董晨虹 ，段秀俊 ，陰孟凡 ，胥鵬鵬 ，王嘉琛 ，石高偉 ，光江紅

（1.山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西太原030024； 2.山西中醫(yī)學(xué)院白癜風(fēng)研究所，山西太原030009）

鳳仙花（Impatiens balsamina L.）為鳳仙花科鳳仙花屬一年生草本植物，主要分布于熱帶地區(qū)及亞熱帶地區(qū)，在我國主要產(chǎn)于西南地區(qū)，其根、莖、葉、花、種子均可入藥，花為鳳仙花，葉為鳳仙葉，莖為鳳仙透骨草，根為鳳仙根，種子為急性子［1］?，F(xiàn)代研究表明鳳仙花含有糖類、黃酮類、醌類、甾醇類、香豆素類等多種化學(xué)成分［2-3］。曾榮等［4］用鳳仙花水浸劑（1∶3）在試管內(nèi)進(jìn)行抗皮膚真菌實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)表明對(duì)堇色毛癬菌、許蘭黃癬菌、鐵銹色小芽孢癬菌、紅色表皮癬菌、腹股溝表皮癬菌等有不同程度的抑制作用。秦海宏等［5］通過小鼠體內(nèi)抑菌活性實(shí)驗(yàn)來觀察鳳仙花對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用。臨床上鵝掌風(fēng)、灰指甲等皮膚病為常見病及多發(fā)病，且經(jīng)久難愈，鳳仙花在臨床上除用于治療風(fēng)濕肢體痿廢、腰脅疼痛、婦女閉經(jīng)腹痛、產(chǎn)后瘀血未盡、跌打損傷、骨折、癰疽瘡毒、毒蛇咬傷等，尚用于治療鵝掌風(fēng)、灰指甲等手足癬類真菌感染疾?。?］。本實(shí)驗(yàn)通過考察鳳仙花的根、莖、葉、花、種子等不同部位水提液對(duì)紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌、白色假絲酵母菌與須癬毛癬菌的抑制作用，以期為鳳仙花的臨床抗真菌應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也期望從抗真菌的角度擴(kuò)大鳳仙花的藥源。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)器材 SLHS-100CH型恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）、W-CJ-2G型超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）、THZ-D臺(tái)式恒溫震蕩器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）、GZX-9146MBE型鼓風(fēng)電熱干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、J2609型酒精噴燈（湖北昌科天平儀器有限公司）、YXQ-LS-50S11型立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、SY-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、EL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、培養(yǎng)皿、回流管、酒精燈、無菌離心管、游標(biāo)卡尺、紗布、牛皮紙（天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司）。

1.1.2 藥物與試劑 鳳仙花、鳳仙莖、鳳仙葉、急性子、鳳仙根均由山西中醫(yī)學(xué)院白癜風(fēng)研究所提供。沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（批號(hào)：20150921）、沙氏瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：20150428）均購自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司。95%乙醇、甘油（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）均為分析純，水為去離子水（娃哈哈純凈水）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)菌種 紅色毛癬菌（編號(hào)：ATCC-28188）、石膏樣毛癬菌（編號(hào)：ATCCMYA-4439）、須癬毛癬菌（編號(hào)：ATCC-9533）均購自上海瑞楚生物科技有限公司微生物菌種保藏中心。白色假絲酵母菌（編號(hào)：CMCC-98001）購于廣東省微生物菌種保藏中心。

1.2 方法

1.2.1 水提液的制備 分別取鳳仙花的根、莖、葉、花、種子各適量，粉碎為粗粉，加入圓底燒瓶中，加水回流提取2次，每次1 h，合并藥液，減壓濃縮至每1 mL藥液相當(dāng)于原藥材0.5 g（0.5 g/mL），滅菌30 min后，放入4℃冰箱保存。

1.2.2 培養(yǎng)基的處理

1.2.2 .1 沙式葡萄糖液體培養(yǎng)基的處理 精密稱取沙式葡萄糖液體培養(yǎng)基粉末30 g，加熱溶解于裝有1 000 mL去離子水的錐形瓶中，高溫滅菌30 min后備用。

1.2.2 .2 沙式瓊脂培養(yǎng)基的處理 精密稱取沙式瓊脂培養(yǎng)基粉末65 g，加熱溶解于裝有1 000 mL去離子水的錐形瓶中，高溫滅菌30 min后，分裝于無菌培養(yǎng)皿中備用。

1.2.3 菌液的制備 將紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌、白色假絲酵母菌與須癬毛癬菌等4種菌種凍干粉活化，傳至2代后制成混懸液備用。

1.2.4 藥敏片的制備 取干燥培養(yǎng)皿加入制備好的乙醇提取液20 mL，濾紙紫外滅菌30 min后浸入上述培養(yǎng)皿中4 h，取出放入另一干燥培養(yǎng)皿中，用表面有細(xì)孔的牛皮紙包好培養(yǎng)皿，60℃左右干燥后備用。

1.2.5 抑菌實(shí)驗(yàn) 將上述4種菌液分別劃線接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基上。取藥敏片平貼于培養(yǎng)基表面，壓緊。將平面培養(yǎng)基倒置于27℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，測(cè)量抑菌圈直徑。

2 結(jié)果

鳳仙花不同部位水提液的抑真菌效果見表1及圖1。

從表1、圖1可見，鳳仙花不同部位中，花的水提取液對(duì)紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌、白色假絲酵母菌和須癬毛癬菌等4種真菌都具有明顯的抑制作用，其余各部位對(duì)須癬毛癬菌有較弱抑制性。此外根的水提液尚對(duì)白色假絲酵母菌有微弱抑制性；莖的水提液尚對(duì)紅色毛癬菌有微弱抑制性。葉和種子的水提液對(duì)紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌與白色假絲酵母菌均未呈現(xiàn)抑制作用。

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鳳仙花其他部位水提液抑制4種皮膚真菌的效果遠(yuǎn)不及花的水提液（P＜0.05），說明鳳仙花之花是其抗真菌的主要部位，這與傳統(tǒng)只用鳳仙花治療鵝掌風(fēng)、灰指甲等真菌感染疾病的臨床應(yīng)用相一致，也為臨床應(yīng)用鳳仙花治療皮膚真菌病提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鳳仙花抗真菌水提液效果良好，說明鳳仙花所含的抑真菌成分具有水溶性。鳳仙花其他部位水提液的抑真菌效果不顯著，表明鳳仙花的根、莖、葉、種子所含抑真菌成分相對(duì)偏少，或其所含抑真菌成分水溶性較差，這也是筆者需要進(jìn)一步研究之處。

在全球抗生素類藥物濫用而導(dǎo)致耐藥性問題日益突出的背景下，中藥與天然藥物的開發(fā)越來越受到人們的重視。鳳仙花性寒味甘微苦，具有祛風(fēng)除濕、活血止痛、解毒殺蟲之功效［7］。臨床上皮膚科常用于治療手足癬、甲溝炎、鵝掌風(fēng)、灰指甲等真菌性疾病。有學(xué)者曾報(bào)道用鳳仙花提取物治療神經(jīng)性皮膚病、疝氣痛、痛風(fēng)等［8］，但目前關(guān)于鳳仙花，尤其是不同部位抑真菌研究尚未見報(bào)道。本文選用4種常見的皮膚病真菌作為研究對(duì)象，對(duì)鳳仙花不同部位水提液的抑菌效果做了初步考察，具體藥物濃度與抑菌作用之間的關(guān)系以及其他非水溶性成分的抑菌作用還需做進(jìn)一步的研究。

表1 鳳仙花不同部位水提液抑真菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （mm）

圖1 鳳仙花不同部位的抑菌實(shí)驗(yàn)效果圖