潘展硯　陳佳　胡婷婷等

[摘要]目的：探索正常皮膚、目光性角化（AK）、鮑溫病和皮膚鱗狀細(xì)胞癌（SCC）組織中芳香烴受體通路相關(guān)蛋白AHR及CYP1A1的表達(dá)。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)15例正常皮膚，10例AK，10例鮑溫病以及20例皮膚SCC中AHR及CYP1A1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果：AHR在正常皮膚、AK、鮑溫病和皮膚SCC中表達(dá)于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，陽(yáng)性率分別為33%，100%，80%，65%；AHR在細(xì)胞核表達(dá)中陽(yáng)性率分別為20%，70%，60%，50%；CYP1A1在正常皮膚、AK、鮑溫病和皮膚SCC中表達(dá)于細(xì)胞漿，陽(yáng)性率分別為20%，20%，20%，15%。結(jié)論：AHR的高表達(dá)和激活與皮膚SCC的發(fā)生有關(guān)，值得進(jìn)一步研究其在皮膚腫瘤中的作用。

[關(guān)鍵詞]芳香烴受體；AK；鮑溫?。击[狀細(xì)胞癌

[中圖分類(lèi)號(hào)]R739.5 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2017）08-0080-03

芳香烴受體（aryl hydrocarbon receptor，AHR），又稱(chēng)為二噁英受體，是一種配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，可以激活外源性代謝酶細(xì)胞色素P450家族（CYP），調(diào)節(jié)多種環(huán)境污染物如二噁英（TCDD）和多環(huán)芳烴類(lèi)（polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）在細(xì)胞內(nèi)的代謝過(guò)程。AHR參與環(huán)境污染物的代謝，會(huì)導(dǎo)致某些致癌中間代謝物的產(chǎn)生，從而引起腫瘤的產(chǎn)生。最新研究顯示，AHR可以被中波紫外線(xiàn)激活，并對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡和炎癥因子產(chǎn)生影響，從而參與日光性皮膚腫瘤的發(fā)生。

雖然有細(xì)胞和動(dòng)物研究推測(cè)AHR的表達(dá)和激活與皮膚腫瘤的形成有關(guān)，但AHR與臨床皮膚腫瘤的相關(guān)性研究還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究擬通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)分析AHR在正常皮膚、日光性角化?。╝ctinic keratosis，AK）、鮑溫病（Bowen Disease）、皮膚鱗狀細(xì)胞癌（Squmous cell carcinoma，SCC）的表達(dá)差異。

1材料和方法

1.1標(biāo)本來(lái)源：標(biāo)本來(lái)自于上海市皮膚性病醫(yī)院2013年1月2015年7月活檢存檔蠟塊，其中正常皮膚15例，AK標(biāo)本10例，鮑溫病10例，皮膚SCC20例。以上標(biāo)本均經(jīng)病理檢查及免疫組織化學(xué)檢查證實(shí)，且所有病例病理檢查均未經(jīng)過(guò)化療、放療及其他免疫治療。

1.2試劑：兔抗人AHR抗體和CYP1A1抗體購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)Santa Cruz Biotechnology公司；即用型快捷免疫組化MaxVisionTM試劑盒（鼠/兔）、粉劑型檸檬酸抗原修復(fù)液、粉劑型PBS磷酸鹽緩沖液購(gòu)自福建邁新公司。

1.3免疫組織化學(xué)染色：將所有標(biāo)本以4μm厚度連續(xù)切片，將組織切片常規(guī)脫蠟。用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照；用試劑公司提供的已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。所有標(biāo)本用檸檬酸修復(fù)抗原，滴加一抗，37℃孵育60mim PBS緩沖液沖洗3min×3次；滴加二抗，室溫孵育30min，PBS緩沖液沖洗3min×3次；滴加新鮮配制的DAB顯色，鏡下控制顯色時(shí)間，及時(shí)終止顯色；依次蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，風(fēng)干，樹(shù)脂封片。

1.4結(jié)果判定：染色結(jié)果判定以胞漿、細(xì)胞核現(xiàn)清晰的黃褐色至黃色顆粒者為陽(yáng)性。按400倍視野陽(yáng)性細(xì)胞百分值（0%：0分；1%～25%：1分；26%～50%：2分；>50%：3分）和細(xì)胞著色強(qiáng)度（陰性：0分；淡黃色：1分；棕黃色：2分；棕褐色：3分）評(píng)分。兩分值相加，0～2分為陰性，3～6分為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)分析，正常皮膚的陽(yáng)性率與三種皮膚腫瘤的陽(yáng)性率比較采取2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 AHR在正常皮膚、AK、鮑溫病和皮膚SCC中的表達(dá)測(cè)定結(jié)果：AHR在正常皮膚、AK、鮑溫病和皮膚SCC中表達(dá)于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，總陽(yáng)性率分別為：33%，100%，80%，65%。AHR在三種皮膚腫瘤中表達(dá)顯著高于正常皮膚（X²=9.41，P<0.01）；AHR在AK中的表達(dá)高于皮膚SCC（X²=4.57，P<0.05）；AHR在細(xì)胞核表達(dá)中陽(yáng)性率分別為：20%，70%，60%，50%（圖1），AHR在三種皮膚腫瘤細(xì)胞核表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常皮膚（X²=6.15，P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 CYP1A1在正常皮膚、AK、鮑溫病和皮膚SCC中的表達(dá)測(cè)定結(jié)果：CYP1A1在正常皮膚、AK、鮑溫病和皮膚SCC中表達(dá)于細(xì)胞漿，陽(yáng)性率分別為20%，20%，20%，15%；CYP1A1在三種腫瘤表達(dá)的陽(yáng)性率與正常皮膚無(wú)差異（X²=0.05，P>0.05）。見(jiàn)表1。

3討論

AHR及下游信號(hào)通路與皮膚腫瘤的發(fā)病相關(guān)。研究顯示環(huán)境污染物如PAHs，TCDD，苯并芘、二苯并咔唑（DBC）、煤焦油及香煙混合物等均是AHR強(qiáng)激活配體，它們?cè)趧?dòng)物模型均可引發(fā)皮膚SCC。AHR作為皮膚環(huán)境污染物的受體在皮膚癌變的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。AHR被激活后其下游細(xì)胞色素代謝酶（CYP1A1，CYP1A2，CYP1B1等）隨后被激活，環(huán)境污染物經(jīng)過(guò)代謝后水溶性增加，在這過(guò)程中污染物的毒性可能增強(qiáng)，特別是芳香烴類(lèi)的代謝物可以直接攻擊DNA形成突變。AHR與日光性皮膚腫瘤發(fā)生也有相關(guān)性。Fritsche等發(fā)現(xiàn)UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)的色氨酸產(chǎn)生的光產(chǎn)物6甲?；胚岵3，2-b]咔唑（FICZ），F(xiàn)ICZ能夠激活A(yù)HR。AHR被UVB激活后能夠抑制紫外線(xiàn)誘導(dǎo)的皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡過(guò)程，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，AHR敲除的小鼠相比正常小鼠，同樣劑量的UVB長(zhǎng)期照射后，皮膚SCC生成數(shù)量減少50%。但是AHR與臨床皮膚腫瘤的相關(guān)性研究尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

本研究收集了臨床皮膚SCC皮損以及其兩種早期病變進(jìn)行了研究。AK與日曬相關(guān)，是老年人群中發(fā)病率最高的皮膚腫瘤，也是典型的癌前病變。由AK發(fā)展生成的皮膚SCC惡性程度較高，容易早期轉(zhuǎn)移。鮑溫病是原位鱗狀細(xì)胞癌，轉(zhuǎn)變?yōu)槠つwSCC的幾率很高。AHR在AK組織和鮑溫病中的陽(yáng)性率高達(dá)100%和80%，處于高表達(dá)狀態(tài)；AHR在這兩種皮膚腫瘤細(xì)胞核表達(dá)中陽(yáng)性率為70%和60%，顯示AHR信號(hào)通路在這兩種皮膚腫瘤中處于激活狀態(tài)；AHR在AK組織中的表達(dá)高于皮膚SCC；這些結(jié)果提示AHR高表達(dá)和激活與皮膚SCC生成的起始事件相關(guān)。相關(guān)細(xì)胞學(xué)研究也表明，AHR的激活可以導(dǎo)致細(xì)胞膜FEGFR的異常激活，還與NF-κB信號(hào)通路的激活有關(guān)，提示了AHR參與皮膚細(xì)胞增殖和炎癥等腫瘤發(fā)生的早期事件。

本研究顯示AHR下游經(jīng)典基因CYP1A1的陽(yáng)性率在正常皮膚和三種皮膚腫瘤細(xì)胞之間未有明顯差異，而AHR在三種皮膚腫瘤細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)均明顯高于正常皮膚，顯示AHR處于激活狀態(tài)。這提示，AHR在皮膚腫瘤細(xì)胞中被激活后沒(méi)有啟動(dòng)經(jīng)典的TCDD/AHR/ARNT/CYP1A1途徑，而是啟動(dòng)了不依賴(lài)ARNT的蛋白磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。其下游激活的靶位基因可能包括β-連環(huán)蛋白、原癌基因c-Myc、表皮生長(zhǎng)因子受體等。這條信號(hào)通路下游可能與細(xì)胞增殖和分化、免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)，需要進(jìn)一步探討，以期為皮膚腫瘤的發(fā)病研究帶來(lái)新的突破。endprint