王欲,夏春玲,劉彩霞
(中國醫(yī)科大學 附屬盛京醫(yī)院婦產科,沈陽 110004)
孕鼠強迫游泳時絕望狀態(tài)與腦海馬區(qū)ERα表達水平的相關性研究
王欲,夏春玲,劉彩霞
(中國醫(yī)科大學 附屬盛京醫(yī)院婦產科,沈陽 110004)
目的 觀察孕鼠在強迫游泳實驗(FST)中的絕望狀態(tài),檢測FST后孕鼠海馬區(qū)雌激素α受體(ERα)的表達,初步探討孕鼠FST時絕望狀態(tài)與海馬區(qū)ERα水平的關系。方法 同批次雌昆明鼠,包括28只孕鼠和20只對照鼠;進行6次FST,記錄第2次和第6次的不動時間。FST后小鼠大腦標本以海馬為中心作冠狀面切片,免疫組化SP法檢測ERα的表達。結果 孕鼠在第 2次和第 6次 FST中不動時間(分別為 149.21± 56.10s、178.54±35.54s)均長于非孕鼠(118.80±52.72s、150.15±37.92s),P分別為0.024、0.011。孕鼠和對照雌鼠海馬區(qū)均有ERα表達,但孕鼠ERα組化評分(3.86±2.69)高于非孕鼠(1.54±1.85),P為0.008。小鼠海馬區(qū)ERα免疫組化評分與第2次FST、第6次FST的不動時間均有直線相關,r值分別為0.332、0.394,P值分別為0.021、0.006。結論 孕鼠在FST中比非孕鼠表現(xiàn)出更明顯的絕望狀態(tài);其海馬區(qū)ERα表達水平亦增高,可能與妊娠期抑郁有關。
抑郁癥;雌激素受體α;免疫組織化學;強迫游泳實驗;孕鼠
妊娠晚期孕婦面臨分娩、家庭與社會角色的轉變,54%的孕婦存在產前焦慮,37.1%的孕婦有產前抑郁癥狀[1],妊娠 36~38周抑郁發(fā)生率為 21.6%[2],嚴重影響分娩決策和母兒健康。產后抑郁已經受到醫(yī)務工作者的重視,但對妊娠期抑郁的認識還很膚淺。中樞神經雌激素受體(ER)的表達與情緒、精神狀態(tài)密切相關,本文通過觀察孕鼠在強迫游泳實驗(FST)中的行為學表現(xiàn)和檢測FST后孕鼠海馬區(qū)ERα的表達,初步探討孕鼠情緒變化與海馬區(qū)ERα水平的關系。
1.1 研究對象
昆明鼠由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供,使用許可證號SYXK(遼)2003-0019。同批次雌鼠,體質量20~25g,隨機分為妊娠組和對照組;共獲得28只孕鼠和20只對照雌鼠。
1.2 實驗方法
1.2.1 妊娠組合籠,行陰道分泌物涂片確定受精日期;孕鼠在受精后12d開始FST;圓柱形玻璃缸直徑22cm、高25cm、盛水約15cm,水溫約20℃;將小鼠放入水中,每次1只,觀察6min;記錄后4min小鼠在水中的不動時間,即漂浮水面、停止掙扎,僅仰露頭呼吸,或偶爾撲動上肢以保持平衡,此為小鼠的絕望狀態(tài)[3];每天上、下午各進行1次,連續(xù)3d,記錄第2次和第6次FST的不動時間。6次強迫游泳后小鼠處死取大腦,以海馬為中心作冠狀面石蠟切片。
1.2.2 免疫組織化學鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶(SP)法檢測小鼠大腦組織ERα的表達:一抗系Santa Cruz公司兔抗鼠 ERα(MC-20):sc-542多克隆抗體,二抗(羊抗兔)、SP試劑、顯色劑均為中杉公司分裝產品;石蠟標本切片厚度5μm,一抗1∶75稀釋,按照說明書步驟行免疫組化SP法染色;陰性對照用PBS代替一抗,其余步驟同;每張切片在400倍光鏡下隨機觀察5個視野,陽性判斷和表達水平評分按下列標準[4]:
(1)根據(jù)染色強弱分為:陰性,核內無任何棕黃染色,0分;弱陽性,核內(伴或不伴胞漿內)淺黃染色,1分;陽性,明顯黃染,2分;強陽性,棕黃或深棕色,3分;
(2)根據(jù)陽性細胞百分率分為:無陽性細胞--0分;陽性細胞百分率為1%~25%--1分;陽性細胞百分率為26%~50%--2分;陽性細胞百分率為51%~75%--3分;陽性細胞百分率為76%以上--4分;
以上兩項相加作為總積分,5個視野取平均值,表示ERα的表達水平。
1.3 統(tǒng)計學方法:采用SPSS13.0軟件;計量資料滿足正態(tài)分布和方差齊性,采用兩樣本t檢驗和Pearson直線相關分析;不滿足方差齊性,采用Mann-Whitney U檢驗。
在第2次和第6次FST中,孕鼠的不動時間(分別為 149.21± 56.10s、178.54±35.54s) 均長于非孕鼠(不動時間分別為 118.80±52.72s、150.15±37.92s),差異有統(tǒng)計學意義(P分別為 0.024、0.011)。孕鼠在第6次FST中的不動時間長于第2次FST,差異有統(tǒng)計學意義(P為0.016)。結果詳見表1。
表1小鼠在FST中的不動時間(s)及海馬區(qū)ERα的免疫組化評分Ta b.1Immo b i l i t y d u r a t i o n o f mi c e i n FSTa n d i mmu n o h i s t o c h e mi c a l s c o r e o f ERα i n t h e h i p p o c a mp u s Group n Immobility duration in the second FST Immobility duration in the sixth FST Immunohistochemical score of ERα Pregnant mice 28 149.21±56.10 178.54±35.541) 3.857±2.690Control mice 20 118.80±52.72 150.15±37.92 1.538±1.854 P 0.024 0.011 0.008Data are expressed asx ± s.1)P<0.05vs the immobility duration in the second FSTin pregnant mice.
孕鼠和對照鼠海馬區(qū)均有ERα表達,陽性細胞通常胞漿和胞核都被黃染,但兩組染色深度以及陽性細胞分布面積都有所不同,如圖A,B所示。孕鼠免疫組化評分(3.86±2.69)高于對照鼠(1.54±1.85),有極顯著差異(P=0.008),提示強迫游泳后孕鼠海馬區(qū)ERα表達水平高于非孕鼠。結果見表1。
小鼠(包括孕鼠和對照鼠)海馬區(qū)ERα免疫組化評分與第2次FST、第6次FST的不動時間均呈直線相關,r值分別為 0.332、0.394,P值分別為0.021、0.006。
FST由法國Porsolt神經藥理室發(fā)明,利用動物不能逃出惡劣環(huán)境,以致行為絕望、在水中停止掙扎而建立的評篩抑郁狀態(tài)的方法[3],這種行為絕望類似人類抑郁癥[5,6]。本研究中孕鼠在FST中不動時間長于非孕鼠,表現(xiàn)出更明顯的絕望狀態(tài),提示妊娠是抑郁癥的獨立風險因子。
對孕鼠進行強迫游泳尚屬首次報道,構思源于對妊娠期抑郁癥動物模型的尋找。預先游泳訓練1次能減小實驗結果的變異[7],對不動時間變異大的小鼠尤為重要,遂取第2次FST結果作為干預前的行為學評價;經過6次強迫游泳,意在加重小鼠的行為絕望,取最后一次FST結果作為干預后的行為學評價。數(shù)次強迫游泳后的孕鼠不動時間延長,符合妊娠期抑郁癥的行為學表現(xiàn),可考慮作為妊娠期抑郁癥的一種模型,但有待于進一步系統(tǒng)評價,包括與抑郁癥密切相關的中樞神經遞質的檢測和抗抑郁藥物的藥理學評價。
雌激素(E)是天然的精神保護因子[8],用于精神疾病輔助治療的研究[9]。妊娠期高E水平應該保護孕婦遠離抑郁,可事實恰恰相反,產前抑郁癥發(fā)病率很高。ER廣泛存在于中樞神經系統(tǒng),尤其是視丘下部、海馬及邊緣組織中,影響情緒、學習、記憶等高級神經活動。ERβ基因敲除的小鼠,E的抗抑郁效應(降低FST不動時間)不復存在[10];而抑郁癥患者下丘腦室旁核表達促腎上腺皮質素釋放激素(CRH,情緒反應的主要激素)的神經元增加且伴隨ERα共區(qū)域化[11],提示E作用于ERβ可能發(fā)揮抗抑郁作用,作用于ERα則可能抑制中樞。本研究提示FST后孕鼠海馬區(qū)ERα水平高于非孕雌鼠,且小鼠在FST中的不動時間與ERα水平呈直線相關,中樞神經ERα水平增高可能正是產前抑郁的原因之一。
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(編輯 孫憲民,英文編輯 陳 姜)
Relationship between the Desperate State of Pregnant Mice in Forced Swimming Test and the Expression of Estrogen Receptor Alpha in Hippocampus
WANGYu,XIAChun-ling,LIUCai-xia
(Department of Obstetrics and Gynecology,Shengjing Hospital,China Medical University,Shenyang 110004,China)
ObjectiveTo observe the desperate state of pregnant mice in forced swimming test(FST)and detect the expression of estrogen receptor α(ERα)in the hippocampus of mice after swimming,and to study the relationship between the desperate state of pregnant mice in FSTand the expression of ERα in hippocampus.MethodsFemale Kunming mice of the same batch included 28pregnant mice and 20control mice.FSTwas repeated for 6times,and immobility durations in the second and the sixth FSTwere recorded.After FST,the cerebrum was sampled,and the hippocampus was the center of paraffin-embedded section.The expression of ERα was detected by immunohistochemistry.ResultsThe immobility durations in the second and the sixth FSTwere significantly longer in preganant mice than in control mice(149.21±56.10vs 118.80±52.72s,P=0.024;178.54±35.54vs 150.15±37.92s,P=0.011),respectively.ERα were expressed in the hippocampus of both pregnant mice and control mice,and the immunohistochemical score of ERα in pregnant mice was signficantly higher than that in control mice (3.86±2.69vs 1.54±2.07,P=0.008).There were linear correlations between the immunohistochemical score and the immoblity durations in the second and sixth FST(r=0.332,P=0.021;r=0.394,P=0.006),respectively.ConclusionPregnant mice are more likely to show desperation in FST,and the up-regulated expression of ERα in the hippocampus of pregnant mice may relate to antepartum depression.
depressive disorder;estrogen receptor alpha;immunohistochemistry;forced swimming test;pregnant mouse
R714.7
A
0258-4646(2010)11-0922-03
遼寧省教育廳高??蒲谢鹳Y助項目(05L458)
王欲(1981-),男,醫(yī)師,博士研究生.
劉彩霞,E-mail:liucaixia@yeah.net
2010-09-07