劉秋晨 浦金賢 祁小飛 趙曉俊

CIK治療去勢(shì)抵抗性前列腺癌的療效觀察

劉秋晨 浦金賢 祁小飛 趙曉俊

目的研究細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine-induced killer cell，CIK）對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌（castrate-resistant prostate cancer，CRPC）患者通過免疫治療后的短期臨床療效。方法選擇蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿科收治的CRPC患者9例，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)，取未貼壁細(xì)胞，經(jīng)IL-1、IL-2、IFN-γ、抗CD3單抗誘導(dǎo)培養(yǎng)成CIK，經(jīng)靜脈回輸給患者。在患者治療前進(jìn)行血清前列腺癌特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）檢測，治療結(jié)束后4周復(fù)測血清PSA，并通過對(duì)比患者的睡眠、食欲、體力、骨痛等觀察指標(biāo)，進(jìn)行短期療效評(píng)價(jià)。結(jié)果CIK治療能降低CRPC患者PSA（P＜0.05），5例患者PSA出現(xiàn)下降，3例PSA保持穩(wěn)定，1例PSA上升。對(duì)9例患者短期臨床療效評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示3例患者PR，5例患者SD，1例患者PD；2/5患者骨痛較治療前減輕，4/9患者體力增強(qiáng)，3/9例患者食欲提高，5/9患者睡眠質(zhì)量改善。9例CRPC患者治療的耐受性良好。1例患者出現(xiàn)低熱，激素治療后好轉(zhuǎn)，其余患者未有不良反應(yīng)。結(jié)論CIK治療CRPC能激發(fā)患者的免疫應(yīng)答，控制患者PSA水平，副作用少，有良好的短期臨床療效。

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞；去勢(shì)抵抗性前列腺癌；PSA

前列腺癌發(fā)病率在歐美國家所有男性腫瘤中位列第一[1]。近年來我國前列腺癌的檢出率也逐年遞增[2]。臨床分期較早的前列腺癌患者首選前列腺癌根治術(shù)，不能耐受手術(shù)或者放療的晚期患者，通常選用手術(shù)去勢(shì)或內(nèi)分泌治療[3]。有一些患者，治療18～24個(gè)月后疾病進(jìn)展，發(fā)展成為CRPC[4]。臨床上目前多采用多西他賽治療CRPC，該藥物可延長CRPC患者的生存期，改善患者的生活質(zhì)量[5-6]。但對(duì)于不能耐受多西他賽化療或化療失敗的CRPC，治療方法有限，臨床上多選用試驗(yàn)性或姑息性治療[7]。目前很多臨床或?qū)嶒?yàn)中心都致力于研究腫瘤生物免疫療法。CIK是用多種細(xì)胞因子和人外周血單個(gè)核細(xì)胞，在體外進(jìn)行共同培養(yǎng)之后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞，其既有T淋巴細(xì)胞的抗瘤活性，又有自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的非MHC（主要組織相容性復(fù)合體）限制性殺瘤活性，通過這兩種方式對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用[8]。已有很多體外試驗(yàn)證明CIK有較好的擴(kuò)增性和殺瘤活性，而對(duì)正常人體細(xì)胞沒有損傷，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)CIK對(duì)前列腺癌等惡性腫瘤有良好的療效[9-12]。本研究選取了我院收治的9例CRPC患者，對(duì)其進(jìn)行CIK治療，初步評(píng)價(jià)該方案的短期臨床療效和安全性，為CRPC的治療提供新的思路和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

選取我院泌外尿科2013年12月—2014年12月收治的9例確診為CRPC的患者（表1），患者中位年齡82歲（61～90歲），生命體征良好，無肝腎疾病，無自身免疫性疾病，預(yù)期生存時(shí)間超過6個(gè)月，隨訪期為1個(gè)月。所有患者在治療前均簽署知情同意書，該治療方案經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要材料

內(nèi)毒素檢測試劑盒（湛江安度斯生物有限公司）；淋巴細(xì)胞分離液（上海恒信化學(xué)試劑有限公司）；人重組GM-CSF、IL-1、IL-2、IFN-γ、抗CD3單抗（mAb）（R＆D公司）；AB血清（江蘇省蘇州市紅十字血站）；RPMI 1640培養(yǎng)基（Hyclone公司）。

1.3 CIK的體外培養(yǎng)

獲得患者外周血單個(gè)核細(xì)胞：對(duì)入組患者行造血?jiǎng)訂T，GMCSF75 μg，2次/天，動(dòng)態(tài)監(jiān)測患者的外周血細(xì)胞濃度，當(dāng)淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞計(jì)數(shù)之和達(dá)到2×106/ml時(shí)，采集患者外周靜脈血100～150 ml，抗凝處理，F(xiàn)icoll分離外周血單個(gè)核細(xì)胞并收集。

CIK的制備：用PRMI 1640培養(yǎng)基重懸患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，濃度約2～3×106/ml，置于恒溫培養(yǎng)箱（條件：37℃、5%CO2）孵育90 min，收取未貼壁的單個(gè)核細(xì)胞，用含10% AB血清的RPMI 1640培養(yǎng)液重懸，細(xì)胞濃度調(diào)整至2.5×106/ml，鋪入預(yù)先包被有anti-CD3 mAb的培養(yǎng)瓶，添加IFN-γ（終質(zhì)量濃度1 000 U/ml），置于恒溫培養(yǎng)箱（條件：37℃、5%CO2）孵育24 h后添加IL-2（終活性濃度250 U/ml）、IL-1α（終活性濃度10 ng/ml），繼續(xù)用含10% AB血清RPMI 1640培養(yǎng)液定期補(bǔ)液培養(yǎng)[11]。

1.4 CIK回輸方案

在收集前24 h對(duì)CIK進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，并檢測細(xì)胞活力、內(nèi)毒素等，確認(rèn)檢測合格后，于培養(yǎng)后第10～14天收集CIK細(xì)胞，1 500 r/min，離心5 min，生理鹽水洗滌3次，重懸于100 ml含10%人血白蛋白的生理鹽水中，調(diào)整細(xì)胞濃度至（5.0±0.5）×108/100ml，經(jīng)靜脈滴注回輸患者，每次2 h內(nèi)滴注完，每個(gè)療程滴注4次?；剌擟IK 后密切觀察患者24 h，注意是否出現(xiàn)不良反應(yīng)，根據(jù)情況及時(shí)處理并記錄[13]。

1.5 療效判定

每個(gè)療程結(jié)束后隨訪1個(gè)月。于治療后1個(gè)月檢測患者PSA水平，并與治療前的PSA水平比較。并評(píng)估患者骨痛、體力、食欲睡眠等指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)CIK治療的臨床療效及其安全性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，兩配對(duì)樣本的非參數(shù)wilcoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果用Z值表示，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者CIK 治療的短期臨床療效評(píng)估

通過比較患者治療前后的血清PSA水平（表2），發(fā)現(xiàn)該結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明CIK治療CRPC有一定療效通過該治療治療能降低患者的PSA。9例患者中有5例患者PSA下降，3例保持穩(wěn)定，1例上升。直接對(duì)比患者治療前后PSA變化程度發(fā)現(xiàn)，3例患者PSA下降超過30%（PR），5例患者PSA變化范圍±30%（SD），1例患者PSA上升超過30%（PD）。比較患者治療前后的一般情況（表3）評(píng)估CIK臨床療效，其中骨痛患者5例，2例較前好轉(zhuǎn)，9例患者中，4/9例患者體力改善，3/9例患者食欲改善，5/9例患者睡眠改善。

表1 CRPC患者基本信息

表2 CIK治療CRPC前后PSA指標(biāo)及臨床療效評(píng)估

2.2 CIK治療的不良反應(yīng)

CIK回輸后觀察24小時(shí)，其中8例患者未出現(xiàn)不良癥狀，1例患者輸注后2小時(shí)出現(xiàn)低熱，予對(duì)癥治療后緩解，隨訪1個(gè)月期間患者均未出現(xiàn)其他不良反應(yīng)。9例患者均能耐受該治療，未出現(xiàn)休克、惡心嘔吐等嚴(yán)重不良反應(yīng)，均未出現(xiàn)皮疹、紫癜等過敏反應(yīng)，可見CIK治療的安全性良好，無明顯毒副作用。

3 討論

CRPC的治療目前依然是世界性難題，患者的預(yù)后通常極差[14]。Provenge于2010年在美國上市，在臨床上得以應(yīng)用，為廣大前列腺癌患者帶來福音[15]。但在國內(nèi)，仍缺乏有效的治療手段，很多免疫治療方法還局限于體外試驗(yàn)過程中。

本研究將CIK治療從體外試驗(yàn)轉(zhuǎn)向臨床應(yīng)用，探究CIK對(duì)CRPC患者的短期臨床療效。通過對(duì)比治療前后患者前列腺特異性抗原PSA水平，發(fā)現(xiàn)CIK治療能降低CRPC患者的血清PSA（P＜0.05），5/9例患者出現(xiàn)PSA下降，3/9患者PSA保持穩(wěn)定，1/9例患者PSA上升。對(duì)其臨床療效評(píng)估，3例達(dá)到PR，5例SD，1例PD。多數(shù)患者的一般情況在治療后獲得了不同程度的改善。本研究證明了CIK在體內(nèi)能激發(fā)免疫應(yīng)答，對(duì)癌細(xì)胞有殺傷作用，對(duì)緩解患者的臨床癥狀，控制PSA水平有短期的臨床療效。通過觀察患者接受CIK治療后的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)患者對(duì)該治療耐受性良好，CIK安全性較好。

總之，本研究證實(shí)CIK治療去勢(shì)抵抗性前列腺癌有良好的短期臨床療效，是一種安全性好，毒副反應(yīng)少的免疫治療方法。但本研究病例數(shù)量少，治療方式和觀察指標(biāo)單一，隨訪時(shí)間較短，因此，還需要擴(kuò)大樣本量，增加觀察治療，延長隨訪期，進(jìn)一步研究CIK的長期臨床療效。

表3 CIK治療CRPC前后一般情況比較及臨床療效評(píng)估

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Efficacy of CIK in the Treatment of Castration Resistant Prostate Cancer

LIU Qiuchen PU Jinxian QI Xiaofei ZHAO Xiaojun Department of Urology,The First Hospital Affiliated to Suzhou University, Suzhou Jiangsu 215006,China

ObjectiveTo investigate the short-term clinical efficacy of cytokine-induced killer cell (CIK) on patients with castrated resistant prostate cancer (castrate-resistant prostate cancer CRPC) after immunotherapy.Methods9 cases of CRPC patients admitted to the urology department of fi rst Hospital Affiliated to Suzhou University were selected.Isolated peripheral blood mononuclear cells gamma were cultured in vitro to extract non adherent cells. IL-1, IL-2, IFN-γ, and anti CD3 monoclonal antibody were induced to be cultured into CIK and returned to the patients via vein. Before the treatment, serum prostate cancer specific antigen(prostate speci fi c antigen, PSA) was detected. After 4 weeks of treatment,the serum PSA was remeasured. By comparing the patients' sleep, appetite,physical strength, bone pain and other observation indexes, the short-term curative effect was evaluated.ResultsCIK treatment could reduce PSA (P＜ 0.05) of CRPC patients, 5 patients with PSA decreased, 3 cases of PSA remained stable, 1 case of PSA increased. The short-term clinical efficacy of 9 patients was evaluated. The results showed that 3 patients were PR,5 patients were SD, and 1 patient were PD. 2/5 patients were relieved of bone pain before treatment, increased physical strength in 4/9 patients,increased appetite in 3/9 cases, and improved sleep quality in 5/9 patients.9 patients with CRPC were well tolerated. 1 case of patients had low fever,after hormone treatment improved; the rest of the patients had no adverse reactions.ConclusionThe treatment of CRPC by CIK can stimulate the patient's immune response, control the patient's PSA level, have less side effects and have good short-term clinical efficacy.

cytokine induced killer cells; castration resistance to prostate cancer; PSA

R73

A

1674-9308（2017）30-0060-04

10.3969/j.issn.1674-9308.2017.30.035

蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科，江蘇 蘇州 215006