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辣蓼揮發(fā)油GC-MS分析及抗菌效果考察*

2017-12-27 07:17于天穎王知斌王秋紅匡海學(xué)
化學(xué)工程師 2017年12期
關(guān)鍵詞:揮發(fā)油質(zhì)譜抗菌

王 悅 ,于天穎 ,王知斌 ,王秋紅 ,2,匡海學(xué) *

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點實驗室,黑龍江省中藥天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點實驗室,黑龍江 哈爾濱 1500402;2.廣東藥科大學(xué),廣東 廣州 510006)

辣蓼揮發(fā)油GC-MS分析及抗菌效果考察*

王 悅1,于天穎1,王知斌1,王秋紅1,2,匡海學(xué)1*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點實驗室,黑龍江省中藥天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點實驗室,黑龍江 哈爾濱 1500402;2.廣東藥科大學(xué),廣東 廣州 510006)

目的分析和鑒定辣蓼中揮發(fā)油的化學(xué)成分,并檢測其抗菌效果,以便更合理地開發(fā)利用辣蓼資源。方法采用水蒸汽蒸餾法提取辣蓼揮發(fā)油,氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分離和鑒定其化學(xué)成分,并用峰面積歸一化法測定了各組分的相對含量。通過體外抗菌實驗檢測辣蓼揮發(fā)油的抗菌效果。結(jié)果從辣蓼揮發(fā)油中分離并鑒定出39個組分,占揮發(fā)油總量的82.31%。體外抗菌實驗表明,其對多種致病菌起到良好的抗菌效果。結(jié)論 本實驗為進(jìn)一步研究辣蓼揮發(fā)油奠定理論基礎(chǔ),為深度開發(fā)和利用辣蓼資源,提供科學(xué)依據(jù)。

辣蓼;揮發(fā)油;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用;化學(xué)成分;抗菌

S567;R284.1

辣蓼為蓼科蓼屬水蓼(Polygonumhydropiper L.)的干燥全草。味辛、性溫,具有健脾化濕、除濕化滯、止痢止痛、解毒化瘀等功效。分布廣泛,多生于河灘、水溝邊、山谷濕地,海拔50~3500m處。古代常將其作為調(diào)味劑,我國民間常作止瀉劑、調(diào)味品、蚊蟲煙熏劑、糧倉驅(qū)蟲劑等[1,2]?!缎滦薇静荨分杏涊d:“水蓼,主蛇毒,搗敷之。絞汁服,止蛇毒入內(nèi)心悶。水煮漬捋腳,消氣腫。葉似蓼,莖赤,味辛,生下濕水旁”[3]?!侗静菥V目》記載:“蓼苗葉,辛、溫、無毒”[4]?!锻饪茊⑿吩唬骸磅r蓼草,10斤曬干燒灰存性淋灰汁熬膏子半碗聽用”[5]?,F(xiàn)代研究表明,辣蓼中含有黃酮、揮發(fā)油、鞣質(zhì)、脂肪酸、萜類、蒽醌、糖苷等化學(xué)成分;具有抗氧化、抗菌、鎮(zhèn)痛及殺蟲、抗生育、酪氨酸酶抑制等作用;主要用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、跌打腫痛、疥癬、腹瀉、腸胃炎、痢疾、功能性子宮出血、腳氣等;外用治皮膚濕疹、毒蛇咬傷等[6,7,8]。

揮發(fā)油是辣蓼的活性成分之一,研究發(fā)現(xiàn),辣蓼中含有一系列具有drimane骨架的揮發(fā)油化合物,其中具有drimane骨架的蓼二醛等倍半萜類化合物是辣蓼殺蟲的有效成分[9]。水蒸汽蒸餾法是提取揮發(fā)油的經(jīng)典方法。目前,最常用的體外抗菌實驗為微量稀釋法,其主要目的是測定藥物的最低抑菌濃度,并依據(jù)數(shù)值的大小評定其藥效的強弱,此方法的優(yōu)點是靈敏度高、定量性好,易于實現(xiàn)自動化。本文利用水蒸汽蒸餾法提取辣蓼中的揮發(fā)性成分,采用GC-MS分析其化學(xué)成分,并通過微量稀釋法測定其抗菌效果。為推動辣蓼植物資源的開發(fā)與利用,提供實驗依據(jù)并奠定理論基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;7693型自動進(jìn)樣器(美國Agilent公司);5975C數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖(美國Finnig公司);DB-1701毛細(xì)管色譜柱(60mm×0.25mm×0.25μm);賽多利斯BT25S天平(Sartorius,1/10萬);II級生物安全柜(美國NUAIRE公司);YXQ-LS壓力蒸汽滅菌器(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);LRHS-250B恒溫恒濕培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)。

無水Na2SO4(AR);水為重蒸水;載氣為高純He(99.99%);甲醇(色譜純,美國Sigma-Aldrich公司);其他試劑均為分析純;牛肉膏、蛋白胨、營養(yǎng)瓊脂(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司);二甲基亞砜(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司)。

藥材購于三棵樹藥材市場,經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)王振月教授鑒定為水蓼(P.hydropiper L.)的干燥全草。

大腸桿菌、白葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、檸檬葡萄球菌、乙型副傷寒桿菌、乙型溶血性鏈球菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌,以上菌株均由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)微生物與免疫學(xué)教研室提供。

1.2 揮發(fā)油的提取

稱取干燥的辣蓼藥材100g,置于2000mL圓底燒瓶中,加入1000mL蒸餾水浸泡1h,于電熱套中保持微沸回流提取7h,得到淡黃色透明狀揮發(fā)油,經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得21.8mg,置于4℃冰箱備用。

1.3GC-MS分析條件

1.3.1 氣相條件 DB-1701(60mm×0.25mm×0.25μm)高效毛細(xì)管色譜柱;程序升溫:初始溫度50℃,保持6min,以6℃·min-1升至 120℃,再以 3℃·min-1升至260℃,保持5min,總分析時間為69.333min;分流比 2∶1;進(jìn)樣量 1μL;載氣:高純 He。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電離方式:EI源;電子能量70eV;離子源溫度230℃;質(zhì)譜接口溫度280℃;質(zhì)量掃描范圍 m/z:20~550,全掃描模式;溶劑延遲 6min。

1.4 體外抗菌實驗

1.4.1 菌液的制備 將菌種接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,37℃孵育24h使菌株復(fù)蘇。復(fù)蘇后,再接種于5mL培養(yǎng)基中,于37℃孵育18h后,取500μL至4.5mL培養(yǎng)基中,37℃孵育6h,按上一步操作重復(fù)稀釋兩次,制備1∶1000的稀釋菌液供實驗使用。

1.4.2 最低抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration,MIC)及最低殺菌濃度(Minimum bactericidal concentration,MBC)測定 采用96孔板連續(xù)稀釋法。37℃培養(yǎng)18h。沒有細(xì)菌生長(即未變混濁)的孔所對應(yīng)藥液的最低濃度即為最低抑菌濃度(MIC)。

采用瓊脂板劃分區(qū)域法,將上述澄清的的各菌藥混合液分別接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24h,并觀察細(xì)菌生長情況。沒有細(xì)菌生長的最低藥液濃度即為最低殺菌濃度(MBC)。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣蓼揮發(fā)油成分的分析與鑒定

采用GC-MS對辣蓼揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析,得到樣品的總離子流圖(圖1),共分離得到56個組分,將各組分的質(zhì)譜數(shù)據(jù)在NIST質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索,并結(jié)合相關(guān)參考文獻(xiàn),共鑒定出39個化合物,采用峰面積歸一法計算各組分的相對含量,結(jié)果見表1。

圖1 辣蓼揮發(fā)油總離子流圖Fig.1 Total ion current diagram of the essential oil from P.hydropiper L

在鑒定出的39個化合物中含量較高的揮發(fā)油成分主要有:香薷酮、Methyl 9-(Z)-octadecenoate、(+)-b-Selinene、植酮、β- 桉葉醇、4,6-Quinolinediamine、(+)-α- 長 葉 蒎 烯 、 氧 化 石 竹 烯 、(Z)-Cinerone、異香橙烯環(huán)氧化物等。

表1 辣蓼揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析結(jié)果Tab.1 Analysis of chemical components of the volatile oil from P.hydropiper L

2.2 辣蓼揮發(fā)油的抗菌結(jié)果

采用微量稀釋法考察辣蓼揮發(fā)油的抗菌效果。結(jié)果顯示,辣蓼揮發(fā)油對于多數(shù)菌種具有表現(xiàn)出明顯的抑菌活性,結(jié)果見表2。

表2 辣蓼揮發(fā)油的體外抗菌作用(±S)Tab.2 Antimicrobial activity of volatile chemical constituents from P.hydropiper L.in vitro( ±S)

辣蓼揮發(fā)油對檸檬葡萄球菌、乙型副傷寒桿菌、乙型溶血性鏈球菌、福氏痢疾桿菌、痢疾桿菌具有顯著地抑制作用。

3 結(jié)論

香薷酮具有抗氧化、抗菌活性,抗菌譜較廣,對葡萄球菌、乙型鏈球菌、傷寒桿菌等均有作用。植酮為維生素E醋酸酯的中間體。β-桉葉醇具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗電休克癲癇樣驚厥和抗抑郁等中樞神經(jīng)性藥理作用,同時可抑制胃酸分泌、調(diào)節(jié)胃腸運動,且在保護(hù)肝細(xì)胞等方面表現(xiàn)出良好活性[10]。以上化合物為辣蓼揮發(fā)油的主要成分,其可能為辣蓼的活性成分,但還需進(jìn)一步的研究。

辣蓼是一種傳統(tǒng)的中草藥,其資源豐富,臨床應(yīng)用廣泛。但在種質(zhì)資源、飲片加工生產(chǎn)、藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等方面的研究不夠深入,對化學(xué)成分及藥理藥效學(xué)等缺乏系統(tǒng)性的研究。同時應(yīng)注意到辣蓼在醫(yī)藥、植物源農(nóng)藥、獸藥、食品添加劑等方面表現(xiàn)出的巨大開發(fā)潛力和研究價值[11]。結(jié)合其抗菌、抗氧化、抗病毒、鎮(zhèn)痛及殺蟲等藥理作用,合理開發(fā)新型產(chǎn)品,同時還可考慮生產(chǎn)其他增值產(chǎn)品,以提高辣蓼的綜合利用率,如可將藥材殘渣生產(chǎn)各種紙張及三合板等。因此,我們需要確定辣蓼的種質(zhì)資源,制定規(guī)范的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以確保其藥材質(zhì)量,同時深入研究辣蓼的作用機理,并尋求其藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為開發(fā)新型藥物、抗衰老和抗疲勞的天然保健品、植物源殺蟲劑及獸藥等提供理論依據(jù),以此加強辣蓼資源的開發(fā)利用及綜合利用。

[1] 中國植物志[M].1998.

[2] 劉信平,張馳,譚志偉,等.辣蓼揮發(fā)性活性成分的GC/MS研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2009,26(4):285-288.

[3] 唐蘇敬.新修本草(第十一卷)[M].

[4] 明李時珍.本草綱目(草部,第十六卷)[M].

[5]明申斗垣.外科啟玄.(卷之十一)[M].

[6] 黃紅泓,甄漢深.中草藥辣蓼近年來的研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥,2013,(1):38-40.

[7] 胡曬平,劉強,劉楊,等.辣蓼的研究概述[J].中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥化學(xué)分會第九屆學(xué)術(shù)年會論文集,2014年7月9-18日.

[8] 楊新周,郝志云,朱以常,等.辣蓼不同部位的抗氧化活性[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(2):284-285.

[9] 柳春梅,呂鶴書,師光祿,等.辣蓼不同種間植物次生代謝產(chǎn)物種類及差異[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2012,24:193-197,113.

[10] 張明發(fā),沈雅琴.蒼術(shù)及其活性成分β-桉葉醇的神經(jīng)藥理作用的研究進(jìn)展[J].抗感染藥學(xué),2017,14(1):6-11.

[11] 何立美,陳玉婷,劉洪梅,等.高效液相色譜法同時測定水辣蓼提取物中6種黃酮成分的含量[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,13:94-98.

GC-MS analysis and antibacterial effect of volatile oil in Polygonum hydropiper*

WANG Yue1,YU Tian-ying1,WANG Zhi-bin1,WANG Qiu-hong1,2,KUANG Hai-xue1*
(1.Heilongjiang University of Chinese Medicine,Key Laboratory of Chinese Materia Ministry of Education,Heilongjiang Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine Pharmacodynamics Bases,Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China;2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China)

Objective:To analyze and identify the chemical constituents of volatile oil in Polygonum hydropiper,and to test its antibacterial effect,so as to develop and utilize the resources of P.hydropiper more reasonably.Method:The volatile oil of P.hydropiper was extracted by steam distillation.The chemical constituents were isolated and identified by GC-MS,and the relative content of each component was determined by peak area normalization method.The antibacterial effect of volatile oil of P.hydropiper was detected by antibacterial test in vitro.Result:39 components were separated and identified from the volatile oil of P.hydropiper,which accounted for 82.31%of the total volatile oil.Antibacterial experiments in vitro showed that it has good antibacterial effect on various pathogenic bacteria.Conclusion:This experiment lays a theoretical foundation for further research on the essential oil of P.hydropiper,and provides a scientific basis for further exploitation and utilization of P.hydropiper.

Polygonum hydropiper;volatile oil;GC-MS;chemical constituents;antibacterial

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20171226

2017-08-07

國家自然科學(xué)基金項目(No.81073049)

王 悅(1992-),女,在讀碩士研究生,主要從事中藥炮制理論研究。

導(dǎo)師簡介:匡海學(xué)(1995-),男,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事中藥性味理論及中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

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