歐陽(yáng)觀峰 邱磷安 詹建富 余雄輝歐陽(yáng)觀峰 邱磷安 詹建富 余雄輝

[摘要] 目的 分析HBV感染型原發(fā)性肝癌患者T淋巴細(xì)胞亞群在腫瘤微環(huán)境中的表達(dá)情況。 方法 方便收集醫(yī)院2016年10月—2017年10月收治的HBV感染性原發(fā)性肝癌患者36例資料，納入感染組，取同期收治的非HBV感染原發(fā)性肝癌患者納入非感染組，對(duì)兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)在腫瘤微環(huán)境中的表達(dá)情況觀察對(duì)比，并觀察微血管密度MVD值情況。 結(jié)果 T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)情況，Treg與CD4等陽(yáng)性率感染組均相對(duì)較高，CD8陽(yáng)性率非感染組相對(duì)較高，組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.134，6.020， 27.023， P=0.004， 0.014， 0.000 <0.05）。腫瘤組織微環(huán)境內(nèi)，感染組與非感染組MVD值分別為（66.50±9.00）、（57.80±7.50），組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.456，P=0.000<0.05）。 結(jié)論 T淋巴細(xì)胞亞群在HBV感染原發(fā)性肝癌患者中有較高的表達(dá)水平，且有較高的MVD值。

[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性肝癌；HBV感染；T淋巴細(xì)胞亞群；腫瘤微環(huán)境

[中圖分類(lèi)號(hào)] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）11（a）-0027-03

[Abstract] Objective To analyze the expression of T lymphocyte subsets in tumor microenvironment in patients with HBV-infected primary liver cancer. Methods Thirty-six patients with HBV-infected primary liver cancer admitted to the hospital from October 2016 to October 2017 were convenient enrolled in the infection group. Non-HBV-infected primary liver cancer patients admitted to the same period were included in the non-infected group. The expression of T lymphocyte subsets in the tumor microenvironment was observed and compared， and the microvascular density MVD values were observed. Results The expression of T lymphocyte subsets， Treg and CD4 were relatively high in the infection group， and the CD8 positive rate was relatively high in the non-infected group. There was a significant difference between the groups （χ2=8.134，6.020， 27.023， P=0.004， 0.014， 0.000 <0.05）. In the microenvironment of tumor tissue， the MVD values of the infected group and the non-infected group were （66.50±9.00） and （57.80±7.50）， respectively， and there was significant difference between the groups （t=4.456， P=0.000<0.05）. Conclusion T lymphocyte subsets have higher expression levels in patients with HBV-infected primary liver cancer and have higher MVD values.

[Key words] Primary liver cancer； HBV infection； T lymphocyte subsets； Tumor microenvironment

作為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤疾病，原發(fā)性肝癌病情變化較快，部分研究資料中均指出受患者自身免疫耐受影響，可能出現(xiàn)細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞轉(zhuǎn)移等情況，遠(yuǎn)期生存率較低[1]。特別部分患者存在HBV感染即乙型肝炎病毒感染情況，血清炎性因子水平更高。臨床診療中，應(yīng)注意對(duì)腫瘤微環(huán)境內(nèi)T淋巴細(xì)胞表達(dá)情況觀察，為臨床治療提供有效指導(dǎo)。該次研究將以2016年10月—2017年10月收治的HBV感染性原發(fā)性肝癌患者36例為對(duì)象，對(duì)比非HBV感染患者微血管密度、T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便收集收治的HBV感染性原發(fā)性肝癌患者36例資料，患者年齡49～72歲，平均（61.6±5.5）歲，根據(jù)Edmondson分級(jí)[2]，Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)分別為2例、15例、19例，其中男性與女性各19例、17例。取同期收治的非HBV感染型原發(fā)性肝癌患者36例，患者年齡50～70歲，平均（61.7±5.0）歲，根據(jù)Edmondson分級(jí)，Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)分別為1例、14例、21例，其中男性與女性均為18例。入選標(biāo)準(zhǔn)：①患者均給予病理學(xué)診斷檢查，確診原發(fā)性肝癌；②患者無(wú)危重癥情況或其他影響研究配合情況；③研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬知情同意。一般資料組間數(shù)據(jù)結(jié)果對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可進(jìn)行對(duì)比分析。

1.2 方法

對(duì)所有患者病歷資料做回顧性分析，通過(guò)對(duì)穿刺活檢標(biāo)本、根治切除標(biāo)本的收集，在流式細(xì)胞儀應(yīng)用下，做T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)，若檢出結(jié)果提示有Treg（調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD4+25+）、CD8（CD8+T淋巴細(xì)胞）、CD4（CD4+T淋巴細(xì)胞），若檢測(cè)結(jié)果提示有上述細(xì)胞表達(dá)，判斷為陽(yáng)性。另外，借助Weidner方法，對(duì)微血管密度MVD觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群在腫瘤環(huán)境中的表達(dá)情況觀察，同時(shí)比較微血管密度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

經(jīng)過(guò)SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用（x±s）表示，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，對(duì)比分別由t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)在腫瘤微環(huán)境中的表現(xiàn)觀察

T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)情況，Treg與CD4等陽(yáng)性率感染組均相對(duì)較高，CD8陽(yáng)性率非感染組相對(duì)較高，組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 患者M(jìn)VD情況觀察比較

腫瘤組織微環(huán)境內(nèi)，感染組與非感染組MVD值分別為（66.50±9.00）、（57.80±7.50），組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.456、P=0.000<0.05）。

3 討論

3.1 惡性腫瘤微環(huán)境

惡性腫瘤的研究越來(lái)越深入，其中腫瘤微環(huán)境成為研究熱點(diǎn)。腫瘤微環(huán)境時(shí)指腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞所處的內(nèi)外環(huán)境關(guān)系密切，包括腫瘤所在組織結(jié)構(gòu)、功能代謝，全身以及局部代謝、分泌、結(jié)構(gòu)、免疫與功能改變。HBV感染是原發(fā)性肝癌的重要危險(xiǎn)因素之一，不同于其他酒精性脂肪肝等非感染原因所致原發(fā)性肝癌，患者在發(fā)生原發(fā)性肝癌之前，患者便可能因出現(xiàn)HBV感染出現(xiàn)免疫等腫瘤微環(huán)境因素改變，從而影響腫瘤的發(fā)生，在腫瘤發(fā)生之后，HBV感染仍然發(fā)生作用，從而影響腫瘤的生長(zhǎng)、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。與此同時(shí)，原發(fā)性HBV相關(guān)的原發(fā)性肝癌還因腫瘤、長(zhǎng)期肝硬化，常伴有貧血、腹水等表現(xiàn)，組織損傷加重，進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境改變[3-4]。

3.2 肝癌、HBV、T淋巴細(xì)胞水平關(guān)系

T淋巴細(xì)胞來(lái)源于骨髓多能干細(xì)胞，骨髓中的一部分多能干細(xì)胞或前T細(xì)胞在胸腺激素的誘導(dǎo)下，會(huì)成為具有免疫活性的T細(xì)胞。陳幸福的T細(xì)胞會(huì)經(jīng)淋巴管、外周血、組織液等進(jìn)行再循環(huán)，發(fā)揮細(xì)胞免疫、免疫調(diào)節(jié)等功能，加強(qiáng)免疫應(yīng)答，維持免疫記憶。T淋巴細(xì)胞具有抗癌作用，機(jī)體會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抵抗作用，T淋巴細(xì)胞能夠反映腫瘤、免疫系統(tǒng)之間的相互作用。大量研究顯示其在乳腺癌、卵巢癌等腫瘤以及外周血中都可見(jiàn)T淋巴細(xì)胞功能與數(shù)量異常，反映了腫瘤患者免疫功能變化，感染對(duì)象的CD4水平異常率再40%～60%之間，CD8顯著下降在0%～10%之間，Treg異常率在30%～70%之間[5]。HBV感染通過(guò)激活免疫應(yīng)答，影響T淋巴細(xì)胞水平，從而影響腫瘤發(fā)生、進(jìn)展，腫瘤反過(guò)來(lái)會(huì)影響T淋巴細(xì)胞，反過(guò)來(lái)影響HBR感染的控制。T淋巴細(xì)胞反映了腫瘤、HBV、免疫細(xì)胞之間的關(guān)系。該次研究也證實(shí)這一點(diǎn)，感染HBV的對(duì)象Treg與CD4、CD8陽(yáng)性率都與非感染組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），感染對(duì)象CD4與陽(yáng)性率50.00%、CD8異常率5.56%、Treg異常率44.44%，與前文報(bào)道的結(jié)果相近。

CD4細(xì)胞是一種重要的免疫細(xì)胞，主要表達(dá)于輔助T（Th）細(xì)胞，參與Th細(xì)胞TCR識(shí)別抗原的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，是反應(yīng)細(xì)胞。感染組對(duì)象CD4陽(yáng)性率高于非感染組，提示免疫應(yīng)答明顯增強(qiáng)，這與HBV刺激CD4+T細(xì)胞有關(guān)。CD8+主要與免疫應(yīng)答關(guān)系密切，可識(shí)別可溶性抗原、產(chǎn)生抑制因子等途徑抑制免疫應(yīng)答，感染組CD8+水平低于對(duì)照組（P<0.05），提示HBV感染會(huì)削弱免疫抑制作用，這可能會(huì)導(dǎo)致“腫瘤逃逸”，增加腫瘤增殖風(fēng)險(xiǎn)。T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)變化，提示HBV會(huì)影響原發(fā)肝癌患者免疫功能，進(jìn)一步加重免疫功能紊亂，機(jī)體免疫監(jiān)視功能降低，引起肝癌細(xì)胞發(fā)生免疫“逃逸”，出現(xiàn)療效欠佳情況，提示HBV感染原發(fā)性肝癌出現(xiàn)療效欠佳的風(fēng)險(xiǎn)可能更高。

3.3 微血管密度MVD

另外，該次研究中，感染組與非感染組MVD值分別為（66.50±9.00）、（57.80±7.50），組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。之所以出現(xiàn)該情況，主要受新生血管影響。腫瘤轉(zhuǎn)移或侵襲均以新生血管為基礎(chǔ)，這些新生毛細(xì)血管具有較高的通透性，且管壁不完整，腫瘤細(xì)胞通過(guò)新生毛細(xì)血管更加容易，其他文獻(xiàn)報(bào)道顯示MVD存在顯著的個(gè)體差異，水平在50%～80%之間，該組對(duì)象患者M(jìn)VD處于較低水平，這可能與MVD不僅與感染有關(guān)，還與腫瘤分期、腫瘤大小等因素有關(guān)[7-8]。同時(shí)，毛細(xì)血管生成后，有較多基質(zhì)降解酶包括纖溶酶原激活物、Ⅳ型膠原酶與內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，這些均會(huì)導(dǎo)致基質(zhì)屏障被破壞，為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供條件[9-10]。從該次研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，在微血管密度值MVD值上觀察比較，感染組相對(duì)較高，便能反映除原發(fā)性肝癌患者有HBV感染情況，新血管生成能力強(qiáng)，這可能與HBV感染相關(guān)的免疫功能紊亂有關(guān)。對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移情況，是否受肝癌血管生成影響，需在未來(lái)研究中進(jìn)一步深入分析。

綜上所述，T淋巴細(xì)胞亞群在HBV感染原發(fā)性肝癌患者中有較高的表達(dá)水平，且有較高的MVD值，之所以與非HBV感染型患者存在差異，很大程度受腫瘤血管生成、HBV異常增殖影響，應(yīng)將這些診斷結(jié)果作為臨床治療的參考指導(dǎo)。

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（收稿日期：2018-08-09）