王健 周原 張師前

作者單位：277102 棗莊 1山東省棗莊市立醫(yī)院婦科；250012 濟(jì)南 2山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦科

腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是人類癌癥早期較常見(jiàn)的現(xiàn)象，淋巴系統(tǒng)被認(rèn)為是惡性腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的重要途徑。隨著研究不斷深入，人們對(duì)癌細(xì)胞通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)移機(jī)制的認(rèn)識(shí)逐步加深，提出腫瘤組織周?chē)蛄鰞?nèi)淋巴管生成的假設(shè)，且發(fā)現(xiàn)了多種與淋巴管生成相關(guān)因子。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)腫瘤分期、治療及預(yù)后意義重大，幾乎為所有癌癥的不良預(yù)后因素［1］。因此，了解其轉(zhuǎn)移機(jī)制及其相關(guān)因子有助于指導(dǎo)臨床診療。本文就宮頸癌淋巴管生成相關(guān)因子的研究進(jìn)展作一綜述。

1 特異性淋巴管標(biāo)志物

1.1 Podoplanin

Podoplanin是一種跨膜黏蛋白，分子量為36～43 kDa［2］，經(jīng)Podoplanin抗體標(biāo)記證實(shí)存在于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，是新的淋巴管標(biāo)志物［3］。Schacht等［4］研究發(fā)現(xiàn) Podoplanin缺陷小鼠存在血管-淋巴管分離缺陷，小鼠有正常的淋巴管生成，但無(wú)法規(guī)律調(diào)節(jié)淋巴循環(huán)。Lin等［5］在宮頸癌研究中發(fā)現(xiàn)，在血小板上表達(dá)的CLEC-2可與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的Podoplanin結(jié)合，引起血小板聚集，防止血流進(jìn)入靜脈出芽形成淋巴管。此外，注射Podoplanin封閉抗體或抑制血小板聚集亦可擾亂淋巴管發(fā)育。由此可見(jiàn)，血小板聚集是淋巴管從新生血管出芽形成并發(fā)育的前提，提示Podoplanin表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的可能性幾乎為零，是可用于區(qū)別毛細(xì)淋巴管與毛細(xì)血管的可靠標(biāo)志物。與鄰近的正常宮頸組織相比，Podoplanin的mRNA表達(dá)水平在宮頸癌組織中顯著升高［5］。Retzbach 等［6］認(rèn)為Podoplanin 表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移，導(dǎo)致口腔癌侵襲和轉(zhuǎn)移，可作為口腔癌的生物標(biāo)志物和化療靶點(diǎn)。

1.2 D2-40

D2-40是針對(duì)癌胚抗原M2A的IgG2a型單克隆抗體，能特異而敏感地識(shí)別表達(dá)于正常組織和癌組織淋巴內(nèi)皮細(xì)胞上的M2A抗原［7］。M2A抗原是一種與生殖細(xì)胞腫瘤相關(guān)的癌胚抗原。柴紅娟等［8］納入60例宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者（浸潤(rùn)癌48例，原位癌12例），用鼠抗人單克隆抗體D2-40標(biāo)記切除標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)D2-40染色陽(yáng)性的管道由單層內(nèi)皮細(xì)胞形成扁平的腔隙，管腔大小和形態(tài)不規(guī)則，部分管腔內(nèi)可見(jiàn)淋巴細(xì)胞，無(wú)紅細(xì)胞和血小板等血管內(nèi)容物。顯微鏡下可見(jiàn)D2-40熱點(diǎn)地區(qū)——腫瘤浸潤(rùn)邊緣區(qū)，與Xiong等［9］觀察結(jié)果相似。

2 非特異性淋巴管標(biāo)志物

2.1 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C/D

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C/D（vascular endothelial growth factor-C/D，VEGF-C/D）是最早被發(fā)現(xiàn)的淋巴管特異性調(diào)控受體，可與表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體 3（vascular endothelial growth factor receptor 3，VEGFR-3）結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞，促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和淋巴管生成，是最關(guān)鍵的調(diào)控因子［10-11］。Gibot等［12］通過(guò)培養(yǎng)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞及人類真皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外淋巴管三維構(gòu)建研究，發(fā)現(xiàn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)VEGFR-3以及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體c-Met。此外，在培養(yǎng)液中加入VEGFR-3和c-Met抑制劑時(shí)，淋巴管增殖明顯減少。Karkkainen等［13］研究VEGF-C基因缺陷（VEGF-C-/-）小鼠的胚胎淋巴系統(tǒng)發(fā)育，發(fā)現(xiàn)小鼠并未出芽形成淋巴管，主要原因?yàn)閂EGF-C/D缺乏，提示VEGFR-3的特異性；而該類小鼠常因組織內(nèi)液體積聚造成產(chǎn)前死亡，VEGF-C+/-常出現(xiàn)皮膚淋巴管發(fā)育不全或淋巴水腫，說(shuō)明VEGF-C對(duì)淋巴管生成至關(guān)重要，且VEGF-C等位基因?yàn)榱馨凸苷０l(fā)育所必需。鄧?guó)P春等［14］研究發(fā)現(xiàn)隨VEGF-C表達(dá)水平升高，VEGFR-3陽(yáng)性淋巴管數(shù)亦明顯增加。Franc等［15］收集了38例ⅠB～ⅢB期宮頸癌患者的癌組織標(biāo)本與10例行子宮全切術(shù)患者的正常宮頸組織，發(fā)現(xiàn)正常組VEGF-C mRNA拷貝的平均數(shù)為134±36（中位數(shù) 106），ⅠB 期為 16 077±7 090（中位數(shù)580），ⅡB 期為 35 019±8 945（中位數(shù) 40 870），ⅢB 期為 56 155±12 470（中位數(shù) 55 981），ⅡB 和ⅢB 期宮頸癌樣本中VEGF-C mRNA拷貝數(shù)目顯著高于正常組，且ⅢB期拷貝數(shù)目顯著高于ⅠB期。但有研究表明VEGFR-3亦表達(dá)于有孔毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，并非淋巴管內(nèi)皮的特異性標(biāo)志物。以上研究從細(xì)胞、動(dòng)物、臨床三個(gè)層面證實(shí)了VEGF-C/D在淋巴管生成方面的調(diào)控作用。

2.2 淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸受體-1

淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸受體-1（lymphatic vessel endothelial HA receptor-1，LYVE-1）是淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的細(xì)胞表面蛋白，可與透明質(zhì)烷結(jié)合，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞作用從間質(zhì)攝取透明質(zhì)酸進(jìn)入淋巴管［16］。Prevo等［17］研究發(fā)現(xiàn)，LYVE-1可結(jié)合并內(nèi)化293T轉(zhuǎn)染的成纖維細(xì)胞中的透明質(zhì)酸，在免疫電子顯微鏡下可觀察到LYVE-1均勻分布在淋巴管腔內(nèi)和腔外。王健等［18］發(fā)現(xiàn)24例配對(duì)的宮頸鱗癌組織及癌旁正常組織中LYVE-1的表達(dá)分別為1.37±0.21和0.56±0.12（P＜0.01），且 LYVE-1 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.01），表明LYVE-1對(duì)了解宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移具有一定價(jià)值。

2.3 同源異型盒轉(zhuǎn)錄因子

同源異型盒轉(zhuǎn)錄因子（Prox-1）是胚胎期間淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的主要調(diào)節(jié)者［19］。Prox-1除表達(dá)于胚胎淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞外，還表達(dá)于成年正常組織和腫瘤的淋巴管。王健等［18］分析24例配對(duì)的宮頸鱗癌組織及癌旁正常組織中Prox-1的表達(dá)，其在癌與癌旁組織中的表達(dá)分別為1.52±0.26和0.46±0.19，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.01），表明Prox-1聯(lián)合LYVE-1可對(duì)淋巴管進(jìn)行有效標(biāo)記。

2.4 CD44v6

CD44黏附分子包括10種亞型，在不同來(lái)源的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。Bouda等［20］回顧性分析178例ⅠB期宮頸癌患者，發(fā)現(xiàn)CD44v6表達(dá)與淋巴脈管間隙浸潤(rùn)、深層基質(zhì)浸潤(rùn)和鱗狀細(xì)胞癌呈正相關(guān)，但與生存期無(wú)明顯相關(guān)性。Weng等［21］發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中CD44v6的表達(dá)明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和正常結(jié)直腸黏膜組織（P＜0.05）。

2.5 血小板源性生長(zhǎng)因子

血小板源性生長(zhǎng)因子（platelet-derivedgrowthfactor，PDGF）包括多個(gè)亞型，可通過(guò)自分泌和（或）旁分泌機(jī)制促進(jìn)腫瘤血管生成和腫瘤侵襲［22］。在胰腺癌中，PDGF-B與受體PDGFR-β特異性結(jié)合以激活Notch-1和 NF-κB 信號(hào)傳導(dǎo)途徑［23］。Tudoran 等［24］利用針對(duì)PDGF-β的siRNA研究宮頸癌Ca Ski和HeLa細(xì)胞中PDGF-β信號(hào)傳導(dǎo)的細(xì)胞和分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)抑制CaSki細(xì)胞中PDGF-β通路，可引起579個(gè)基因轉(zhuǎn)錄模式快速改變，而這些基因具有拮抗腫瘤進(jìn)展的作用。PDGF可促進(jìn)腫瘤血管形成和腫瘤進(jìn)展，且淋巴管可從新生血管出芽形成，可能與腫瘤淋巴管形成相關(guān)，但PDGF-β淋巴管生成的作用尚存爭(zhēng)議，還需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

2.6 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2（fibroblast growth factor 2，F(xiàn)GF-2）是促血管生成作用較強(qiáng)的生長(zhǎng)因子，亦是強(qiáng)有力的有絲分裂原和化學(xué)趨化劑，近年研究發(fā)現(xiàn)其與淋巴管生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。黃偉等［25］檢測(cè)早期宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變及慢性宮頸炎組織中FGF-2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在早期宮頸癌組織中其表達(dá)顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變及慢性宮頸炎組織（P＜0.05），且 FGF-2 在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）；FGF-2陽(yáng)性組微淋巴管密度較FGF-2陰性組顯著增高（P＜0.05）。而FGF-2促進(jìn)淋巴管生成可能通過(guò)激活VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信號(hào)途徑間接完成。

2.7 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子

肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）的主要功能是調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖，刺激某些上皮細(xì)胞增殖和遷移，且在組織修復(fù)和腫瘤侵襲過(guò)程中發(fā)揮作用。Gibot等［12］在體外利用淋巴細(xì)胞構(gòu)建3D淋巴網(wǎng)絡(luò)時(shí)發(fā)現(xiàn)，c-Met和VEGFR-3同時(shí)活化較單獨(dú)激活可更顯著地誘導(dǎo)淋巴管生成。此外，兩者協(xié)同作用可引起Erk1/2水平升高，進(jìn)而誘導(dǎo)更多淋巴管生成。據(jù)報(bào)道［26］，HGF/c-Met信號(hào)傳導(dǎo)途徑異常激活與多種腫瘤（包括宮頸癌）細(xì)胞增殖、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)，可能是新的治療靶標(biāo)。此外，與HPV陰性患者相比，HPV陽(yáng)性患者HGF或c-Met蛋白血清水平更高，且宮頸癌病變中c-Met或HGF過(guò)表達(dá)與較差的預(yù)后相關(guān)，或可作為預(yù)后評(píng)估的生物標(biāo)志物。

2.8 其他相關(guān)因子

宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移管的相關(guān)分子機(jī)制尚不明確，研究發(fā)現(xiàn)多種因子可能與腫瘤周?chē)馨凸苌上嚓P(guān)。Bai等［27］提出胰島素樣生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor，IGF）表達(dá)水平可反映細(xì)胞增殖情況。Serrano等［28］發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織 IGF-Ⅱ表達(dá)水平較正常組織低（P＜0.001），宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)病變組織中IGF結(jié)合蛋白3的表達(dá)水平較正常組織高（P＝0.018），提示 IGF 系統(tǒng)可能與宮頸癌進(jìn)展相關(guān)，是否通過(guò)淋巴管形成促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移有待研究。Liu等［29］發(fā)現(xiàn)表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的SIX-1可協(xié)同TGF-β增加VEGF-C的表達(dá)，繼而促進(jìn)淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Komohara等［30］則發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可通過(guò)與周?chē)鷮m頸癌細(xì)胞相互作用促進(jìn)淋巴管生成。Tang等［31］發(fā)現(xiàn)在宮頸癌組織標(biāo)本中，叉頭蛋白家族成員Foxp3與VEGF-C表達(dá)呈正相關(guān)，提示Foxp3可能在宮頸淋巴管生成中起重要作用。

3 結(jié)語(yǔ)

目前腫瘤淋巴管生成的機(jī)制尚未清楚，各研究結(jié)果亦存在諸多爭(zhēng)論。但隨著對(duì)宮頸癌淋巴管生成和調(diào)控機(jī)制研究的深入，一些相關(guān)的因子可能成為宮頸癌靶向治療的靶點(diǎn)，為宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療開(kāi)辟一條新的途徑。