蔣 霞，向雪芳，黃李平，劉啟華，李 梅

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣西 南寧 530021； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科，廣西 南寧 530021)

祛風(fēng)安腦口服液的制備工藝研究Δ

蔣 霞1*，向雪芳2，黃李平3，劉啟華3，李 梅1#

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣西 南寧 530021； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科，廣西 南寧 530021)

目的：探討祛風(fēng)安腦口服液的最佳制備工藝。方法：采用L9(34)正交試驗(yàn)，以阿魏酸含量為質(zhì)量控制指標(biāo)，考察煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、加水量和醇沉體積分?jǐn)?shù)對制備工藝的影響，優(yōu)化祛風(fēng)安腦口服液的制備工藝并進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：祛風(fēng)安腦口服液的最佳制備工藝為加10倍量的水，煎煮2次，每次2 h，醇沉體積分?jǐn)?shù)為80%。結(jié)論：最佳制備工藝方案較為合理，阿魏酸的含量較高，可用于祛風(fēng)安腦口服液的制備。

祛風(fēng)安腦口服液； 阿魏酸； 高效液相色譜法； 正交試驗(yàn)

*副主任藥師。研究方向：醫(yī)院中藥制劑研發(fā)。E-mail：47240986@qq.com

#通信作者：主任藥師。研究方向：醫(yī)院中藥制劑研發(fā)。E-mail：326159970@qq.com

祛風(fēng)安腦口服液源于《備急千金要方》所載的續(xù)命湯，并在原方基礎(chǔ)上進(jìn)行化裁。該制劑主要由麻黃、川芎、獨(dú)活和當(dāng)歸等藥材組成，具有疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)和營衛(wèi)和解表祛邪的功效，臨床上用于治療中風(fēng)不省人事，筋急拘攣、神氣潰亂、半身不遂、口眼斜及不能言語等癥，為廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院常用效驗(yàn)方。阿魏酸是方中主藥當(dāng)歸、川芎的重要藥理活性成分之一?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為，阿魏酸可抑制血小板聚集和實(shí)驗(yàn)性血栓形成[1]，對心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病等均有良好療效[2]。本研究采用正交試驗(yàn)法對制劑制備的影響因素進(jìn)行考察，以阿魏酸為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定阿魏酸含量，優(yōu)選祛風(fēng)安腦口服液的制備工藝條件。

1 材料

1.1 儀器

SIL-10AF型高效液相自動進(jìn)樣器[島津國際貿(mào)易(上海)有限公司]；SPD-15C型紫外檢測器；XS205DU十萬分之一天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；R-1001N型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；超純水制造系統(tǒng)(成都越純科技有限公司)。

1.2 藥品與試劑

阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110773—201313)；麻黃、當(dāng)歸、川芎和獨(dú)活等藥材購自萬寶堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室朱丹副教授鑒定，符合《中華人民共和國藥典：一部》(2015年版)要求；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 祛風(fēng)安腦口服液的制備

參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，取處方藥材，加入適量水煎煮若干次，合并煎液，濾過。濾液濃縮，冷卻，加入無水乙醇，靜置24 h，濾過，取續(xù)濾液濃縮至100 ml，不足100 ml的加蒸餾水補(bǔ)夠，罐裝，密封，冰箱保存。

2.2 阿魏酸含量的測定

2.2.1 色譜條件：色譜柱為Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-1%冰醋酸(V∶V=30 ∶70)；檢測波長為321 nm；柱溫為25 ℃；流速為1 ml/min；進(jìn)樣量為10 μl；檢測器為SPD-15C紫外檢測器[6-9]。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取阿魏酸4.6 mg，置于25 ml 棕色容量瓶中，加甲醇定容，制得對照品儲備液，再精密量取對照品儲備液1 ml，置于10 ml棕色容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：精密量取祛風(fēng)安腦口服液2.5 ml，用乙醚萃取3次，每次加乙醚2.5 ml，揮干乙醚，用甲醇定容于10 ml容量瓶中，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液：根據(jù)處方，取除川芎、當(dāng)歸外的其他各味藥材制成陰性樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法處理，即得陰性對照溶液。

2.2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對照品、供試品和陰性對照溶液，各進(jìn)樣10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果表明，理論板數(shù)按阿魏酸計(jì)算≥5 000，阿魏酸峰與其相鄰色譜峰的分離度均>1.5，拖尾因子范圍為0.95～1.05，且陰性對照溶液無干擾，系統(tǒng)適用性良好，見圖1。

A. 對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照溶液 A.solution for comparison products; B.solution for testing products; C.solution for negative control圖1 高效液相色譜圖Fig 1 High performance liquid chromatography

2.2.6 線性關(guān)系考察：分別精密量取對照品溶液1、2、3、4、5和6 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以阿魏酸濃度為橫坐標(biāo)(X，μg/ml)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為Y=50 137X+5 242.8，r=0.999 9，表明阿魏酸在1.824～6.384 μg/ml的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗(yàn)：量取對照品溶液10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD。結(jié)果顯示，RSD=1.36%，表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品(批號：20160301)5份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，共5份，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為10 μl，記錄峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD。結(jié)果顯示，RSD=1.39%，表明本方法重現(xiàn)性好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品(批號：20160301)，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別放置0、2、4、6、8、12和24 h后按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μl，記錄阿魏酸峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，阿魏酸峰面積的RSD=2.00%，表明供試品溶液在室溫(25 ℃)下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，精密加入阿魏酸對照品適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，平均加樣回收率為98.90%，RSD=1.96%，見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Testing results of sample addition recovery

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)化處方

參考相關(guān)文獻(xiàn)[10-11]，選取煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、加水量和醇沉體積分?jǐn)?shù)為考察因素，每個(gè)因素各選取3個(gè)水平，以阿魏酸含量為考察指標(biāo)，選用L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)，因素與水平見表2，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3—4。

表2 因素與水平Tab 2 Factors and levels

結(jié)果表明，4個(gè)因素對制備工藝的影響順序?yàn)椋篈>B>D>C。由K1、K2和K3可知，最佳工藝方案為A3B3D3C2，即加10倍量的水，煎煮3次，每次2 h，醇沉體積分?jǐn)?shù)為80%。因煎煮次數(shù)的K2和K3接近，從實(shí)際生產(chǎn)節(jié)省時(shí)間與成本的角度考慮，選擇A3B2D3C2方案為最佳制備工藝方案，即加10倍量的水，煎煮2次，每次2 h，醇沉體積分?jǐn)?shù)為80%。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

以“2.3”項(xiàng)下的最佳制備工藝方案，制備3批樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算阿魏酸含量，結(jié)果見表5。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 3 Design and results of L9 (34) orthogonal experiment

表4 方差分析結(jié)果Tab 4 Results of variance analysis

注：*P<0.05

Note：*P<0.05

表5 阿魏酸含量測定結(jié)果Tab 5 Results of content determination of ferulic acid

3 討論

本研究以祛風(fēng)安腦口服液中有效成分之一的阿魏酸為檢測對象，參考《中華人民共和國藥典：一部》(2015年版)及相關(guān)文獻(xiàn)的色譜條件[3-6]，采用甲醇-1%冰醋酸(V∶V=30 ∶70)作為流動相進(jìn)行含量測定。結(jié)果顯示，阿魏酸在1.824～6.384 μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且精密度、重復(fù)性試驗(yàn)均在合理的范圍內(nèi)。表明本方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好且準(zhǔn)確度高，可用于制劑的質(zhì)量控制。本研究采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化祛風(fēng)安腦口服液的制備工藝，通過考察煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、加水量和醇沉體積分?jǐn)?shù)等4個(gè)因素，綜合評價(jià)出祛風(fēng)安腦口服液的最佳制備工藝，即加10倍量的水，煎煮2次，每次2 h，醇沉體積分?jǐn)?shù)為80%。

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ResearchonthePreparationTechnologyofQufengAnnaoOralLiquidΔ

JIANG Xia1, XIANG Xuefang2, HUANG Liping3, LIU Qihua3, LI Mei1

(1.Dept.of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Guangxi Nanning 530021, China; 2.College of Pharmacy, Guangxi Medical University, Guangxi Nanning 530021, China； 3.Dept.of Traditional Chinese Medicine, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University， Guangxi Nanning 530021, China)

OBJECTIVE: To probe into the best preparation technology of Qufeng Annao oral liquid. METHODS: L9(34) orthogonal experiment was adopted and the content of ferulic acid was set as the quality control index to inspect the effects of decocting time, decocting frequency, water addition and alcohol precipitation volume fraction on the preparation technology, so as to optimize and verify the preparation of Qufeng Annao oral liquid. RESULTS: The best preparation of Qufeng Annao oral liquid was twice decoction of 2h for each time, with 10 times of water addition and 80% of alcohol precipitation volume fraction. CONCLUSIONS: This best preparation technology is reasonable, with a comparatively high content of ferulic acid, which is suitable for the preparation of Qufeng Annao oral liquid.

Qufeng Annao oral liquid; Ferulic acid; HPLC; Orthogonal experiment

R944.1

A

1672-2124(2017)11-1468-03

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.11.008

廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項(xiàng)課題(No.GZYZ1116)；廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥管理局自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(No.gzzc1054、No.gzzc14-56)

2017-06-09)