聶瑞杰+王英姿+孫振陽+王思雨+張景珍

[摘要] 中藥標準化研究是中醫(yī)藥走向現(xiàn)代化和世界化的重要舉措，而中藥飲片炮制加工的標準化是中藥標準化研究的重要組成部分，建立當歸飲片的加工工藝技術(shù)標準對其質(zhì)量的提高和療效的發(fā)揮具有重要意義。該研究通過設(shè)計單因素實驗優(yōu)選當歸的最佳軟化、切制和干燥工藝。以阿魏酸、當歸多糖、揮發(fā)油、浸出物（水、醇）含量為指標，分析不同軟化、切制、干燥工藝對當歸中5種成分含量的影響，采用歸一距離評價法對實驗數(shù)據(jù)進行分析。研究結(jié)果顯示不同軟化方法和干燥溫度會對當歸中5種成分的含量造成影響，但切片厚度對含量影響不大。當歸飲片的最佳制備工藝：當歸藥材撿去沙石等非藥用部位，除去霉變、蟲蛀部分，用流動的飲用水搶水洗凈，碼放于潤藥池中，采用浸潤法進行軟化，每1 kg藥材每隔2.5 h噴灑125 mL水，藥材上部用潔凈濕潤的棉布覆蓋，悶潤15 h至藥材內(nèi)外軟硬程度適宜后切薄片（1～2 mm），裝盤厚度為1～2 cm，于55 ℃鼓風(fēng)干燥6 h，期間翻動2次。

[關(guān)鍵詞] 當歸； 軟化； 切制； 干燥； 標準化

[Abstract] Study on the standardization of Chinese materia medica is an important action for modernization and globalization for traditional Chinese medicine. Standardization on the processing of Chinese herbal pieces is an important part in the study on standardization of Chinese materia medica， so it is of great significance to establish the technical processing standards of Angelicae Sinensis Radix pieces for improving its quality. In this study， single factor experiment was designed to optimize the softening， cutting and drying processes of Angelicae Sinensis Radix. With ferulic acid， Angelicae Sinensis Radix polysaccharide， volatile oil and extracts （water and ethanol） content as the quality index， the effects of different softening， cutting and drying processes on the contents of the five components in Angelicae Sinensis Radix were analyzed， and the normalized distance evaluation method was used to analyze the experimental data. The results showed that the content of five components in Angelicae Sinensis Radix was affected by different softening methods and drying temperature， but the thickness of slice had little effect on the content. The best preparation process for Angelicae Sinensis Radix was as follows： Non-medicinal parts were removed； mildewed and rot as well as moth-eaten parts were removed； washed by the flowing drinking water； stacked in the drug pool； moistening method was used for softening， where 125 mL water was sprayed for every 1 kg of herbs every 2.5 h； upper part of herbs covered with clean and moist cotton， and cut into thin slices （1-2 mm） after 15 h moistening until appropriate softness， with disk thickness of 1-2 cm， then received blast drying for 6 h at 55 ℃， and turned over for 2 times during the drying.

[Key words] Angelicae Sinensis Radix； softening； cutting； drying； standardization

當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis （Oliv.） Diels的干燥根。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，以甘肅岷縣所產(chǎn)當歸為道地藥材，稱為“岷歸” [1]，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效[2]。臨床上十分常用，在中醫(yī)的內(nèi)、外科、婦科、兒科等各科均有應(yīng)用，甚至有“十方九歸”的說法[3]?，F(xiàn)代的化學(xué)研究表明，當歸中的化學(xué)成分種類多樣，涉及到有機酸及其酯，苯酞類、多糖類、甾醇類及其他成分如微量元素和聚炔類等[2-4]。2015年版《中國藥典》中規(guī)定當歸中含阿魏酸不得少于0.05%，含揮發(fā)油不得少于0.4%（mL·g-1）[5]。現(xiàn)代研究表明當歸多糖有活血、調(diào)節(jié)免疫等顯著的生理活性，是當歸補血活血的藥理成分之一[6-7]，在藥材和飲片質(zhì)量研究中常會將其作為當歸質(zhì)量考察的指標[7-8]。endprint

飲片作為中藥制劑生產(chǎn)的重要原料，其質(zhì)量至關(guān)重要。飲片制備過程中藥材的軟化、切制、干燥等過程均會對飲片質(zhì)量造成影響，但各地當歸飲片切制干燥方法和技術(shù)參數(shù)相差較大，文獻研究得出的結(jié)論也不確切[9-14]，2015年版《中國藥典》對當歸飲片的生產(chǎn)規(guī)定（除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切薄片，曬干或低溫干燥）較為籠統(tǒng)，課題組按照國家中藥標準化項目的要求對10個飲片生產(chǎn)企業(yè)進行調(diào)研后發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)對當歸飲片的軟化、切制和干燥工藝參數(shù)相差較大或規(guī)定不夠明確，如進行當歸藥材的軟化時，有些企業(yè)僅規(guī)定“藥透水盡”，但對軟化方法和加水量沒有規(guī)定，或者有些企業(yè)僅規(guī)定軟化時間，對其他參數(shù)沒有規(guī)定；干燥時，有些企業(yè)采用日曬法進行干燥，有些企業(yè)采用蒸氣干燥、烘箱干燥或紫外線干燥，干燥溫度也有50 ℃到60 ℃到80 ℃不等，由于不同企業(yè)采用的軟化方法、加水量、軟化時間、干燥方法、干燥溫度和干燥時間均沒有相對統(tǒng)一的標準，導(dǎo)致當歸飲片的有效物質(zhì)含量差異大，影響了當歸飲片的臨床療效，因此，筆者以阿魏酸、揮發(fā)油含量結(jié)合浸出物（水、醇）和多糖含量為定量指標，結(jié)合文獻調(diào)研考察了當歸飲片制備過程中不同的軟化、切制和干燥方法對當歸飲片中主要藥效成分的影響，以期得到穩(wěn)定、可控的當歸飲片制備加工工藝，為當歸飲片的生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

藥材由蘭州佛慈制藥股份有限公司提供，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)孫志蓉教授鑒定為為傘形科植物當歸A. sinensis的干燥根。

阿魏酸對照品（批號110773-201614，中國食品藥品檢定研究院）；無水葡萄糖對照品（E1624080，aladdin）；5%苯酚溶液（170425，Biotopped）；甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑為分析純，水為哇哈哈純凈水。

1.2 儀器

日本島津高效液相色譜儀（SIL-20A自動進樣器，SPD-20A紫外-可見檢測器，CTO-10A SVP柱溫箱）；BSI10型1/1萬電子天平（SARTORIUS A6 Made by Sartorius）；KH7200DB型數(shù)控超聲波清洗機（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；ZN-02小型粉碎機（北京興時利和科技發(fā)展有限公司）；紫外-可見分光光度計（756PC，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；Research plus 單道可調(diào)量程移液器（3120000267，德國Eppendorf）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9030A，北京北方利輝實驗儀器設(shè)備有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（HH-S4，北京科偉永興儀器有限公司）；渦旋儀（MX-S，DRAGONLAB）。

2 方法

2.1 浸出物的含量測定

分別用70%乙醇和水作溶劑，照浸出物測定法（《中國藥典》2015年版四部通則2201項下）熱浸法測定，以干燥品計算供試品中醇溶性浸出物和水溶性浸出物的含量。

2.2 揮發(fā)油的含量測定

照揮發(fā)油測定法（《中國藥典》2015年版四部通則2204）乙法測定。計算供試品中揮發(fā)油的含量。

2.3 阿魏酸的含量測定

2.3.1 色譜條件 Agilent Extend-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈-0.085%磷酸（17∶83），檢測波長316 nm，進樣量10 μL，進樣時間30 min，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃，色譜圖見圖1。

2.3.2 對照品的制備 精密稱取阿魏酸對照品4.98 mg，置于25 mL棕色量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀釋至刻度，為對照品儲備液，精密量取1.5 mL對照品儲備液，置于25 mL棕色量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得質(zhì)量濃度為11.95 mg·L-1的阿魏酸對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取當歸粉末 （過3號篩）0.2 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞后精密稱定質(zhì)量，水浴（80 ℃）加熱回流30 min，放冷后再次稱定質(zhì)量，用70%甲醇補足失重，搖勻后靜置，取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

方法學(xué)研究表明，阿魏酸在0.023 9～0.478 μg與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），樣品溶液在室溫條件下放置12 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定（RSD 0.24%），測定方法的精密度（RSD 0.074%，n=6）、重復(fù)性（RSD 1.4%，n=6）和加樣回收率（平均回收率98.90%，RSD 2.1%，n=6）均符合要求。

2.3.4 供試品的測定 按照2.3.3項方法對不同工藝制得的當歸飲片進行處理，在2.3.1項下的色譜條件下進行HPLC測定。按照干燥品計算阿魏酸含量。

2.4 當歸多糖的含量測定

2.4.1 測定條件 采用紫外-可見分光光度法對當歸多糖進行定量，檢測波長為490 nm，顯色劑選用5%苯酚-濃硫酸（2∶7）。顯色方法：精密量取待測溶液1 mL，置具塞試管中，精密加入5%苯酚溶液2 mL后，再精密加入濃硫酸7 mL，渦旋搖勻20 s后置于70 ℃水浴中加熱20 min，取出，置自來水浴中冷卻5 min，靜置1 h，以水加入相應(yīng)的試劑同樣操作作為空白，在490 nm處測吸光度。

2.4.2 對照品溶液的制備 精密稱取在105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品5.29 mg，置于50 mL棕色量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 取當歸樣品粉末 （過60目篩） 約2 g，精密稱定，加80%乙醇100 mL回流1 h，濾過，濾渣加水50 mL回流2 h，趁熱抽濾，濾液全部轉(zhuǎn)移到100 mL棕色量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻即得。endprint

2.4.4 線性關(guān)系的考察 取配成的葡萄糖對照品溶液，取10，20，40，60，80，100 μL，分別按照2.4.1項下的測定條件和顯色條件測定吸光度，以溶液濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，得到線性回歸方程A=58.643C+0.036 5（r=0.999）。結(jié)果表明，當歸多糖在2～8 μg與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5 精密度考察 取同一供試品溶液于490 nm處進行吸光度的測定，重復(fù)6次，RSD 0.36%，說明儀器具有良好的精密度。

2.4.6 重復(fù)性試驗 取同一批當歸樣品，按2.4.3項下的方法平行制備6份供試品溶液并按照2.4.1項下的條件下進行顯色，在490 nm處連續(xù)測定6次吸光度，結(jié)果平均為0.35%，RSD 1.2%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品粉末2份，按照2.4.3項下的方法制備供試品溶液并按照2.4.1項下的條件下進行顯色，于顯色后0，10，20，30，40，60，80，120 min測定吸光度，RSD 2.6%，表明樣品在120 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知多糖含量的同一樣品6份，分別加入當歸多糖的對照品，按照2.4.3項下的方法制備供試品溶液并按照2.4.1項下的條件下進行顯色，進行紫外-可見分光光度儀的分析，RSD 2.4%，平均回收率103.3%，說明該方法回收率良好。

2.4.9 樣品的測定 按照2.4.2項方法對不同工藝制得的當歸飲片進行處理，在2.4.1項下的條件下進行顯色，顯色后在490 nm處測定吸光度，按照干燥品計算多糖含量。

2.5 數(shù)據(jù)分析方法

本研究采用歸一距離評價法對實驗數(shù)據(jù)進行分析，該分析方法是首先對各指標數(shù)據(jù)做歸一化處理，然后再針對每個指標取其最大值，得到理想樣品；然后計算每個樣品與理想樣品之間的距離，距離越小，則對應(yīng)的方法評價越好，距離越大，對應(yīng)的方法評價越差。計算公式為：綜合指標=[∑（dmax-di ） 2]1/2，其中d=（Ymax-Yi）/（Ymax-Ymin），Y代表各指標成分的含量。綜合指標代表對應(yīng)方法距離理想化值的距離，越接近0效果越好，越大效果越差。

3 結(jié)果

3.1 軟化工藝的考察

3.1.1 洗潤法[13] 將當歸藥材的主根和支根分開，分別洗凈，灑少量水后分別密閉悶潤14 h和6 h至軟硬程度適宜。

3.1.2 浸潤法[11] 當歸藥材稱定質(zhì)量后搶水洗凈，碼放于潤藥池中，分次噴淋，每次噴淋水量為藥材質(zhì)量1/8的飲用水，藥材上用潔凈濕潤的棉布覆蓋，每隔2.5 h噴淋1次，共噴淋6次軟化至藥材內(nèi)外軟硬程度適宜。

3.1.3 返潮軟化法[12] 將當歸藥材搶水洗凈，放在具有帶孔隔板的密閉容器中，隔板下的容器中放適量水，以不觸及藥材為宜，密閉，使水蒸氣緩慢滲入藥材，軟化48 h至藥材內(nèi)外軟硬程度適宜。

3.1.4 最佳軟化工藝的確定 按照3.1.1～3.1.3項下3種軟化方法制備3種飲片，按照2.1～2.4項下的測定方法進行不同軟化方法制備飲片的浸出物（水、醇）、揮發(fā)油、阿魏酸和多糖含量的測定，見表1，按照2.5項下的數(shù)據(jù)分析方法進行數(shù)據(jù)分析，見表2。

浸潤法與表2中的綜合分析結(jié)果，洗潤法的平均綜合指標是1.91，浸潤法的平均綜合指標為1.08，返潮軟化法的平均綜合指標為1.15，即洗潤法的軟化效果最差，浸潤法和返潮軟化法的效果較好，且平均綜合指標顯示浸潤法稍優(yōu)于于返潮軟化法。用SAS 9.4數(shù)據(jù)分析軟件對不同軟化方法飲片的綜合指標進行分析，浸潤法和返潮軟化法綜合指標優(yōu)于洗潤法指標，且有顯著性差異（P<0.01），返潮軟化法的綜合指標和浸潤法相比，無顯著性差異。而且，由于返潮軟化法的軟化時間為48 h，時間較長，導(dǎo)致當歸夏季軟化時會出現(xiàn)部分發(fā)霉的情況。因此，綜合考慮實際情況和成分含量，選擇浸潤法為最佳軟化方法。

3.2 切制工藝的考察

3.2.1 當歸飲片的制備 2015年版《中國藥典》對當歸飲片厚度的規(guī)定為“薄片”，即1～2 mm，為了規(guī)范當歸飲片質(zhì)量，筆者對切片厚度1 mm和切片厚度2 mm進行了考察。

按照3.1.4項下對當歸飲片最佳軟化工藝的考察結(jié)果，將當歸藥材搶水洗凈，碼放于潤藥池中，分次噴淋，每次噴淋水量為加藥材質(zhì)量1/8的飲用水，每隔2.5 h噴淋1次，共噴淋6次軟化至藥材內(nèi)外軟硬程度適宜。調(diào)節(jié)切藥刀刀距，分別切制出厚度為1 mm和厚度為2 mm的當歸飲片，45 ℃干燥，備用。

3.2.2 最佳切片厚度的確定 將3.2.1項下制備的兩種厚度的飲片進行浸出物（水、醇）、阿魏酸、多糖、揮發(fā)油的含量測定，確定最佳切片厚度，見表3，按照2.5項下的數(shù)據(jù)分析方法進行數(shù)據(jù)分析，見表4。

根據(jù)表4中的綜合分析結(jié)果，切片厚度1 mm的平均綜合指標為2.24，切片厚度2 mm的平均綜合指標為2.21，二者相差很小，且綜合指標排名在1 mm和2 mm不同組之間均勻分布，用SAS 9.4數(shù)據(jù)分析軟件對不同切片厚度飲片的綜合指標進行分析，分析結(jié)果顯示切片1 mm和切片2 mm的綜合指標無顯著性差異，即切片厚度1 mm和切片厚度2 mm含量差異不大。因此切片厚度為1～2 mm為佳，與2015年版《中國藥典》的規(guī)定一致。

3.3 干燥工藝的考察

3.3.1 當歸飲片的制備 2015年版《中國藥典》對當歸飲片干燥的相關(guān)規(guī)定為“曬干或低溫干燥”，即干燥溫度不超過60 ℃，筆者按照藥典結(jié)合文獻調(diào)研后選取45，50，55，60 ℃為研究對象，控制水分在10%以下，考察最佳干燥時間和干燥溫度。筆者經(jīng)過預(yù)實驗后得出在鋪盤厚度為切片厚度為1～2 mm，鋪盤厚度為1～2 cm，控制水分在10%以下，45，50，55，60 ℃下的干燥時間分別為9，8，6，5 h。endprint

將當歸藥材搶水洗凈，碼放于潤藥池中，分次噴淋，每次噴淋水量為加藥材質(zhì)量1/8的飲用水，每隔2.5 h噴淋1次，共噴淋6次軟化至藥材內(nèi)外軟硬程度適宜，調(diào)整切藥刀刀距，將飲片厚度控制在藥典規(guī)定的1～2 mm，鋪盤厚度為1～2 cm，分別在45，50，55，60 ℃鼓風(fēng)干燥9，8，6，5 h，備用。

3.3.2 最佳干燥溫度的確定 將3.3.1項下制備的4種干燥溫度下的當歸飲片進行浸出物（水、醇）、阿魏酸、多糖、揮發(fā)油的含量測定，確定最佳干燥溫度和干燥時間，見表5，按照2.5項下的數(shù)據(jù)分析方法進行數(shù)據(jù)分析，見表6。

根據(jù)表6中的綜合分析結(jié)果，烘干溫度為45 ℃時平均綜合指標為1.26，烘干溫度為50 ℃時平均綜合指標為1.38，烘干溫度為55 ℃時平均綜合指標為0.91，烘干溫度為60 ℃時的平均綜合指標為1.71，即浸潤法的平均綜合指標最佳，用SAS 9.4數(shù)據(jù)分析軟件對不同干燥溫度的綜合指標進行分析，45 ℃和55，60 ℃的綜合指標有顯著性差異（P<0.01），55 ℃和60 ℃的綜合指標有顯著性差異（P<0.01），45 ℃和50 ℃綜合指標無顯著性差異，且浸潤法的綜合排名靠前，烘干時間適宜，因此選擇鼓風(fēng)干燥55 ℃，6 h為最佳干燥溫度和干燥時間。

4 討論

中藥的多指標綜合評價是一種能全面、客觀、公正的反映實驗結(jié)果真實性和準確性的評價方法[15]， 是優(yōu)選最佳工藝條件的技術(shù)參數(shù)時常用的手段，歸一化方法因其具有客觀公正性而在多指標評價中經(jīng)常應(yīng)用，本研究為了優(yōu)化當歸飲片加工工藝，在歸一化法的基礎(chǔ)上采用歸一距離評價法對實驗數(shù)據(jù)進行分析，建立了更加客觀公正的理想樣品，既考慮到了每個指標對飲片質(zhì)量的影響，又避免了主觀性對實驗結(jié)果的影響。本研究在考察水溶性物質(zhì)含量、醇溶性物質(zhì)含量和3種主要藥效成分-阿魏酸、揮發(fā)油和當歸多糖含量的基礎(chǔ)上進行歸一距離評價，兼顧藥典指標-阿魏酸、揮發(fā)油，醇溶性浸出物，又考慮到了其他藥理活性指標-當歸多糖和水溶性浸出物，基本上能夠客觀公正的優(yōu)選當歸飲片的最佳炮制加工工藝。

前期本研究已經(jīng)對原藥材中阿魏酸、揮發(fā)油、水浸出物、醇浸出物和當歸多糖的含量進行了測定，原藥材中五種成分的平均質(zhì)量分數(shù)分別為0.106%，1.07%，73.67%，66.12%，3.63%，采用最佳加工工藝處理后的樣品5種成分的平均質(zhì)量分數(shù)分別為0.102%，0.97%，65.29%，64.21%，3.61%，5種成分的含量損失率分別為3.8%，9.3%，11.4%，2.9%，0.6%，5種成分中，揮發(fā)油和水浸出物的損失率較大。

阿魏酸、揮發(fā)油中的各種苯酞類物質(zhì)和當歸多糖曾多次被報道是當歸中具有較強藥理活性的成分[7，16-17]，因此，本實驗采用單因素考察法，以阿魏酸、當歸多糖、揮發(fā)油含量結(jié)合藥典規(guī)定的浸出物含量先后進行了當歸飲片最佳軟化、切制、干燥工藝的考察。實驗結(jié)果表明，軟化方法、切制工藝和干燥溫度均會對當歸中的上述成分產(chǎn)生影響，與水接觸的時間越長，有效成分損失越多，其中，水浸出物的損失率最大。因此軟化時必須要做到藥透水盡，避免傷水；干燥溫度和干燥時間對當歸中成分含量的影響主要體現(xiàn)在揮發(fā)油上，烘干溫度越高，揮發(fā)油的損失率越大，含量越低，因此藥材烘至干燥程度適宜時需及時取出。

中藥飲片是中成藥和臨床各種中藥制劑的原料，其質(zhì)量的優(yōu)劣和穩(wěn)定性直接影響到藥物的質(zhì)量和臨床療效，因此，中藥飲片制備加工工藝的標準化也是中藥標準化的關(guān)鍵，是中藥實現(xiàn)現(xiàn)代化和世界化的關(guān)鍵步驟[18]，當歸作為一種臨床上十分常用的中藥，其飲片生產(chǎn)加工工藝的標準化研究至關(guān)重要，因此本實驗在實際基礎(chǔ)上確定了穩(wěn)定可控、簡便易行的當歸飲片制備加工工藝。本研究的工藝設(shè)計是在課題組前期對10個飲片生產(chǎn)企業(yè)的當歸飲片生產(chǎn)加工工藝調(diào)研的基礎(chǔ)上進行的，接下來會在飲片生產(chǎn)企業(yè)進行中試實驗以驗證本研究所得最佳處理工藝參數(shù)的適宜性，希望能夠為當歸飲片的生產(chǎn)加工工藝標準化研究提供實驗依據(jù)，也為當歸飲片后期的炮制加工工藝標準化研究奠定基礎(chǔ)，進而推動中藥標準化的研究進程。

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