沒有排除其他因素，仍需大量病例數(shù)目，多種研究方法證實。

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（張蕾 編輯）

Effect of rhEGF combined with lattice laser on skin barrier function and TLR2 level in patients with acne scars

Cui-yang Zhao1, Dan-ying Xia1, Lei Ma2
(1. Department of Dermatology & STD, Suzhou Kowloon Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University, Suzhou, Jiangsu 215028, China; 2. Department of Dermatology, the Affiliated Hospital, Binzhou Medical University, Binzhou, Shandong 256600, China)

ObjectiveTo discuss the effect of recombinant human epidermal growth factor (rhEGF)combined with lattice laser on skin barrier function and Toll-like receptor 2 (TLR2) level in patients with acne scars.MethodsFrom January 2014 to December 2015, 60 patients with acne scars were selected for this study in our hospital and the patients were randomly divided into study group (30 cases) and control group (30 cases). The control group was given lattice ultra pulse CO2laser treatment, the study group

rhEGF gel for external use after lattice ultra pulse CO2laser treatment. The curative effect, TLR2 expression rate of CD14+monocytes in peripheral blood and skin barrier function of the patients were compared.ResultsThe total effective rate of the study group was significantly higher than that of the control group (93.33% vs. 70.00%,P＜ 0.05). After treatment, the TEWL and a value of the two groups were reduced, more significantly in the study group than in the control group (P＜ 0.05);the pH value was reduced in the two groups, was lower in the study group than in the control group (P＞ 0.05); the corneous layer water content of the two groups was increased and significantly higher in the study group than in the control group (P＜ 0.05). After treatment, the total score of lactic acid stimulation test and protein content of the two groups were decreased, more obviously in the study group than in the control group (P＜ 0.05). After treatment,the TLR2 expression rate of the two groups was reduced, and was significantly lower in the study group than in the control group (P＜ 0.05). The incidences of scar hyperplasia, pigmentation and persistent flush of the study group were significantly lower than those of the control group (P＜ 0.05).ConclusionsrhEGF combined with lattice laser is effective for acne scars. It can reduce the expression of TLR2, improve skin barrier function, lower the incidences of adverse reactions, is worthy of application.

recombinant human epidermal growth factor; lattice laser; acne scar; skin barrier function; Tolllike receptor 2

R751

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.28.022

1005-8982（2017）28-0110-05

2017-02-06