張順平

RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定消化膠囊中厚樸酚與和厚樸酚的含量

張順平

目的 建立同時(shí)測(cè)定消化膠囊中厚樸酚與和厚樸酚含量的反向-高效液相色譜法。方法 采用高效液相色譜儀。 色譜柱：Amethyst C18-H（200 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水-冰醋酸（60∶38∶2，V/V/V），流速為1.0 ml/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長為294 nm。結(jié)果 厚樸酚進(jìn)樣量在0.1048～2.0960 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=1.0000），平均回收率（n=6）為 98.72%（RSD=0.26%）；和厚樸酚進(jìn)樣量在 0.1014～2.0276 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=1.0000），平均回收率（n=6）為96.73%（RSD=0.69%）。結(jié)論 建立的反向-高效液相色譜法準(zhǔn)確、快捷，簡便，結(jié)果穩(wěn)定，可用于消化膠囊的含量測(cè)定。

消化膠囊；厚樸酚；和厚樸酚；反向-高效液相色譜法；含量測(cè)定

消化膠囊是由炒厚樸、木香、炒枳殼等九味藥，經(jīng)過粉碎、過篩、混合后制得，具有消食、健胃、除滿的功效。用于治療胸腹脹滿、食欲不化、嘔吐腹瀉腹痛等癥狀患者。消化膠囊是曲靖市第一人民醫(yī)院傳統(tǒng)醫(yī)院制劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］中未建立同時(shí)測(cè)定這兩個(gè)成分的方法。由于處方中的炒厚樸含有厚樸酚與和厚樸酚，根據(jù)相關(guān)資料［2］，該試驗(yàn)建立同時(shí)測(cè)定消化膠囊中厚樸酚與和厚樸酚的RP-HPLC法。該方法簡便，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜儀，（包括G1311A四元泵，G1329A ALS自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A TCC柱溫箱，G1315D VWD檢測(cè)器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；一體式超純水儀（PURELAB Flex 3，英國 ELGA 公司）。

對(duì)照品厚樸酚 （批號(hào)110729-200412，含量100%）、和厚樸酚 （批號(hào) 110730-201313，含量99.1%）均購于中國食品藥品檢定研究院；消化膠囊（云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，規(guī)格為每粒裝0.28 g，醫(yī)院制劑，批號(hào) 20150102、20150112、20150131）；乙腈為色譜純，甲醇為分析純，冰醋酸為分析純，水為超純水。

2 色譜條件

色譜柱：Amethyst C18-H（200 mm×4.6，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水-冰醋酸（60∶38∶2，V/V/V），流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長：294 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

3 溶液制備

3.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品適量，置100 ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml各含0.1 mg的混合溶液，即得。

3.2 供試品溶液 取樣品內(nèi)容物，混勻，取約0.67g，精密稱定，置25 ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率 500 W，頻率 40 kHz）40 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

3.3 陰性樣品溶液 按處方及工藝制備缺炒厚樸藥材的陰性樣品 （由云南省曲靖第一人民醫(yī)院提供），再按“3.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

4 方法

4.1 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取供試品溶液、混合對(duì)照品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，在上述色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果詳見圖1。結(jié)果可見，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上樣品具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性樣品在對(duì)應(yīng)位置無吸收，供試品中主峰與其相鄰色譜峰均能達(dá)到基線分離，對(duì)本品中厚樸酚與和厚樸酚的測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

4.2 線性關(guān)系 精密吸取“3.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液 1、2、4、6、8、10、20 μl， 分別重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定3次，記錄峰面積。以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)（厚樸酚：0.1048、0.2096、0.4192、0.6288、0.8384、1.0480、2.0960； 和厚樸酚 ：0.1014、0.2028、0.4055、0.6083、0.8110、1.0138、2.0276），峰面積平均值（Y）為縱坐標(biāo)（厚樸酚：151.5、292.5、580.9、870.5、1160.2、1452.8、2924.1；和厚樸酚：168.6、325.3、648.2、920.2、1294.5、1620.6、3250.5），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚的回歸方程：

結(jié)果表明，厚樸酚進(jìn)樣量在0.1048～2.0960 μg范圍內(nèi)，和厚樸酚進(jìn)樣量在0.1014～2.0276 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4.3 精密度 精密吸取“4.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液10 μl，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為0.32%、0.29%，表明儀器精密度良好。

4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液 （樣品批號(hào)20150131），在同一色譜條件下，分別于配置后0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。 結(jié)果厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為0.52%、0.41%。表面供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（批號(hào)：20150131）研細(xì)，精密稱取6份，每份約0.67 g。按“3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣10 μl測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果測(cè)得每1 g樣品中含厚樸酚1.7913 mg，RSD為0.38%；含和厚樸酚1.3670 mg，RSD=0.28%。

4.6 回收率試驗(yàn) 取同一批樣品（批號(hào)：20150131）研細(xì)，精密稱取6份，每份約0.34 g，每份均精密加入按 “3.1”項(xiàng)下的方法制備的混合對(duì)照品溶液10.0 ml，分別按“3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表 1、2。

4.7 樣品含量測(cè)定 取樣品3批每批三份適量，分別按“3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中厚樸酚、和厚樸酚的含量，結(jié)果見表3、4。

表1 厚樸酚回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表2 和厚樸酚回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表3 樣品中厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

表4 樣品中和厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

5 討論

5.1 定量分析對(duì)象及分析物的確定 炒厚樸為處方中的君藥，目前尚無有關(guān)含量測(cè)定的相關(guān)報(bào)道。因此，該試驗(yàn)選取方中的炒厚樸主藥進(jìn)行定量分析研究；而厚樸酚與和厚樸酚作為厚樸的主藥藥用成分的定量分析已有相關(guān)報(bào)道［3，4］，測(cè)定其成分更能有效控制其質(zhì)量。

5.2 提取條件的確定 試驗(yàn)中曾采用三種提取方法進(jìn)行提?。旱谝环N用乙醇提取后直接進(jìn)樣分析；第二種將樣品置于索氏提取器中，加甲醇適量加熱回流提取3 h后，將提取液進(jìn)樣分析［2］；第三種用甲醇提取后，直接進(jìn)樣分析［2］。結(jié)果，第二、三種提取方法均能達(dá)到良好的分離效果，從節(jié)約時(shí)間及經(jīng)濟(jì)成本出發(fā)，最終選擇了甲醇提取后直接進(jìn)樣分析。

5.3 流動(dòng)相的確定 參考中國藥典及相關(guān)文獻(xiàn)中厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定報(bào)道［2，5］，分別采用甲醇∶水（22∶78，V/V） 與乙腈－水－冰醋酸（60∶38∶2，V/V/V）進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用乙腈－水－冰醋酸（60∶38∶2，V/V/V）保留時(shí)間合適且各成分獲得較好的分離。

［1］云南省食品藥品監(jiān)督管理局．云南醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)［S］．滇ZJGF/2005－543．

［2］ 中國藥典委員會(huì)．中國藥典．2015年版：一部［S］．2015：251，1204，1205．

［3］蘆金清．中藥厚樸的化學(xué)成分及臨床研究［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1989（5）：39－42．

［4］殷帥文，何旭梅，朗峰祥，等．厚樸化學(xué)成分和藥理作用研究概況［J］．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（6）：133－135．

［5］邢俊波，賈恒明．HPLC法測(cè)定養(yǎng)胃軟膠囊中厚樸酚、和厚樸酚的含量［J］．中國中醫(yī)藥信息雜志，2008（1）：55－56．

統(tǒng)計(jì)表的設(shè)計(jì)內(nèi)容

1．表題。置于表身的上方，應(yīng)簡單明了，高度概括表的主題。

2．線條。通常用三線表，根據(jù)縱標(biāo)目分層需要，表頭可用短線分隔，最多不超過兩層。如有合計(jì)（或總計(jì)）項(xiàng)，可不用短橫線分隔。不用縱線、其他橫線和左上角分標(biāo)目斜線。

3．縱標(biāo)目。也稱表頭，是統(tǒng)管由上到下各項(xiàng)數(shù)據(jù)的條目，可用短線分隔，最多不超過兩層。

4．橫標(biāo)目。是統(tǒng)管由左至右各項(xiàng)數(shù)據(jù)的條目，根據(jù)分級(jí)需要，下一級(jí)條目應(yīng)比上一級(jí)條目縮進(jìn)1個(gè)字距，不超過兩級(jí)；轉(zhuǎn)行條目也應(yīng)縮進(jìn)1個(gè)字距，以與非轉(zhuǎn)行條目區(qū)別。

5．分組研究統(tǒng)計(jì)表縱、橫標(biāo)目。最好以分組名稱為縱標(biāo)目，以各比較指標(biāo)或觀察項(xiàng)目為橫標(biāo)目，各級(jí)數(shù)據(jù)按比較指標(biāo)或觀察項(xiàng)目由上至下排，以便于各組的“縱向聯(lián)系”和組間的“橫向比較”，各組觀察對(duì)象數(shù)分別寫在分組名稱后的圓括號(hào)內(nèi)。

6．計(jì)量單位符號(hào)。全表數(shù)據(jù)為一種單位符號(hào)的，可統(tǒng)一寫在表題的相應(yīng)文字后的圓括號(hào)內(nèi)；全表數(shù)據(jù)為多種單位符號(hào)的，可分別寫在相應(yīng)標(biāo)目后的圓括號(hào)內(nèi)。

7．?dāng)?shù)據(jù)。數(shù)字通常按小數(shù)點(diǎn)對(duì)齊，小數(shù)點(diǎn)后保留數(shù)位應(yīng)盡可能一致；均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差以符號(hào)“±”對(duì)齊。

8．顯著性檢驗(yàn)結(jié)果標(biāo)注。應(yīng)在有顯著性的數(shù)值上角加注“*”號(hào)，表示差異有顯著性（P＜0．05），不標(biāo)注表示無顯著性差異（P＞0．05）。

9．注釋。對(duì)表設(shè)計(jì)或內(nèi)容上的未盡問題，可在應(yīng)加注的相應(yīng)處加注其他符號(hào)或數(shù)碼，注釋文字，包括對(duì)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果標(biāo)注的文字說明，全部放在表的底線以下，不直接列入表內(nèi)。

10．特殊情況的處理。應(yīng)以表述內(nèi)容為目的，合理地機(jī)動(dòng)處理。如同一組數(shù)據(jù)的單位符號(hào)不一致時(shí)，單位符號(hào)可分別加在數(shù)據(jù)后；多角度數(shù)據(jù)顯著性比較符號(hào)“*”不夠時(shí)，可另選其他符號(hào)，如符號(hào)“#”、“▲”等。

Simultaneous determination of Honokiol and Magnolol in Xiaohua capsules by RP-HPLC ZHANG

Shun-ping.Qujing City's Inspection Center for Food and Drug，Qujing，Yunnan 655000，China

Objective To establish an HPLC method for the determination of Honokiol and Magnolol in Xiaohua capsules.Methods HPLC method was adopted.The determination was performed on Amethyst C18-H（200mm×4.6mm，5μm）column with mobile phaseconsisted of acetonitrile-phosphoric acid-water （60∶38∶2，V/V/V）at the flow rate of 1.0ml/min.The column temperature was 30℃，and the detectionwavelength was set at 294nm.Results Good linearity was shown in the range of 0.1048-2.0960μg for Honokiol with the average recovery of 98.72%（RSD＝0.26%，n＝6）.0.1014-2.0276μg for Magnolol with the average recovery of 96.73%（RSD＝0.69%，n＝6）.Conclusion The RP-HPLC method is accurate，rapid and simple one，which can be used for the determination of Xiaohua capsules.

Xiaohua capsule；Honokiol；Magnolol；RP-HPLC；Content determination

R286

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.10.029

655000云南曲靖，云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心（張順平）

［2017－03－31 收稿，2017－04－23 修回］ ［本文編輯：吳 蓉］

摘自《醫(yī)學(xué)論文與書稿編寫技巧》