馮金曼， 崔明勛， 姜成哲*， 金 美， 李 鎬

(1. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院；2. 延邊大學(xué)藥學(xué)院:吉林 延吉 133002)

現(xiàn)在的新型飼料添加劑已經(jīng)能夠滿足生產(chǎn)中的很多特殊需求，應(yīng)用范圍也被擴(kuò)大到各類動(dòng)物的養(yǎng)殖業(yè)中[1]。礦物質(zhì)飼料添加劑合理地配制及使用，能夠在很大程度上保證動(dòng)物的健康并提高動(dòng)物的生產(chǎn)力，但若采食的礦物質(zhì)數(shù)量超過(guò)了自身需要量或承受限度時(shí)，就會(huì)發(fā)生中毒或引起不良影響。礦物質(zhì)飼料添加劑產(chǎn)品質(zhì)量的安全性問(wèn)題，主要是限制有毒害元素的最大允許量，并以標(biāo)準(zhǔn)形式做出明確規(guī)定[2]。礦物質(zhì)飼料添加劑是當(dāng)今社會(huì)使用最多的飼料添加劑之一，約占飼料添加劑總用量的66%～72%。

該試驗(yàn)研究的硫磺負(fù)離子添加劑是將存在于大自然的多種礦物質(zhì)用現(xiàn)代高科技納米技術(shù)對(duì)礦物質(zhì)進(jìn)行粉碎、篩選、分離、烘干等程序加工，并按合理的科學(xué)配比混合而成。本產(chǎn)品可廣泛使用于雞鴨、豬狗、牛羊等家畜飼養(yǎng)及魚(yú)、蝦等水產(chǎn)類養(yǎng)殖，也可使用于蔬菜、瓜果類的種植和栽培。本產(chǎn)品具有解毒、祛毒功效，所以對(duì)提高動(dòng)植物健康質(zhì)量起到很好的作用[3-5]。

致畸敏感期毒性在評(píng)判受試物的毒性時(shí)發(fā)揮重要的作用。該試驗(yàn)的目的是觀察硫磺負(fù)離子礦物質(zhì)添加劑經(jīng)口服后對(duì)SD受孕雌鼠產(chǎn)生的敏感期致畸毒性。通過(guò)觀察母鼠及胎兒的多項(xiàng)指標(biāo)來(lái)判斷硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生殖及胎兒發(fā)育是否有毒性或致畸作用。為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供一定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥品

硫磺負(fù)離子添加劑由吉林省延吉市永大飼料有限公司提供。甲醛、乙醇、氫氧化鉀、甘油、茜素紅、苦味酸、乙酸、羧甲基纖維素(CMC)都是國(guó)產(chǎn)分析純。乙醇固定液(95%乙醇)、飽和苦味酸溶液、鮑因氏(Bouins)固定液、茜素紅應(yīng)用液、1% CMC溶液。

硫磺負(fù)離子添加劑混懸液：

低劑量(T1組)：100 mg/100 mL。

中劑量(T2組)：333 mg/100 mL。

高劑量(T3組)：1 000 mg/100 mL。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)環(huán)境

試驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠，雌性體重為220～280 g，雄性體重為350～400 g，雌性鼠均是未進(jìn)行過(guò)交配的大鼠，由延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)于延邊大學(xué)藥學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的屏障環(huán)境設(shè)施內(nèi)。室溫20～26 ℃，濕度40%～70%。SD大鼠均在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)盒內(nèi)喂養(yǎng)，每籠大約3～5只，自由飲水和進(jìn)食。飼料是由延邊大學(xué)飼料中心提供的全價(jià)飼料，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自來(lái)水經(jīng)過(guò)初步過(guò)濾處理后供大鼠飲用。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

將實(shí)驗(yàn)的SD大鼠，按照雌雄2∶1的比例同籠混合交配，第2天凌晨給雌鼠作陰道涂片，在顯微鏡下觀察涂片看是否有精子或陰道栓出現(xiàn)，將能觀察到的雌鼠作為受孕0 d，然后將受孕雌鼠隨機(jī)分為4組，每組15只，所分4組分別為硫磺負(fù)離子高、中、低劑量組，及1% CMC溶液對(duì)照組(5 mL/kg)。所有孕鼠都于受孕第6～15天(致畸敏感期)灌胃給藥，按照體重的不同給藥量均為10 mL/kg。

1.2.3 一般體征檢查

每天及時(shí)觀察孕鼠毛色、五官、行為等一般體征狀況，記錄是否有異常情況出現(xiàn)。各組受孕雌鼠在受孕的3、6、9、12、15、18 d稱量添加的飼料量，次日同一時(shí)間稱量剩余的飼料量，減少的飼料量即為當(dāng)日大鼠的進(jìn)食量。

雌鼠于受孕后第20天將全部處死，觀察有無(wú)異?；虿∽兣K器。剖開(kāi)子宮取出胎鼠(先做外觀檢查)、胎盤，記錄黃體數(shù)，觀察統(tǒng)計(jì)死胎數(shù)(早期死胎、晚期死胎)、著床數(shù)、吸收胎數(shù)，活胎數(shù)，稱量活胎重、胎盤重，用游標(biāo)卡尺測(cè)量胎鼠體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、肛長(zhǎng)(肛門到尿道的距離)，統(tǒng)計(jì)胎鼠性別數(shù)，外觀是否異常等。測(cè)量完上述事項(xiàng)后將約1/2胎鼠固定于Bouins氏液，作內(nèi)臟檢查，其余的固定于95%乙醇溶液中作骨骼畸形檢查。

胎鼠的外觀檢查：先檢查胎鼠的頭部，觀察有無(wú)露腦，腦膜膨出等情況；觀察胎鼠頭部大小，是否有特別小或特別大的畸形情況；胎鼠五官中眼，耳，口，鼻的外觀有無(wú)異常情況；上下頜有無(wú)唇裂；然后進(jìn)行四肢、軀干及尾部的檢查；觀察胎鼠有無(wú)腹部裂開(kāi)，臍疝，脊柱斷裂，脊髓膨出，脊柱側(cè)突等情況；觀察胎鼠的尾巴有無(wú)短尾，卷尾，無(wú)尾等情況。

1.2.4 胎鼠的內(nèi)臟檢查

大約2周后取出固定在Bouins液中的胎鼠，用流水沖去固定液，用單面刀片對(duì)胎鼠進(jìn)行切片檢查。檢查時(shí)先將胎鼠放在蠟板或者木板上，切去胎鼠的四肢和尾部，用左手固定住胎鼠，然后右手持刀片從頭部開(kāi)始往下做橫切或者縱切[6]。根據(jù)不同部位的斷面情況觀察胎鼠器官發(fā)育的大小、性狀和相對(duì)位置是否正常。

沿胎鼠腹中線切開(kāi)胸腔、腹腔，檢查胎鼠的肺、心、橫膈膜、肝、胃、脾、腸等器官的大小、位置及是否畸形。檢查完畢后均將其摘除，然后檢查胎鼠的腎、輸尿管、膀胱、子宮或睪丸的大小、位置及發(fā)育情況。最后將腎臟切開(kāi)，檢查是否有腎盂積水和擴(kuò)大[7]。

活胎率/%=活胎仔數(shù)/胎仔總數(shù)×100%

死胎率/%=死胎在數(shù)/胎仔總數(shù)×100%

畸胎率/%=有畸胎動(dòng)物數(shù)/妊娠動(dòng)物數(shù)×100%

吸收胎率/%=(早期吸收數(shù)+中期吸收數(shù)+晚期吸收數(shù))/胎仔總數(shù)×100%

早期吸收胎率/%=早期吸收數(shù)/胎仔總數(shù)×100%

晚期吸收胎率/%=晚期吸收數(shù)/胎仔總數(shù)×100%

外觀畸形率/%=外觀畸形數(shù)/檢查胎仔數(shù)×100%

骨骼畸形率/%=骨骼畸形數(shù)/檢查骨骼標(biāo)本數(shù)×100%

骨骼異常率/%=骨骼異常數(shù)/檢查骨骼標(biāo)本數(shù)×100%

1.2.5 胎鼠的骨骼檢查

2～3周后取出放在95%乙醇中固定的胎鼠，對(duì)胎鼠進(jìn)行去皮、摘除內(nèi)臟和脂肪(特別是背部脂肪)的操作。

染色完成后將胎鼠標(biāo)本放入小平皿中，加入少量丙三醇溶液，用透視顯微鏡對(duì)胎鼠進(jìn)行整體觀察，然后對(duì)胎鼠的骨骼發(fā)育情況進(jìn)行檢查。先檢查胎鼠頭部的頭頂骨、側(cè)頭骨及后頭骨有無(wú)缺損及骨化情況，然后檢查胸骨的骨化數(shù)目，有無(wú)缺失或融合情況。接著檢查胎鼠的肋骨，觀察是否有畸形情況出現(xiàn)，如融合肋、波狀肋、短肋、分叉肋、肋骨中斷、缺肋、多肋等。檢查胎鼠頸椎、脊柱和椎體骨化數(shù)目(一般情況是頸椎骨化數(shù)7個(gè)，胸椎骨化數(shù)12～13個(gè)，腰椎骨化數(shù)5～6個(gè)，骶椎和尾椎骨化數(shù)7～9個(gè))、有無(wú)融合及縱裂等情況。最后檢查四肢骨發(fā)育情況及前后掌趾骨的骨化數(shù)目[8-9]。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

本試驗(yàn)的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行求平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和t檢驗(yàn)。本試驗(yàn)所有比率的數(shù)據(jù)分析比較均用X2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組孕鼠一般體征的觀察

各組孕鼠的皮毛顏色及光澤、五官等外觀，生理體征及日常行為等均未見(jiàn)異常。孕鼠的排泄物、分泌物等也均正常，無(wú)流產(chǎn)或死亡。

2.2 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)孕鼠進(jìn)食量的影響

各組受孕雌鼠在受孕的第3、6、9、12、15和18 d稱量添加的飼料量，次日同一時(shí)間稱量剩余的飼料量，減少的飼料量即為當(dāng)日大鼠的進(jìn)食量。對(duì)同一天的各組進(jìn)食量求平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并對(duì)試驗(yàn)組與對(duì)照組作t檢驗(yàn)(表1)。T1組在12 d和T3組在9、12 d的進(jìn)食量都較對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，其他組其他時(shí)間試驗(yàn)組與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異，但是試驗(yàn)組的進(jìn)食量都較對(duì)照組多。

表1 妊娠期間雌鼠進(jìn)食量變化結(jié)果(mean ± SD)

注：*表示T組與C組比較，P<0.05，則有顯著差異。

2.3 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)孕鼠體重的影響

硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)母體體重增長(zhǎng)的情況經(jīng)常被認(rèn)為是母體毒性的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)之一。在胚胎發(fā)育的致畸敏感期毒性試驗(yàn)中，從受孕第0天開(kāi)始，在第3、6、9、12、15、18、20天稱量雌鼠的體重，第20天為解剖日。統(tǒng)計(jì)各組孕鼠的體重變化情況如表2，同一天的各組大鼠體重情況之間做t檢驗(yàn)(P>0.05)，20 d母鼠體重的增加量各組之間也做了t檢驗(yàn)(P>0.05)，均無(wú)顯著差異。

表2 妊娠期間雌鼠體重變化結(jié)果(mean ± SD)

2.4 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胚胎的影響

受孕后第20天將全部孕鼠處死，剖開(kāi)子宮取出胎鼠(先做外觀檢查)、胎盤，記錄黃體數(shù)，觀察統(tǒng)計(jì)死胎數(shù)(早期死胎、晚期死胎)、著床數(shù)、吸收胎數(shù)，活胎數(shù)，稱量活胎重、胎盤重，用游標(biāo)卡尺測(cè)量胎鼠體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、肛長(zhǎng)(肛門到尿道的距離)，統(tǒng)計(jì)胎鼠性別數(shù)，外觀是否異常等。各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表3。結(jié)果表明，各實(shí)驗(yàn)組的測(cè)定結(jié)果與對(duì)照組以及各實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異，說(shuō)明添加劑對(duì)胚胎無(wú)不良影響。

表3 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胚胎的影響 (mean ± SD)

2.5 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎鼠發(fā)育情況的影響

本試驗(yàn)對(duì)胎鼠的外觀進(jìn)行檢查，所有胎鼠均未出現(xiàn)明顯的肉眼可見(jiàn)的畸形現(xiàn)象。胎鼠的胎盤重量T1組與C組比較有極顯著的增加(P<0.01)；T3組與C組比較有顯著的增加(P<0.05)；T2組重量稍微有減少，但是與C組比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。T1組胎鼠的重量較C組有極顯著的增加(P<0.01)；T2組胎鼠的重量較C組有顯著增加(P<0.05)；T3組胎鼠的重量與C組無(wú)顯著差異；T1組雌性胎鼠的肛長(zhǎng)較C組顯著變長(zhǎng)(P<0.05)；T1組雌性胎鼠的體長(zhǎng)較C組極顯著變長(zhǎng)(P<0.01)；T2組雄性胎鼠的尾長(zhǎng)較C組顯著變短(P<0.05)，雌性胎鼠的尾長(zhǎng)顯著變長(zhǎng)(P<0.05)；其他各組數(shù)據(jù)與對(duì)照組均無(wú)顯著差異(表4)。

表4 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎兒體重等的影響 (mean ± SD)

注：*表示T組與C組比較，P<0.05，有顯著差異；**表示T組與C組比較，P<0.01，有極顯著差異。

2.6 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎鼠外觀特征的影響

對(duì)硫磺負(fù)離子添加劑的3個(gè)劑量組與對(duì)照組的胎鼠進(jìn)行外觀檢查，胎鼠的頭部、五官、軀干、四肢、尾部及肛門等均未見(jiàn)畸形，表明該產(chǎn)品對(duì)胎鼠的外觀發(fā)育無(wú)明顯影響。在高劑量組出現(xiàn)1例胎鼠個(gè)體非常小，但是外觀無(wú)異常。

2.7 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎鼠內(nèi)臟發(fā)育情況的影響

胎鼠整體經(jīng)Bouins液固定后取出進(jìn)行切片觀察，硫磺負(fù)離子添加劑各試驗(yàn)組與對(duì)照組胎鼠內(nèi)臟及腦內(nèi)結(jié)構(gòu)情況統(tǒng)計(jì)如表5。經(jīng)Bouins液固定后的胎鼠情況如圖1，胎鼠皮膚呈黃色，表面皺縮，但是組織和內(nèi)臟等細(xì)微結(jié)構(gòu)基本未發(fā)生變化。

對(duì)胎鼠的內(nèi)臟及腦部情況進(jìn)行切片觀察，僅將出現(xiàn)異常的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如表5，4個(gè)試驗(yàn)組中均無(wú)畸形胎兒出現(xiàn)。雖然有個(gè)別胎鼠出現(xiàn)頭部異常、胸腺異常、腎盂和膀胱擴(kuò)張等現(xiàn)象，但是數(shù)量很少，3個(gè)劑量組與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異。

表5 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎兒內(nèi)臟的影響 (mean ± SD)

圖1 Bouins液中固定的胎鼠

2.8 硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎鼠骨骼發(fā)育情況的影響

胎鼠的骨骼發(fā)育存在變異，包括胸骨和肋骨骨化不全；掌骨和頭骨、骶骨和尾骨骨化程度不一樣。肋骨有融合或斷裂，頭骨的頭頂骨、側(cè)頭骨和后頭骨骨化不全。胎鼠骨骼檢查主要表現(xiàn)為胸骨、骶骨和尾骨骨化數(shù)目不同。胸骨主要表現(xiàn)為第5、6胸骨的缺失；前掌骨主要是第1、5趾骨骨化不全，后掌骨主要是第1趾骨骨化不全；肋骨主要異常是斷肋；枕骨的0級(jí)骨化率在99%以上。胎鼠染色成功后的情況如圖2所示，只有骨骼呈紅色，其他組織均是透明。在透射光源下觀察胎鼠的情況如圖3所示，能清晰的觀察到胎鼠的骨化情況。

對(duì)胎鼠的骨骼發(fā)育情況統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如表6所示，胎鼠的頭骨、胸骨、掌骨及肋骨的骨化數(shù)試驗(yàn)組與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異。各組胎鼠中均出現(xiàn)骨化不全的胎鼠，但是數(shù)量較少，各組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖2 胎鼠骨骼染色后情況

圖3 透射光源下的胎鼠標(biāo)本

項(xiàng)目組別C組T1組T2組T3組檢查數(shù)55546260頭骨骨化數(shù)5．87±0．825．85±0．836．00±0．005．87±0．60胸骨骨化數(shù)3．98±1．254．20±1．004．39±1．063．53±1．28前掌骨化數(shù)5．91±1．255．87±0．876．06±0．965．70±1．60后掌骨化數(shù)7．00±2．267．63±1．616．94±2．016．67±2．75肋骨骨化數(shù)12．9±0．1312．7±1．7712．9±0．1312．9±0．28骶骨和尾骨骨化數(shù)12．7±2．0111．57±2．0412．34±0．9610．28±2．05頭骨骨化不全1103肋骨骨化不全1115

2.9 各組數(shù)據(jù)與SD大鼠致畸敏感期指標(biāo)背景基數(shù)的比較

本試驗(yàn)有關(guān)內(nèi)臟檢測(cè)數(shù)據(jù)的計(jì)算按照1.2.4中的方法公式獲得，與SD大鼠致畸敏感期指標(biāo)背景基數(shù)的比較，都沒(méi)有顯著的差異，具體如表7所示。

表7 各組數(shù)據(jù)與SD大鼠致畸敏感期指標(biāo)背景基數(shù)的比較(mean ± SD)

3 討論與結(jié)論

發(fā)育中的胚胎或胎兒對(duì)致畸物的感受是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。礦物質(zhì)飼料添加劑的影響要從母鼠和胎兒2個(gè)方面分別去分析。

妊娠期間母鼠的進(jìn)食量可見(jiàn)硫磺負(fù)離子添加劑能提高大鼠的食欲，增加其進(jìn)食量。雖然母鼠妊娠期間體重增加沒(méi)有顯著差異，但是試驗(yàn)組增加量還是高于對(duì)照組，分析原因可能是試驗(yàn)組母鼠進(jìn)食量增加導(dǎo)致體重增加。在試驗(yàn)過(guò)程中觀察母鼠的外觀及解剖后觀察母鼠的主要臟器，均未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性現(xiàn)象?？梢?jiàn)，硫磺負(fù)離子添加劑在本試驗(yàn)劑量時(shí)對(duì)母鼠無(wú)毒性作用。

本試驗(yàn)中胎仔發(fā)育的各項(xiàng)指標(biāo)等數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表明，硫磺負(fù)離子對(duì)胎兒的發(fā)育不僅沒(méi)有抑制作用，在一定程度上還存在促進(jìn)作用，不存在明顯的毒性作用。通過(guò)這些數(shù)據(jù)可知，各組胎鼠的生長(zhǎng)發(fā)育情況基本正常，無(wú)明顯的抑制現(xiàn)象?？傊谠撛囼?yàn)過(guò)程中胎鼠未出現(xiàn)致畸現(xiàn)象。

在觀察硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎兒內(nèi)臟的影響時(shí)，雖然各組均有少量胎兒異常，但是各組個(gè)體之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即對(duì)胎兒內(nèi)臟發(fā)育沒(méi)有毒性作用。各試驗(yàn)組與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異。頭骨骨化數(shù)均在6左右，發(fā)育正常。胸骨骨化數(shù)在4左右，一般是第5,6胸骨骨化不全，各組之間無(wú)顯著差異。左右前掌骨化數(shù)之和在6左右，主要是第1、5趾骨骨化不全；左右后掌骨骨化數(shù)在7左右，主要是第1趾骨骨化不全，各組與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異。肋骨骨化數(shù)基本在13左右，有個(gè)別第13肋骨骨化不全。骶骨和尾骨骨化數(shù)高劑量組與其他各組之間差異較大，但是無(wú)顯著差異，分析原因可能是高劑量組有1只母鼠所產(chǎn)的胎仔骨化情況都不好，其中有1只胎仔個(gè)體很小，全身無(wú)骨化情況，屬于發(fā)育遲緩，但是整體與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異。可能是胎兒在發(fā)育過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)不良導(dǎo)致的，僅1例胎鼠個(gè)體異常小的現(xiàn)象不能說(shuō)明硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)胎兒的發(fā)育存在毒性[10]。

孕鼠懷孕的第6天開(kāi)始受精卵著床，在第6～15天的這段時(shí)期長(zhǎng)期以來(lái)被稱為致畸敏感期[11]。一般致畸敏感期實(shí)驗(yàn)是選擇在動(dòng)物的致畸敏感期進(jìn)行染毒，該試驗(yàn)不但能檢測(cè)受試物的致畸性，還可以觀察受試物致胚胎、胎仔死亡和生長(zhǎng)遲緩等情況，是目前檢測(cè)外源受試物致畸毒性最經(jīng)典也是最可靠的方法。最近以來(lái)，利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在民族醫(yī)藥及疾病模型等研究方面不斷有新的進(jìn)展[12-16]。本研究采用SD大鼠做常規(guī)致畸敏感期毒性試驗(yàn)，檢測(cè)硫磺負(fù)離子添加劑對(duì)孕鼠和胚胎發(fā)育的毒性，結(jié)果顯示在100 mg/kg及以下劑量組，孕鼠均未見(jiàn)母體毒性，胚胎、胎仔各項(xiàng)生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)及外觀、內(nèi)臟檢查、骨骼檢查也均未見(jiàn)異常；各劑量組與對(duì)照組比較雖然有數(shù)例胎鼠出現(xiàn)胸骨缺失，肋骨發(fā)育不全等現(xiàn)象，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明胸骨缺失屬于正?，F(xiàn)象，并非處理因素的結(jié)果。高劑量組較陰性對(duì)照組胎仔的發(fā)育情況稍微有差異，但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析原因可能是本品為礦物質(zhì)不溶于水，只能配成混懸液對(duì)孕鼠進(jìn)行灌胃，可能對(duì)母鼠的刺激較強(qiáng)，對(duì)母鼠會(huì)產(chǎn)生一定的影響，但是不能判斷為毒性現(xiàn)象。

總之，硫磺負(fù)離子添加劑在本試驗(yàn)劑量時(shí)對(duì)孕鼠及胎仔的發(fā)育及健康無(wú)明顯的毒性作用。

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