孫 琳，袁杰彬，陳雙為，李 茂

（五糧液股份有限公司技術(shù)研究中心，四川宜賓 644007）

蕎麥又名烏麥、花麥或三角麥，是一種一年生或多年生的蓼科蕎麥屬雙子葉草本植物[1-2]。蕎麥起源于中國，在俄羅斯、日本、法國、加拿大等亞溫帶和寒帶地區(qū)均有分布，主要有甜蕎和苦蕎兩個(gè)可栽培品種[3-5]。中國是世界蕎麥生產(chǎn)的第二大國，產(chǎn)量?jī)H次于俄羅斯，且苦蕎的種植面積和產(chǎn)量均居世界第一位，資源優(yōu)勢(shì)十分明顯[6]?？嗍w又稱韃靼蕎麥，主要分布在我國的西南、西北和南方地區(qū)，尤其是四川大涼山2000 m以上的高寒山區(qū)，其耐旱耐寒，耐酸耐脊，適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)期短，是一種十分優(yōu)質(zhì)的無污染綠色資源[7-8]。同時(shí)，苦蕎又是一種獨(dú)特的食藥兩用的糧食作物，除含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸、維生素和多種礦物質(zhì)元素外，還含有禾谷類糧食中所沒有的葉綠素和類黃酮[9]，其黃酮類化合物含量是甜蕎麥的10～100倍，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗腫瘤、抗氧化、消除體內(nèi)自由基、增強(qiáng)免疫力及保護(hù)心腦血管等多種功效，具有極高的營養(yǎng)和醫(yī)藥保健價(jià)值[10-11]。因此，苦蕎不僅是黃酮類化合物優(yōu)質(zhì)的食用來源，還是提取黃酮類化合物用于醫(yī)藥保健產(chǎn)品開發(fā)的研究熱點(diǎn)。

近年來，關(guān)于苦蕎中黃酮類化合物提取方法的相關(guān)研究不斷涌現(xiàn)，單以提取原料來分，就有針對(duì)苦蕎麥粉、苦蕎麥殼（皮）、苦蕎麩皮和苦蕎花、莖、葉等多種組織的不同提取工藝的研究。其中，以苦蕎麥粉的研究最為熱門，其次是麥殼（皮）和麩皮，最后是花、莖、葉等組織，它們都不同程度地含有一定量黃酮類化合物。相同原料，使用不同的提取工藝，產(chǎn)物的得率不同；相同工藝，應(yīng)用在不同的原料上，產(chǎn)物的得率也不相同。為此，研究?jī)H從提取工藝的差別上考慮，以工藝過程的復(fù)雜性以及獲得設(shè)備的難易程度，將苦蕎中黃酮類化合物的提取方法概括為常規(guī)方法、組合法和特殊設(shè)備法三大類。

1 常規(guī)方法

常規(guī)方法是指工藝過程相對(duì)簡(jiǎn)單，使用一般性的實(shí)驗(yàn)設(shè)備就能夠完成的提取方法，包括乙醇滲漉或冷浸法、堿提酸沉法、熱水浸提法、超聲浸提法、索氏提取法和溶劑熱回流法等。

1.1 乙醇滲漉或冷浸法

乙醇滲漉或冷浸法是提取工藝中比較簡(jiǎn)單的方法，只需在常溫下進(jìn)行，溶劑乙醇安全易得，無需引入加熱或助分散設(shè)備，影響因素少，主要可以考察乙醇濃度、料液比和提取時(shí)間對(duì)產(chǎn)物得率的影響。但這兩種方法溶劑用量較大，提取時(shí)間長(zhǎng)，產(chǎn)物得率也不是很理想。2008年，張瑞等[12]分別用乙醇滲漉法和乙醇冷浸法對(duì)苦蕎麩皮中的黃酮類化合物進(jìn)行了提取研究，通過HPLC法定量，以蘆丁和槲皮素的總量表示總黃酮含量，得到兩種方法的產(chǎn)物得率分別為1.219%和1.035%。

1.2 堿提酸沉法

堿提酸沉法是研究較早的黃酮類化合物的提取方法[13]，提取工藝是以水為介質(zhì)，石灰乳調(diào)節(jié)pH值為堿性，煮沸提取，再用HCl調(diào)節(jié)pH值至酸性從而析出產(chǎn)物。堿提酸沉法的整個(gè)過程相對(duì)簡(jiǎn)單，但操作上涉及到酸度調(diào)節(jié)和產(chǎn)物的多次過濾轉(zhuǎn)移，比乙醇滲漉或冷浸法更為繁瑣，且耗時(shí)長(zhǎng)，產(chǎn)物得率也不高，因此現(xiàn)在應(yīng)用較少。1998年，賈冬英等[14]用堿提酸沉法提取了苦蕎麥莖及籽殼中的黃酮類化合物，得率分別為0.53%和0.37%。

1.3 熱水浸提法

熱水浸提法也是早期使用較多的方法，但近年來研究較少。其提取介質(zhì)為水，主要通過加熱回流的方式，將原料中的有效成分溶解到水中。其中水的pH值、料液比、提取溫度、提取時(shí)間和提取次數(shù)等都會(huì)對(duì)最終產(chǎn)物的得率產(chǎn)生影響。1998年，賈冬英等[14]用熱水浸提法對(duì)苦蕎麥莖和籽殼中的黃酮類化合物進(jìn)行了提取，文中只使用了一個(gè)固定的提取條件，沒有對(duì)各因素的影響進(jìn)行研究，得到苦蕎麥莖和籽殼中黃酮類化合物的得率分別為0.66%和0.45%。2008年，田龍通過設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)和均勻?qū)嶒?yàn)，對(duì)苦蕎中黃酮類化合物的最佳水提工藝進(jìn)行了研究[15]。在固定料液比為34∶250（g∶mL）的條件下，得出最佳提取工藝為pH值8.0，提取溫度100℃，提取時(shí)間105 min，產(chǎn)物得率為1.44%，明顯高于早期方法中的產(chǎn)物得率。

1.4 超聲浸提法

超聲波具有熱效應(yīng)、機(jī)械粉碎作用和空化作用，超聲浸提法就是利用超聲波的機(jī)械粉碎作用和在液體中的空化作用，加速植物有效成分迅速進(jìn)入溶劑，從而提高提取效率，縮短提取時(shí)間[16-17]。超聲浸提法是近年來研究較多的提取辦法，其主要影響因素有溶劑種類、溶劑濃度、料液比、超聲頻率和超聲時(shí)間等。2008年，許鋼對(duì)苦蕎麥皮和苦蕎麥粉中黃酮類化合物的超聲浸提工藝進(jìn)行了研究[18]，以溶劑種類、溶劑濃度、料液比和超聲時(shí)間為變量設(shè)計(jì)4因素3水平的正交試驗(yàn)，得到最佳提取工藝為：丙酮濃度55%，料液比1∶15，浸泡過夜后，超聲提取30 min。最佳條件下，苦蕎麥皮和苦蕎麥粉中黃酮類化合物的得率分別為0.854 mg/g和0.569 mg/g。使用超聲浸提法所得產(chǎn)物得率雖不高，但大大縮短了提取時(shí)間。考慮到溶劑的安全性和經(jīng)濟(jì)環(huán)保等因素，超聲浸提法中經(jīng)常用乙醇做提取溶劑。2012年，張素斌等[2]用乙醇浸提法對(duì)蕎麥中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，他們以乙醇為溶劑，選擇乙醇濃度、料液比和超聲時(shí)間為變量設(shè)計(jì)3因素3水平的正交試驗(yàn)，得到最佳提取條件為：乙醇濃度75%，料液比1∶15，超聲提取30 min，最佳條件下的產(chǎn)物得率為0.633%。

1.5 索氏提取法

索氏提取法是近年來提取苦蕎中黃酮類化合物最常用到的研究方法之一，具有選擇性好、能耗低、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，非常適于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。索氏提取過程中，溶劑種類、溶劑濃度、料液比、提取溫度和提取時(shí)間等都會(huì)對(duì)最終的提取效果產(chǎn)生影響。甲醇是最為常用的提取溶劑，2002年，徐寶才等[19]用甲醇作溶劑的索氏提取法，結(jié)合HPLC-MS，對(duì)苦蕎籽粒各部分（包括殼、麩皮、外層粉和內(nèi)層粉）中黃酮類化合物的含量進(jìn)行了測(cè)定。在設(shè)定好的提取條件下，得到苦蕎種皮、外層粉、殼、心粉的總黃酮含量分別為4.614%、3.098%、0.505%、0.174%，得率比較可觀。但甲醇具有一定的毒性，使用存在安全隱患，回收利用也不方便，因此研究人員們也在積極探索其他更適宜的提取溶劑。乙醇無毒且沸點(diǎn)低，對(duì)黃酮也有較好的溶解性，適用于索氏提取法進(jìn)行黃酮類化合物的提取，且乙醇回收利用方便，有利于降低生產(chǎn)成本，因此將乙醇作為溶劑進(jìn)行苦蕎中黃酮類化合物的提取研究也層出不窮。2016年，李朋等[20]用乙醇為溶劑的索氏提取法，對(duì)苦蕎麥粒中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。研究中以乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時(shí)間為變量，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和4因素3水平的正交試驗(yàn)，得出最佳提取條件為：乙醇濃度75%vol，料液比1∶35，在75 ℃條件下提取4 h，最佳工藝下產(chǎn)物的得率為1.462%。

1.6 溶劑熱回流法

除了索氏提取法之外，溶劑熱回流法也是近年來提取苦蕎中黃酮類化合物最常用的研究方法，它具有能耗低、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，很適合于實(shí)驗(yàn)室使用。該方法的溶劑種類、溶劑含量、料液比、提取溫度和提取時(shí)間等因素都會(huì)對(duì)產(chǎn)物的提取效果產(chǎn)生影響。2003年，歐陽平等[8]用溶劑熱回流法對(duì)苦蕎麥粉中黃酮類化合物的提取工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)首先對(duì)水、異丙醇、丙酮、乙醇和甲醇5種溶劑的提取效果進(jìn)行了考察，選擇了滲透性強(qiáng)，選擇性好，黃酮得率也較高（僅次于甲醇，排名第2位），溶劑可回收，且對(duì)人體毒副作用小的乙醇作為溶劑。以乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時(shí)間為變量，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和4因素2水平的正交試驗(yàn)，對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，最佳提取條件為：乙醇濃度75%vol，料液比1∶25，在85℃條件下提取2次，每次3 h，最佳條件下產(chǎn)物得率為4.309%。由于乙醇具有許多相對(duì)于其他有機(jī)溶劑的優(yōu)越性，因此在溶劑熱回流提取方法中，是最常用的溶劑。2015年，張英強(qiáng)等[21]以乙醇為溶劑，通過設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，考察了乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時(shí)間對(duì)苦蕎殼和苦蕎麥麩皮中黃酮類化合物提取的影響，最終確定的優(yōu)化工藝為：乙醇濃度75%vol，料液比1∶5，在65 ℃條件下提取3 h，產(chǎn)物得率為3.85%。除了設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，也有一些通過響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化的方法。2014年，王昕等[22]就通過設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化的乙醇熱回流法，對(duì)苦蕎麥粉中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)以乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時(shí)間為變量，通過設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和4因素3水平的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，得出的最佳提取條件為：乙醇濃度 56%vol，料液比 10∶60，在40℃條件下提取30 min，最佳條件下產(chǎn)物得率為3.434 mg/g。同時(shí)，該方法在回流提取前，先用石油醚對(duì)原料進(jìn)行萃取脫脂，回流后得到的產(chǎn)物再用石油醚和乙酸乙酯萃取純化，這些操作可能有助于提高產(chǎn)物中黃酮類化合物的純度，值得借鑒。

2 組合法

組合法是指將兩種或兩種以上的常規(guī)提取方法結(jié)合在一起，或在常規(guī)方法中引入其他有效的提取方法，使各方優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，共同發(fā)揮作用，工藝過程相對(duì)復(fù)雜的提取方法，包括纖維素酶輔助法、微波熱回流法、微波雙水相法、超聲雙水相法、超聲索氏提取法以及超聲纖維素酶輔助法等。

2.1 纖維素酶輔助法

纖維素酶輔助法主要是針對(duì)苦蕎莖、葉等富含纖維素的組織中黃酮類化合物的提取方法。植物組織中的有效成分大多包裹在細(xì)胞壁中，傳統(tǒng)的熱水、酸、堿、有機(jī)溶劑等提取，受細(xì)胞壁主要成分纖維素的阻礙，往往效率較低。纖維素酶可以破壞細(xì)胞壁，改變細(xì)胞壁的通透性，有利于內(nèi)容物的釋放，提高有效成分的提取率。2006年，王敏等[23]在熱水浸提之前，加入纖維素酶對(duì)原料進(jìn)行前處理，再進(jìn)行加熱回流。設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，考察了pH值、加酶量、酶解溫度、酶解時(shí)間和提取次數(shù)等因素對(duì)提取效果的影響，再在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以加酶量、酶解溫度和酶解時(shí)間為變量，設(shè)計(jì)3因素3水平的正交試驗(yàn)，最后得出苦蕎莖葉粉末中黃酮類化合物的最佳提取條件為：pH6.5，加酶量3 μL，酶解溫度55℃，酶解時(shí)間90 min，酶解后再在90℃熱水中浸提3次，每次30 min，最佳條件下的產(chǎn)物得率為1.48%，明顯高于未用纖維素酶前處理的產(chǎn)物得率（0.48%）。除了與熱水浸提法相結(jié)合，纖維素酶輔助法還成功應(yīng)用于熱回流提取工藝的原料前處理過程中。2006年，孫艷華等[24]在乙醇熱回流工藝之前，引入纖維素酶對(duì)蕎麥莖、葉及莖葉混合物3種原料進(jìn)行酶解前處理，通過設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，考察了酶用量、pH值、酶解溫度和酶解時(shí)間對(duì)提取效果的影響，最終確定優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件是：原料溶于10倍的pH4.5水溶液中，加入0.125 g/L纖維素酶，于45℃條件下酶解5 h，酶解完成后，再加入20倍原料重的95%vol乙醇，于70℃下浸提3 h。最佳條件下，莖、葉和莖葉混合物的產(chǎn)物得率分別為1.16%、5.58%和2.31%。

2.2 微波輔助熱回流法

微波提取法是利用了微波的介電加熱和離子傳導(dǎo)作用。樣品及溶劑中的偶極分子在高頻微波能的作用下，產(chǎn)生偶極渦流、離子傳導(dǎo)和高頻率摩擦，在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的熱量，偶極分子旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致的弱氫鍵破裂、離子遷移等能夠加速溶劑分子對(duì)樣品基體的滲透，使目標(biāo)物很快溶劑化，提高傳質(zhì)速率，縮短提取時(shí)間并提高產(chǎn)率。微波提取法具有快速高效、加熱均勻、選擇性強(qiáng)和節(jié)省溶劑等特點(diǎn)，近年來被廣泛應(yīng)用到天然活性成分的提取工藝中。微波輔助熱回流提取法即是在熱回流之前，加入微波預(yù)處理步驟，使待提取成分能更好地溶解到溶劑中。2014年，梁虓等[25]應(yīng)用微波輔助乙醇熱回流的方法，對(duì)苦蕎籽粉末中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)以乙醇濃度、料液比、微波預(yù)處理時(shí)間和回流時(shí)間為變量設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得出最佳提取條件為：乙醇濃度58.25%vol，料液比1∶27.97，微波預(yù)處理時(shí)間107.48 s，回流時(shí)間2.38 h，最佳條件下的產(chǎn)物得率為5.02%，比較可觀。

2.3 微波雙水相法

雙水相提取法技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型分離技術(shù)，其原理是當(dāng)某些親水性高分子聚合物的水溶液超過一定濃度后形成兩相，并在兩相中水分均占很大比例，即形成雙水相系統(tǒng)，被提取的目標(biāo)物在兩相間溶解度差別很大，從而實(shí)現(xiàn)提取分離。與常規(guī)提取方法相比較，雙水相提取法具有操作條件溫和、提取時(shí)間短、能耗低、被分離物質(zhì)純度高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取分離[26]。同時(shí)，如前文所述，微波提取法也具有十分優(yōu)越的性能，因此，將二者結(jié)合在一起用于活性成分的提取，是研究人員比較關(guān)注的課題。2013年，徐春明等[27]用乙醇-硫酸銨雙水相體系，輔以微波預(yù)處理的方法，對(duì)苦蕎麥粉中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了研究。首先確定乙醇體積分?jǐn)?shù)和硫酸銨加入量，再以微波預(yù)處理時(shí)間、微波功率和料液比為變量，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和3因素3水平的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。得到最佳的提取條件是：乙醇30%vol，料液比1∶50，硫酸銨添加量0.38 g/mL，微波功率550 W，微波提取時(shí)間70 s，最佳條件下所得黃酮類化合物的產(chǎn)率為1.38%，且該方法所得產(chǎn)物純度較高，占原料中總黃酮量的59.7%。

2.4 超聲雙水相法

前文所提到的微波輔助雙水相法，在苦蕎麥粉黃酮類化合物的提取中得到了成功應(yīng)用，但對(duì)于富含淀粉的天然植物中的有效成分，微波提取法很容易使它們變性和糊化，堵塞通道，不利于胞內(nèi)物質(zhì)的釋放[28]，因此也有研究人員在探索其他能與雙水相提取工藝相結(jié)合，提高提取效率的方法，超聲輔助雙水相提取法就是其中之一。2016年，沈美榮等將超聲與雙水相提取技術(shù)相結(jié)合，成功實(shí)現(xiàn)了苦蕎籽中黃酮類化合物提取工藝的探索研究[29]。實(shí)驗(yàn)比較了不同有機(jī)試劑/無機(jī)鹽雙水相體系對(duì)苦蕎籽黃酮的萃取能力，并考察了黃酮在丙酮/硫酸銨雙水相體系萃取的分配規(guī)律。在此基礎(chǔ)上，以硫酸銨質(zhì)量濃度、丙酮質(zhì)量濃度、料液比、超聲溫度和超聲時(shí)間為變量，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，初步確定各因素的大致范圍，再以硫酸銨質(zhì)量濃度、料液比和超聲時(shí)間為變量設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，對(duì)提取條件做進(jìn)一步優(yōu)化。優(yōu)化后的工藝條件為：硫酸銨質(zhì)量濃度22.86%，丙酮質(zhì)量濃度31%，料液比1∶46.65，在35℃下超聲25 min，最佳條件下黃酮類化合物的提取得率為（20.01±0.26）mg/g，粗提物純度達(dá)到62.35%。

2.5 超聲索氏提取法

超聲索氏提取法即在索氏提取法中引入超聲處理技術(shù)，利用超聲波在液體中的空化作用，加速植物中的有效成分迅速進(jìn)入溶劑，從而縮短提取時(shí)間，提高提取效率[16]。2013年，趙強(qiáng)等[30]將超聲提取與索氏提取相結(jié)合，對(duì)苦蕎皮中總黃酮的提取工藝進(jìn)行了研究。通過設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)，對(duì)乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、超聲時(shí)間、回流時(shí)間、浸泡時(shí)間、超聲溫度、超聲功率、浸提液pH值這8個(gè)因素對(duì)提取效果的影響做了初步探索，并篩選出乙醇體積分?jǐn)?shù)、回流時(shí)間、超聲時(shí)間、液料比4個(gè)因素，設(shè)計(jì)4因素3水平的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，對(duì)提取工藝做進(jìn)一步的研究，得出最佳提取條件為：乙醇65%vol、料液比1∶14、浸泡時(shí)間30 h、超聲功率300 W、超聲溫度50℃、超聲時(shí)間28 min、回流時(shí)間1.6 h，在該條件下，測(cè)得苦蕎皮中總黃酮含量為1.49270%。采用超聲波振蕩輔助索氏回流提取法，可使得植物細(xì)胞壁及整個(gè)植物體瞬間被破碎，有效地加快了總黃酮溶解度，縮短了提取時(shí)間，提高了產(chǎn)物得率，且操作簡(jiǎn)單易行，值得借鑒。

2.6 超聲纖維素酶輔助法

超聲纖維素酶輔助法即在常規(guī)提取方法中，同時(shí)引入超聲提取和纖維素酶水解兩種工藝，利用超聲波的空化作用和纖維素酶的破壁功能，加速目標(biāo)物的分離釋放和溶劑化過程。該方法用于苦蕎中黃酮類化合物的提取，也有相關(guān)研究的報(bào)道。2012年，張素斌等[2]在常規(guī)的乙醇熱回流提取方法的基礎(chǔ)上，同時(shí)引入超聲提取和纖維素酶輔助提取工藝，對(duì)4種甜蕎麥粉中黃酮類化合物的提取方法進(jìn)行了研究。選用pH5.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液作為超聲與酶解的介質(zhì)，固定超聲功率為500 W，加酶量為1%，酶解溫度為50℃，酶解結(jié)束后，將提取液的乙醇濃度調(diào)為75%vol，在70℃條件下進(jìn)行回流提取。設(shè)計(jì)4因素3水平的正交試驗(yàn)，研究了料液比、超聲時(shí)間、酶解時(shí)間和回流時(shí)間對(duì)提取效果的影響。結(jié)果表明，最佳實(shí)驗(yàn)條件為：料液比1∶10（g∶mL），先超聲40 min，再酶解30 min，最后在70℃條件下用75%vol乙醇溶液回流提取1.5 h。最佳條件下黃酮類化合物的提取得率為0.853%。該方法將超聲波的熱效應(yīng)、機(jī)械粉碎作用和空化作用與纖維素酶的破壁功能有效結(jié)合[16，24]，協(xié)同發(fā)揮作用，使樣品中黃酮類化合物與其他成分的分離更徹底，與溶劑的接觸面更廣，從而更容易溶于乙醇中。該方法耗時(shí)短、效率高，是一種比較優(yōu)良的提取方法。

3 特殊設(shè)備法

特殊設(shè)備法是指需要使用非常規(guī)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備來完成的提取方法，主要有超臨界CO2萃取法、超高壓提取法和超濾法等。這些方法均需使用較昂貴的材料或設(shè)備，因此在實(shí)驗(yàn)研究中并未得到廣泛應(yīng)用，但它們又都具有各自比較明顯的優(yōu)勢(shì)，對(duì)目標(biāo)物的提取效率非常理想，因此研究潛力巨大。

3.1 超臨界CO2萃取法

超臨界流體是介于氣體和液體之間的一種既非氣態(tài)又非液態(tài)的物態(tài)，因其密度較大，與液體相仿，而黏度又接近于氣體，是一種十分理想的萃取劑。其分離原理是利用超臨界CO2對(duì)某些特殊天然產(chǎn)物具有特殊溶解作用，且其溶解能力受溫度和壓力的影響而進(jìn)行的。在超臨界狀態(tài)下，將CO2與待分離的物質(zhì)相接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點(diǎn)高低和分子量大小不同的成分依次萃取出來。對(duì)于苦蕎中黃酮類化合物的提取，也有通過超臨界CO2萃取技術(shù)所做的相關(guān)研究。2007年，姜忠麗等[31]利用超臨界CO2萃取的辦法，對(duì)苦蕎麥粉中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。研究中設(shè)計(jì)了4因素3水平的正交試驗(yàn)，對(duì)樣品的含水量、萃取壓力、萃取溫度和萃取時(shí)間這4個(gè)變量的影響進(jìn)行了討論，最終得到優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件為：蕎麥粉含水量3%，在35℃、30 MPa壓力條件下萃取80 min，最佳條件下的產(chǎn)物得率為1.3%，高于大部分常規(guī)提取法，且時(shí)間更短、更環(huán)保。

3.2 超高壓提取法

超高壓技術(shù)是近年來發(fā)展較快的一種新型加工技術(shù)和提取技術(shù)，其最初應(yīng)用于食品保鮮、食品品質(zhì)改良和食品成型等方面，并以此推動(dòng)了相關(guān)生物技術(shù)的基礎(chǔ)應(yīng)用研究，這些研究已由食品領(lǐng)域擴(kuò)展到醫(yī)藥領(lǐng)域，并滲透到了生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ)性研究當(dāng)中。近幾年，超高壓技術(shù)開始應(yīng)用于中藥有效成分的提取，由于全過程在常溫下進(jìn)行，避免了因熱效應(yīng)引起的功能性成分的降解及生理活性的降低，同時(shí)，超高壓提取具有快速、高效、能耗小、操作簡(jiǎn)單、安全、穩(wěn)定性好及綠色環(huán)保等特點(diǎn)，在天然產(chǎn)物的分離提取中具有良好的應(yīng)用前景。對(duì)于苦蕎中黃酮類化合物的提取研究，也出現(xiàn)了超高壓技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用。2011年，王居偉等[32]利用超高壓提取技術(shù)，對(duì)苦蕎麥粉中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了研究。分別以乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、提取壓力和保壓時(shí)間4個(gè)變量設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和4因素3水平的正交試驗(yàn)，對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，研究得到的最佳提取條件為：乙醇濃度95.31%vol，料液比1∶9.82，在388.1 MPa的壓力下保持8.09 min，最佳條件下苦蕎黃酮類化合物的得率為2.185%，提取效果比較理想。

3.3 超濾法

超濾是近年來發(fā)展起來的一種新興分離純化技術(shù)，是以壓力為推動(dòng)力的膜分離技術(shù)之一，它利用不對(duì)稱微孔結(jié)構(gòu)和半透膜，在一定壓力和流量下，以錯(cuò)流方式對(duì)介質(zhì)和料液進(jìn)行過濾，使小分子溶質(zhì)和溶劑通過，而大分子物質(zhì)和微粒子如蛋白質(zhì)、水溶性高聚物、細(xì)菌等被濾膜截留，以達(dá)到分離、純化目的[33]，其表面的微孔可篩選分子量為1000～30000的物質(zhì)。2010年，楊芙蓮等[34]應(yīng)用超濾技術(shù)，對(duì)蕎麥麩皮黃酮的粗提液進(jìn)行了純化處理。他們首先用超聲浸提的方法制備得黃酮粗提物，再選用分子篩截留量為10000的超濾膜對(duì)粗提物進(jìn)行工藝優(yōu)化。以超濾時(shí)間、樣液濃度、樣液溫度和操作壓力為變量，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，研究其對(duì)膜通量、黃酮遷移率和黃酮純度的影響，最終確定的優(yōu)化工藝條件為：樣液濃度0.5 mg/mL、樣液溫度30℃、操作壓力2 bar，超濾時(shí)間45～60 min，優(yōu)化條件下，黃酮類化合物的遷移率為91.95%，純度達(dá)到28.59%。

4 展望

綜上所述，對(duì)近年來苦蕎中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了較為全面的總結(jié)，為日后相關(guān)研究工作提供了有效參考。文中所歸納的三大類提取方法，每一種都有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，需要根據(jù)生產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)室條件作適當(dāng)選擇。同時(shí)，各方法的最佳條件和產(chǎn)物得率也都存在一定差異，這可能與所使用的原料品種和提取工藝不同有關(guān)，在具體的研究應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行參數(shù)的重新優(yōu)化確定。

苦蕎是一種集營養(yǎng)和保健功效于一體的天然健康食品，在我國食用和藥用歷史悠久，被譽(yù)為“五谷之王”，其含有的豐富的黃酮類化合物，是重要的生物活性成分之源，具有極高的開發(fā)和利用價(jià)值[35]。首先，隨著人民生活水平的不斷提高和生活壓力的不斷增大，大眾對(duì)健康食品的需求也日益增長(zhǎng)，苦蕎類黃酮以其特有的生理功能和安全無副作用的價(jià)值逐漸受到人們認(rèn)識(shí)；其次，苦蕎中黃酮類化合物的高效提取，能為制備高附加值的保健食品和藥品提供豐富的原料，有利于打造企業(yè)的技術(shù)壁壘，提高市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，創(chuàng)造可觀的經(jīng)濟(jì)效益；最后，由于苦蕎特殊的生長(zhǎng)環(huán)境（主要分布在中國西南部的高寒山區(qū)），對(duì)其進(jìn)一步的開發(fā)應(yīng)用，有助于貧困山區(qū)群眾脫貧致富，創(chuàng)造顯著的社會(huì)效益[36-37]。另一方面，在對(duì)苦蕎資源進(jìn)行積極開發(fā)和利用的同時(shí)，我們也應(yīng)該意識(shí)到一些尚待解決的問題，如苦蕎中黃酮類化合物的有效成分還有待進(jìn)一步確定；發(fā)揮的藥理作用的機(jī)理還有待進(jìn)一步研究；具有高附加值的相關(guān)產(chǎn)品還有待進(jìn)一步開發(fā)[36]。相信通過全行業(yè)研究人員的共同努力，不久的將來，一定能在關(guān)鍵問題上取得重大突破，為高效提取和科學(xué)認(rèn)識(shí)苦蕎中的黃酮類化合物，不斷滿足和改善人民物質(zhì)生活水平作出重要貢獻(xiàn)。