鄭 操，陳 濤，田 華，舒 靜，何東平(.湖北工程學(xué)院 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北省植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖北 孝感4000；.中國科學(xué)院 武漢病毒研究所，武漢 4007； .武漢輕工大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院， 武漢 400)

含DHA藻油的大豆調(diào)和油對SD大鼠大腦皮層組織抗氧化能力和過氧化反應(yīng)的影響

鄭 操1，陳 濤2，田 華3，舒 靜3，何東平3
(1.湖北工程學(xué)院 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北省植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖北 孝感432000；2.中國科學(xué)院 武漢病毒研究所，武漢 430072； 3.武漢輕工大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院， 武漢 430023)

以SD大鼠為實驗對象，向其灌胃不同含量DHA藻油的大豆調(diào)和油，通過測定其大腦皮層組織丙二醛(MDA)含量、總抗氧化能力(T-AOC活性)和過氧化氫酶(CAT)活性的變化，考察DHA藻油促進(jìn)機體抗氧化能力和抑制機體過氧化反應(yīng)的生理功效。結(jié)果表明：含DHA藻油的大豆調(diào)和油在一定的DHA劑量范圍內(nèi)對降低MDA的含量具有顯著影響，而T-AOC活性和CAT活性則與DHA的劑量呈明顯的正相關(guān)關(guān)系。間接說明大豆調(diào)和油中所添加的DHA藻油在增強機體清除自由基、降低脂質(zhì)過氧化損傷等方面具有積極的功效。

DHA 藻油；大豆調(diào)和油；丙二醛；總抗氧化能力；過氧化氫酶

深海魚油是DHA的傳統(tǒng)來源，然而隨著環(huán)境污染的日趨嚴(yán)重以及海洋魚資源的日益短缺，從深海魚油中獲取DHA并不是長久之計[1-2]。與動植物相比，微生物具有繁殖速度快、代謝旺盛、易于培養(yǎng)等特點，且微生物發(fā)酵生產(chǎn)不受產(chǎn)地、氣候等外部環(huán)境制約，因此用微生物發(fā)酵生產(chǎn)DHA符合可持續(xù)性發(fā)展戰(zhàn)略。目前已有多種微生物如裂壺藻(Schizochytrium)、寇氏隱甲藻(Crypthecodiniumcohnii)和吾肯氏壺藻(Ulkeniaamoeboida)能夠產(chǎn)生DHA，其產(chǎn)品稱為DHA藻油[3]，并且作為食品添加劑已被列入食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)(GB 26400—2011)。同時，2010年國家衛(wèi)生和計劃生育委員會批準(zhǔn)DHA藻油作為新資源食品。

當(dāng)前，DHA藻油常以微膠囊粉劑的形式添加于嬰幼兒奶粉等產(chǎn)品中，如果將DHA藻油直接添加到大眾食用植物油中，不僅簡化了DHA藻油的加工工藝過程從而節(jié)約生產(chǎn)成本，而且為普通大眾補充DHA提供了一條極為便利的途徑。

我們前期的工作表明，食用植物油(如大豆調(diào)和油)中添加DHA藻油具有良好的穩(wěn)定性[4]。本文以SD大鼠為實驗對象，考察含DHA藻油的大豆調(diào)和油對SD大鼠大腦皮層組織抗氧化活性和過氧化反應(yīng)的影響，以期為DHA藻油直接添加入食用調(diào)和油提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 原料與試劑

初斷乳雄性SD大鼠，體重均位于(80±10)g范圍內(nèi)，共30只，由武漢大學(xué)動物實驗中心提供。

總蛋白(TP)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)、過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所；0.9%生理鹽水注射液；大豆油等植物油均購于大型超市；DHA藻油，由嘉必優(yōu)生物技術(shù)(武漢)股份有限公司提供。

1.1.2 儀器與設(shè)備

微量移液器；旋渦混勻器；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋；可見分光光度計；BC-2600全自動血液細(xì)胞分析儀；3K15高速冷凍離心機；S10高速勻漿機(手提式高速分散器)。

1.2 實驗方法

1.2.1 油品的調(diào)配

含DHA藻油的大豆調(diào)和油是將DHA藻油和大豆油等按照合適的比例混合、超聲而成[4]，調(diào)和油的理化性質(zhì)分析結(jié)果見文獻(xiàn)[4-5]。

1.2.2 動物分組與飼養(yǎng)

初斷乳雄性SD大鼠30只，隨機分成5組，每組6只。所有組的共同點是均喂食普通飼料，不同的是額外灌胃的油品成分不一樣，其中CK1為對照組，額外灌胃大豆調(diào)和油(2 mL/(kg·d))；CK2為對照組，額外灌胃DHA藻油(2 mL/(kg·d))；DHA低、中、高劑量組(250、500、750 mg/(kg·d))分別按配比加入大豆調(diào)和油中構(gòu)成不同DHA劑量的給藥組[4,6-8]。

在相同的自然環(huán)境下，普通飼料定量進(jìn)食，自由飲水，保持自然光照，良好通風(fēng)，以及一定室溫，飼養(yǎng)1周以使SD大鼠適應(yīng)實驗環(huán)境。大鼠生長活動正常后，每日上午通過灌胃給藥，定量進(jìn)食，自由飲水，持續(xù)給藥4周。所有動物實驗均在武漢大學(xué)動物實驗中心進(jìn)行。

1.2.3 測定方法

大鼠禁食24 h(可自由飲水)，麻醉大鼠，放血后迅速于冰上剝離大腦組織，隨后用預(yù)冷的生理鹽水漂洗并剔除血液與結(jié)締組織，濾紙吸干，置于-20℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

從冰柜中取出腦組織解凍，準(zhǔn)確稱取0.1 g，按1∶9(質(zhì)量體積比)加入生理鹽水，置于高速勻漿機內(nèi)充分研磨使細(xì)胞破碎，所得勻漿液隨后在3 500 r/min離心10 min，取上清液進(jìn)行MDA含量和T-AOC、CAT活性的測定。各測定方法均按照試劑盒所提供說明書進(jìn)行。其中T-AOC活性和CAT活性以TP進(jìn)行歸一化處理。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS 11.0軟件進(jìn)行分析，采用單因素方差t檢驗進(jìn)行組間比較，Plt;0.05表示在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性差異，Plt;0.01表示在統(tǒng)計學(xué)上具有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠腦組織中MDA含量

MDA是生物體內(nèi)自由基與脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物。MDA的產(chǎn)生能加劇膜的損傷，其含量變化可間接反映體內(nèi)自由基損傷引起的脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)的強弱[9-10]。不同組別大鼠大腦皮層組織的MDA含量見表1。

表1 不同組別大鼠大腦皮層組織的MDA含量 nmol/L

注：*表示該劑量組與CK1比較有顯著性差異(Plt;0.05)；**表示該劑量組與CK1比較有極顯著性差異(Plt;0.01)。下同。

從表1可以看出，與CK1相比，DHA藻油低、中、高劑量組均極顯著地(Plt;0.01)降低大腦皮層組織中MDA的含量，但隨著DHA藻油劑量的升高M(jìn)DA含量呈現(xiàn)出先降低后升高的變化趨勢。表明DHA藻油在一定范圍內(nèi)能夠有效地保護(hù)機體脂質(zhì)免受自由基侵害，一旦DHA藻油超出最佳范圍，這種保護(hù)作用將被解除，可能是由于DHA極易被氧化所致。

2.2 大鼠腦組織的T-AOC活性

T-AOC是體內(nèi)酶促體系抗氧化物質(zhì)和非酶促體系抗氧化物質(zhì)的總和。T-AOC的主要作用是維持體內(nèi)環(huán)境活性氧的動態(tài)平衡，分解過高的自由基和活性氧，提高機體抗自由基的能力，減少脂質(zhì)過氧化[11-12]。不同組別大鼠大腦皮層組織的T-CAT活性見表2。

表2 不同組別大鼠大腦皮層組織的T-AOC活性 U/mg

從表2可以看出，與CK1相比，DHA藻油低劑量組的T-AOC活性并沒有顯著性變化(Pgt;0.05)，但隨著DHA藻油劑量的提高，T-AOC活性逐步增強，且劑量越高，效果越明顯。這表明DHA藻油對T-AOC活性的提升有一定促進(jìn)作用。

2.3 大鼠腦組織的CAT活性

CAT是過氧化氫酶，能夠清除脂類代謝過程中產(chǎn)生的過氧化氫，從而使細(xì)胞免于遭受過氧化氫的毒害[13-15]。不同組別大鼠大腦皮層組織的CAT活性見表3。

表3 不同組別大鼠大腦皮層組織的CAT活性 U/mg

從表3可以看出，與CK1相比，DHA藻油低劑量組的CAT活性無明顯變化，而中劑量組差異顯著(Plt;0.05)，高劑量組差異極顯著(Plt;0.01)。這說明DHA藻油中、高劑量組能顯著或極顯著增強SD大鼠腦組織中CAT活性，且高劑量組對提高大鼠腦組織中CAT活性的效果最好。

3 結(jié) 論

本研究從功能性角度出發(fā)，考察了含DHA藻油的大豆調(diào)和油對SD大鼠大腦皮層組織過氧化反應(yīng)和抗氧化能力的影響。結(jié)果表明：含DHA藻油的大豆調(diào)和油能不同程度地減少SD大鼠大腦皮層組織的MDA含量，增強CAT活性和T-AOC活性。間接說明含DHA藻油的大豆調(diào)和油有助于增強機體清除自由基，降低脂質(zhì)過氧化損傷。綜合對降低MDA、提高CAT活性和T-AOC活性的總體效果，選擇DHA藻油高劑量組，即DHA含量為750 mg/(kg·d)的大豆調(diào)和油為最佳配方。至于含DHA藻油大豆調(diào)和油是否具有直接清除自由基和提高過氧化酶活性的功效及其作用機理還有待于進(jìn)一步研究。

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EffectofsoybeanblendoilcontainingDHAalgaeoilonantioxidantcapacityandperoxidationofcerebralcortexofSDrat

ZHENG Cao1, CHEN Tao2, TIAN Hua3, SHU Jing3, HE Dongping3
(1.Hubei Province Research Center of Engineering Technology for Utilization of Botanical Functional Ingredients, School of Life Science and Technology, Hubei Engineering University, Xiaogan 432000, Hubei, China; 2.Wuhan Institute of Virology, CAS, Wuhan 430072, China; 3.College of Food Science and Engineering, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China)

SD rat was firstly fed with soybean blend oil containing different contents of DHA algae oil, and then malondialdehybe (MDA) content and of total antioxidant capacity (T-AOC activity) and catalase (CAT) activity were measured to investigate the effect of DHA algae oil on the promotion of antioxidant capacity and the suppression of peroxidation of cerebral cortex of SD rat. The results showed that soybean blend oil containing DHA algae oil had a significant role in the reduction of MDA content in certain scope, while the activities of T-AOC and CAT were positively correlated with the dosage of DHA. These results indicated that DHA algae oil added in soybean blend oil had positive effects on enhancing the capacity of radical scavenging and reducing the damage of lipid peroxidation.

DHA algae oil; soybean blend oil; malondialdehyde; total antioxidant capacity; catalase

2016-10-14；

2017-02-09

湖北省教育廳中青年人才項目(Q20171707)

鄭 操(1988)，男，講師，博士，研究方向為微生物油脂(E-mail)zhengc1314@163.com。

何東平，教授，博士(E-mail)hedp123456@163.com。

油脂營養(yǎng)

R151;R55

A

1003-7969(2017)10-0084-03