劉亮亮，隋 峰

（1.山西職工醫(yī)學院，山西太原030600； 2.中國中醫(yī)科學院中藥研究所，北京100700）

大黃為廖科植物掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃的干燥根及根莖，前兩種習稱“北大黃”，后一種習稱“南大黃”［1］。大黃性寒，味苦，善于瀉熱攻下，行瘀化積，臨床上主要用于實熱便秘、積滯腹痛、濕熱黃疸、熱毒瘡瘍以及瘀血［2］。前期我們以大黃炮制品粉末和75%乙醇提取物為研究對象進行了藥理藥效學的研究，為進一步深入研究，按照理化性質的不同，采用不同的分離方法，將大黃各炮制品（包括生大黃、熟大黃、大黃炭）分別分成4個組分，其中，組分1主要包括鞣質單體類成分，組分2主要包括結合鞣質和少量苷類，組分3主要包括苷類成分（蒽醌苷及其他苷類），組分4主要成分為游離蒽醌。在此基礎上，以解熱為觀察指標，探討3種大黃炮制品各組分的藥理學作用，并對各組分之間的藥效學進行了比對分析研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥品與試劑 生大黃、熟大黃及大黃炭均由中國中醫(yī)科學院炮制實驗室提供，經鑒定為掌葉大黃。鮮酵母：河北馬利食品有限公司［許可證號：冀衛(wèi)食證字（2008）第002號］。

1.1.2 儀器與動物 電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；MC-8歐姆龍電腦數字式體溫計。健康SD大鼠112只，體重150～170 g，雌雄各半，由中國藥品生物制品檢定所提供［實驗動物使用許可證號：SCXK-（京）2005-004］，飼喂于中國中醫(yī)科學院基礎理論研究所實驗動物中心。

1.2 實驗方法

1.2.1 酵母菌混懸液制備 取鮮酵母40 g置缽中，逐漸加入生理鹽水磨為均勻的懸漿，濃度為20%。酵母菌混懸液需臨用前配制。

1.2.2 藥品的制備 分別取生大黃、熟大黃、大黃炭飲片各2 kg，以75%乙醇提取，提取物以大孔樹脂D101分離，分別以水及不同濃度乙醇洗脫，收集各組分洗脫液，低溫減壓回收溶劑，得到大黃生、熟、炭飲片各4個組分供試品。

1.2.3 分組與給藥 全部動物均在同等環(huán)境和條件下適應性喂養(yǎng)2 d后隨機分成14組，即空白組、模型組、生大黃組分1組、生大黃組分2組、生大黃組分3組、生大黃組分4組、熟大黃組分1組、熟大黃組分2組、熟大黃組分3組、熟大黃組分4組、大黃炭組分1組、大黃炭組分2組、大黃炭組分3組、大黃炭組分4組。

實驗在室溫（22±2）℃，濕度40%左右的環(huán)境中進行。雌雄大鼠均分籠飼養(yǎng)，喂飼全價顆粒飼料，自由飲水。正式實驗前2 d在固定時間每天測量大鼠肛溫1次，實驗當日再空腹測肛溫1次，選取平均體溫在（36.5～37.5）℃的大鼠用于實驗。。禁食不禁水12 h。隨機分組后每只大鼠背部皮下注射20%酵母菌懸液15 mL/kg。造模1 h后，空白組和模型組大鼠灌胃蒸餾水2 mL/100 g，其他各組灌胃相應的藥物（2 mL/100 g）。在給藥后的第1、2、4、6 h測體溫1次，計算各時刻每只大鼠相對于其正常體溫的體溫變化值［3］。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 生大黃各組分對酵母菌致熱大鼠體溫的影響

結果見表1、圖1。模型組給藥1 h后，大鼠體溫有一定的升高，但與空白組比較差異無統(tǒng)計學意義。給藥2 h后，體溫明顯升高，且與空白組比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01），表明發(fā)熱模型造模成功。與模型組比較，生大黃組分1在給藥后 1 h 作用顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；生大黃組分2和組分4在給藥后1、2、4、6 h與模型組相應時間點比較作用顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；生大黃組分 3 在給藥后 1、2、4 h 作用顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。

圖1 生大黃各組分對大鼠體溫的影響

2.2 熟大黃各組分對酵母菌致熱大鼠體溫的影響

表1 生大黃各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

表1 生大黃各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別 造模前體溫（℃） 給藥后不同時刻大鼠的體溫變化值（℃）1 h 2 h 4 h 6 h空白組 37.20±0.18 0.09±0.18 0.23±0.29 0.04±0.41 0.01±0.27模型組 37.15±0.26 0.31±0.27 0.83±0.342） 2.18±0.452） 2.18±0.352）生大黃組分 1 37.09±0.36 -0.40±0.474） 0.50±0.24 2.00±0.32 2.26±0.38生大黃組分 2 37.40±0.23 -1.08±0.704） -0.58±0.394） 0.91±0.574） 1.58±0.474）生大黃組分 3 37.50±0.13 -0.61±0.364） 0.01±0.314） 1.64±0.323） 1.86±0.37生大黃組分 4 37.49±0.29 -0.46±0.514） 0.08±0.464） 1.74±0.643） 1.75±0.593）n 劑量（g/kg）8 7 8 7 8 7 8 7 8 7 8 7

表2 熟大黃各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

表2 熟大黃各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 造模前體溫（℃） 給藥后不同時刻大鼠的體溫變化值（℃）1 h 2 h 4 h 6 h模型組 37.15±0.26 0.31±0.27 0.83±0.34 2.18±0.45 2.18±0.35熟大黃組分 1 37.05±0.19 0.20±0.191） 0.96±0.261） 2.31±0.24 2.26±0.23熟大黃組分 2 37.30±0.65 -0.35±0.432） 0.25±0.502） 1.63±0.551） 2.05±0.48熟大黃組分 3 37.44±0.13 -0.56±0.292） 0.13±0.312） 1.73±0.411） 2.04±0.25熟大黃組分 4 37.46±0.33 -0.59±0.562） 0.08±0.542） 1.65±0.461） 1.75±0.581）n 劑量（g/kg）8 7 8 7 8 7 8 7 8 7

表3 大黃炭各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

表3 大黃炭各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 造模前體溫（℃） 給藥后不同時刻大鼠的體溫變化值（℃）1 h 2 h 4 h 6 h模型組 37.15±0.26 0.31±0.27 0.83±0.34 2.18±0.45 2.18±0.35大黃炭組分 1 37.10±0.26 -0.44±0.422） 0.20±0.412） 1.85±0.29 2.36±0.31大黃炭組分 2 37.50±0.40 -0.50±0.362） 0.28±0.422） 1.84±0.44 1.88±0.34大黃炭組分 3 37.46±0.22 -0.34±0.392） 0.66±0.37 2.09±0.20 2.13±0.30大黃炭組分 4 37.43±0.28 -0.43±0.622） 0.33±0.481） 2.11±0.49 2.10±0.51 n 劑量（g/kg）8 7 8 7 8 7 8 7 8 7

圖2 熟大黃各組分對大鼠體溫的影響

結果見表2、圖2。與模型組比較，除熟大黃組分1在所有測試點均未見明顯的解熱作用（P＞0.05）；熟大黃組分2和組分3在給藥后1、2、4 h作用顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；熟大黃組分4在給藥后1、2、4、6 h作用均顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。

2.3 大黃炭各組分對發(fā)熱大鼠體溫的影響

結果見表3、圖3。與模型組比較，大黃炭組分1、2、4在給藥后1、2 h作用顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；大黃炭組分 3 在給藥后 1 h 作用顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

圖3 大黃炭各組分對大鼠體溫的影響

總之，各給藥組中，除熟大黃組分1在所有測試點均未見明顯的解熱作用（P＞0.05）外，其他各組給藥后在不同的時間點均表現出一定的解熱作用；給藥1 h后，大鼠體溫開始明顯下降，且有些組分一直持續(xù)到給藥后6 h。因此，確定在后期通過檢測大黃不同炮制品各組分給藥1 h后模型鼠下丘腦中PGE2和cAMP含量來了解大黃的解熱作用機制。

3 討論

大鼠皮下注射酵母菌混懸液是發(fā)熱動物模型制備的經典方法［4］，其發(fā)熱機制主要是通過全菌體及菌體內所含的莢膜多糖和蛋白質激活內源性致熱源（EP）細胞產生和釋放內生性致熱源所致。本實驗中模型組大鼠注射酵母菌1 h后，大鼠體溫有一定的升高，但與空白組比較差異無統(tǒng)計學意義。注射酵母菌2 h后，體溫明顯升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05 或 P＜0.01），表明發(fā)熱模型造模成功。大黃炮制品各組分中，除熟大黃組分1在所有測試點均未見明顯的解熱作用（P＞0.05）外，其他各組給藥后在不同的時間點均表現出一定的解熱作用。特別是給藥1 h后，大鼠體溫開始明顯下降，且有些組分一直持續(xù)到給藥后6 h。

綜合來看，中藥大黃的解熱作用基本上在各組分中均表現明顯，尤其是生大黃組分2、生大黃組分4、熟大黃組分4，在所測試的所有時間點均具有顯著的下調發(fā)熱大鼠機體溫度的作用。從所測試時間點的總體趨勢來看，給藥后1 h解熱作用最強，給藥后2、4、6 h各時間點依次遞減。后期研究發(fā)現大黃不同炮制品各組分解熱作用機制可能與抑制大鼠下丘腦中PGE2和cAMP含量的升高有關，具體生物學機制有待進一步研究。