王 琴，欒慶書(shū)*，姜 旭，邱 紅，白慧敏，姜 韜，赫 亮

（1.遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧沈陽(yáng) 110032；2.遼寧省生態(tài)實(shí)驗(yàn)林場(chǎng)，遼寧朝陽(yáng) 122000；3.遼寧省林業(yè)調(diào)查規(guī)劃院，遼寧沈陽(yáng) 110122）

榆生離褶傘生物學(xué)特性測(cè)定

王 琴1，欒慶書(shū)1*，姜 旭1，邱 紅2，白慧敏3，姜 韜3，赫 亮1

（1.遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧沈陽(yáng) 110032；2.遼寧省生態(tài)實(shí)驗(yàn)林場(chǎng)，遼寧朝陽(yáng) 122000；3.遼寧省林業(yè)調(diào)查規(guī)劃院，遼寧沈陽(yáng) 110122）

該文對(duì)采自沈陽(yáng)棋盤(pán)山油松林榆生離褶傘Lyophyllum ulmarium進(jìn)行生物學(xué)特性和擴(kuò)繁基質(zhì)的研究，結(jié)果表明：榆生離褶傘菌絲最適生長(zhǎng)溫度在20～25℃，在pH值5～6的偏酸培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好；10種供試碳源中，菌絲在蔗糖、麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，能利用半乳糖，不能利用甘油、甘露醇；10種供試氮源中，菌絲在酵母汁、牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，能夠利用供試銨態(tài)氮，但對(duì)硝態(tài)氮利用不是很好；在腐熟木屑80%+麥麩20%上培養(yǎng)60 d能產(chǎn)生子實(shí)體原基。

榆生離褶傘；生物學(xué)特性；擴(kuò)繁

榆生離褶傘Lyophyllum ulmarium，別名榆干離褶傘、榆干側(cè)耳、大榆蘑榆、榆干玉蕈、對(duì)子蘑等，菌肉肥厚，香味濃郁，營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，是一種珍貴的野生食用菌。研究還表明榆生離褶傘具有抗氧化[1]、保肝[2]、溶栓作用[3]和保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞[4]功效，具有極高的藥用價(jià)值。榆生離褶傘主要分布在河北、遼寧、黑龍江和吉林等地，夏秋季生于闊葉林或混交林中，因味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、藥食兼用，可作為篩選馴化栽培的食用菌考慮。目前，榆生離褶傘主要靠野生采集食用，資源有限。本文研究榆生離褶傘的生物學(xué)特性和擴(kuò)繁基質(zhì)，為此菌的人工馴化提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

榆生離褶傘子實(shí)體采自沈陽(yáng)棋盤(pán)山油松林下，經(jīng)金若忠研究員根據(jù)形態(tài)特征及顯微結(jié)構(gòu)鑒定為榆生離褶傘。通過(guò)組織分離后獲得菌種。供試菌株在基礎(chǔ)培養(yǎng)基平板上25℃下培養(yǎng)10 d，用于生物學(xué)特性測(cè)定。

1.2 培養(yǎng)基質(zhì)

1.2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基

葡萄糖20 g，牛肉膏2 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，VB110 mg，瓊脂20 g，蒸鎦水1 000 mL。

1.2.2 固體擴(kuò)繁培養(yǎng)基

在果醬瓶?jī)?nèi)，分別裝上①玉米粒；②小米；③小麥粒；④多年腐熟的木屑80%和20%麩子；⑤草炭78%+麥麩20%，拌好料后裝入罐頭瓶?jī)?nèi)高壓滅菌，晾涼待用。

1.3 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

將菌餅（直徑0.5 cm）接入基礎(chǔ)培養(yǎng)基平板正中，分別置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次。每隔24 h用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算平均生長(zhǎng)速度，并觀察菌落形態(tài)、菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲生長(zhǎng)速度。

1.4 pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

用1 N的NaOH和1 N的HCl調(diào)節(jié)基礎(chǔ)培養(yǎng)基pH值分別為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0共7個(gè)梯度。將菌餅接入不同pH梯度的培養(yǎng)基平板中。接種、培養(yǎng)、測(cè)量方法同1.3。

1.5 碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

分別以20 g的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、淀粉、麥芽糖、甘露醇、甘油、蜂蜜、果糖代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖作為碳源，并設(shè)無(wú)碳對(duì)照。接種、培養(yǎng)、測(cè)量方法同1.3。

1.6 對(duì)氮源利用的測(cè)定

分別以2 g的蛋白胨、硝酸鈉、硝酸鉀、硝酸銨、氯化銨、硫酸銨、尿素、營(yíng)養(yǎng)肉湯、牛肉膏和酵母汁代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的牛肉膏作為氮源，并設(shè)缺氮對(duì)照。接種、培養(yǎng)、測(cè)量方法同1.3。

1.7 固體擴(kuò)繁培養(yǎng)

拌好的固體擴(kuò)繁培養(yǎng)料，裝入500 mL的玻璃瓶?jī)?nèi)高壓滅菌，涼后接入已備好的相同大小的供試菌苔，每菌種裝10瓶，置25℃下培養(yǎng)，觀察菌絲定殖及生長(zhǎng)速度。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度的影響

不同溫度對(duì)榆生離褶傘菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表1，表1數(shù)據(jù)表明榆生離褶傘菌絲在5～25℃均可生長(zhǎng)，30℃停止生長(zhǎng)。最適生長(zhǎng)溫度范圍20～25℃，最適生長(zhǎng)溫度是20℃。5～15℃低溫下生長(zhǎng)較慢，易被污染。

表1 不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響

2.2 不同pH值的影響

供試的菌株菌絲在pH值4～10均可生長(zhǎng)，pH值5～6時(shí)生長(zhǎng)速度較快且濃密、粗壯，最適pH值為5（表2）。

表2 培養(yǎng)基pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3 對(duì)碳源的利用

榆生離褶傘在10種供試碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況不同（表3）。從菌絲生長(zhǎng)速度上看，該菌株在半乳糖、麥芽糖和蔗糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度最快，其中在蔗糖和麥芽糖培養(yǎng)基上，菌絲更為濃密、健壯，菌落較厚。菌絲在甘油、甘露醇培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度及菌落形態(tài)與無(wú)碳對(duì)照接近，均為菌絲稀疏、菌落稀薄。

2.4 對(duì)氮源的利用

榆生離褶傘在酵母汁、牛肉膏培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，表現(xiàn)為菌絲健壯、長(zhǎng)速快、長(zhǎng)勢(shì)好，菌落均勻、厚密、邊緣整齊（表4）；其次在硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)較快。從長(zhǎng)勢(shì)上看，在3種銨鹽上菌株菌落較厚密，比在營(yíng)養(yǎng)肉湯上長(zhǎng)勢(shì)好；在硝酸鈉、蛋白胨上長(zhǎng)勢(shì)與無(wú)氮對(duì)照基本相同；在尿素和硝酸鉀培養(yǎng)基上基本不長(zhǎng)。

表3 碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

表4 榆生離褶傘在不同氮源上的生長(zhǎng)情況

2.5 固體擴(kuò)繁培養(yǎng)

供試的基質(zhì)中，腐熟木屑80%+麥麩20%是最適合的固體擴(kuò)繁培養(yǎng)基質(zhì)，經(jīng)過(guò)2個(gè)月培養(yǎng)，榆生離褶傘菌絲可長(zhǎng)滿(mǎn)玻璃瓶，甚至出現(xiàn)子實(shí)體原基（圖1）。其次為草炭78%+麥麩20%基質(zhì)，菌絲可以長(zhǎng)滿(mǎn)玻璃瓶。在純玉米、純小米基質(zhì)上，菌絲能生長(zhǎng)，2個(gè)月長(zhǎng)滿(mǎn)瓶口表面，吃料速度慢。在純小麥培養(yǎng)基上，菌絲不能定殖、生長(zhǎng)，最終接入的菌塊干縮死亡。

圖1 榆生離褶傘子實(shí)體原基

3 小結(jié)

本試驗(yàn)測(cè)試了來(lái)自沈陽(yáng)棋盤(pán)山油松林下1株榆生離褶傘菌株的生物學(xué)特性。榆生離褶傘菌絲最適生長(zhǎng)溫度范圍20～25℃，在pH值5～6的偏酸培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好；在蔗糖、麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，能夠利用半乳糖，不能利用甘油、甘露醇；在酵母汁、牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好；能夠利用銨態(tài)氮，但對(duì)硝態(tài)氮利用不是很好；在腐熟木屑80%+麥麩20%上培養(yǎng)60 d能產(chǎn)生子實(shí)體原基。

［1］孫權(quán)，沈玉秀，沈明花.榆干離褶傘發(fā)酵液體外抗氧化性能研究[J].食品科技，2010(1):223-225，229.

［2］金梅花，沈玉秀，沈明花.榆干離褶傘發(fā)酵液對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用[J].食品科技，2010(4):78-80.

［3］沈明花，彭瀛，宋曉琳.榆干離褶傘發(fā)酵液的溶栓與降血脂作用[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2011(10):28-30.

［4］彭瀛，周廣亮，沈明花.榆干離褶傘發(fā)酵液對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2014(2):177-180.

Studies on biological characteristic of Lyophyllum ulmarium

WANG Qin1,LUAN Qingshu1*,JIANG Xu1,QIU Hong2,BAI Huimin3,JIANG Tao3,HE Liang1
（1.Liaoning Academy of Forestry Science,Shenyang 110032,China;2.Liaoning Ecological Experimental Forest Farm,Chaoyang 122000,China;3.LiaoningForestryInvestigationandPlanningInstitute,Shenyang110122,China）

A strain ofLyophyllum ulmariumwas collected underPinus tabulaeformisforest in the Qipan Mountain of Shenyang City and biological characteristics of the strain were studied.The results indicated:Lyophyllum ulmariummycelium grew well between 20～25℃,and at pH value ranging from 5 to 6;sucrose and maltose were suitable carbon sources for mycelium growth,lactose and honey were not suitable carbon sources for mycelium growth.Lyophyllum ulmariummycelium could make good use of organic nitrogen(yeast juice,nutrient broth,beef paste)and ammonium nitrogen,but could not use of nitrate nitrogen.Fruit body primordium occurred 60 d after the mycelium cultivated in substrate composed of rotten sawdust 80%+wheat bran 20%.

Lyophyllum ulmarium;biological characteristics;expanding propagation

S759.81

A

1001-1714（2017）06-0006-03

2017-05-11

遼寧省博士啟動(dòng)基金（2011143）。

王琴（1981-），女，高級(jí)工程師，主要從事森林病害和食用菌栽培研究。E-mail:wqdora@163.com。*通訊作者：欒慶書(shū)（1963-），女，教授級(jí)高級(jí)工程師，主要從事森林保護(hù)工作。E-mail:luanqingshu@163.com。

苑 輝)