邸鐵濤+張春玲+陳露+龍麗+侯丹+劉洹穎+宋慶娜+黃薔

[摘要] 目的 將中藥丹黃散外敷用于糖尿病大鼠足潰瘍創(chuàng)面，觀察其對潰瘍創(chuàng)面的促愈作用，探討其促愈機(jī)制。方法 建立糖尿病大鼠足潰瘍模型，設(shè)12只中藥組、12只西藥組、12只空白組，另設(shè)12只正常組，空白組與正常組不添加干預(yù)方法，西藥組采用生長因子凝膠外敷，中藥組采用丹黃散外敷。測量不同時間點大鼠潰瘍面的愈合面積，通過HE染色、Masson染色觀察創(chuàng)面新生組織內(nèi)毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞的增生情況。 結(jié)果 對4組大鼠不同時間點愈合率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。中藥組、西藥組與空白組比較，能明顯促進(jìn)創(chuàng)面的愈合，加快創(chuàng)面愈合的速度，縮短愈合時間（P=0.001）。HE染色、Masson染色觀察顯示，中藥組與西藥組創(chuàng)面組織中炎性細(xì)胞較之空白組與正常組減少，新生毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞增多。結(jié)論 丹黃散可明顯提高創(chuàng)面的愈合率，促進(jìn)潰瘍的愈合，其機(jī)制可能與促進(jìn)創(chuàng)面新生毛細(xì)血管形成、促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 丹黃散；創(chuàng)面愈合；血管新生；成纖維細(xì)胞；中醫(yī)藥

[中圖分類號] R259 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-4062（2017）08（b）-0165-03

糖尿病足的發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜且難以愈合，存在多種學(xué)說。有學(xué)者認(rèn)為，糖尿病患者體內(nèi)高血糖持續(xù)狀態(tài)和晚期糖基化終末產(chǎn)物的大量蓄積可以造成血管的損傷，這可能是導(dǎo)致糖尿病足潰瘍難以愈合的原因[1]。糖尿病足存在毛細(xì)血管與神經(jīng)病變，中醫(yī)脈絡(luò)學(xué)說認(rèn)為糖尿病足中血管的損傷尤其是微血管損傷可造成潰瘍發(fā)生發(fā)展和遷延不愈。中藥丹黃散由丹參、大黃、當(dāng)歸、沉香、松香、沒藥共6味傳統(tǒng)中藥組成，具有清熱解毒、活血利濕，祛腐生肌等功效，可明顯促進(jìn)創(chuàng)面的愈合[2]。該實驗將丹黃散外敷于糖尿病大鼠潰瘍創(chuàng)面，觀察不同時間的創(chuàng)面愈合率和新生創(chuàng)面的毛細(xì)血管增生情況，探討丹黃散促愈糖尿病足潰瘍的作用機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實驗動物 SPF級200 g左右雄性SD大鼠，購自重慶醫(yī)科大學(xué)動物研究所。45只高脂高糖飼料喂養(yǎng)一個月，隔夜禁食后腹腔注射10%STZ 40 mg/kg，3 d后測空腹血糖大于16.7 mmol/L為成模糖尿病大鼠。選擇大鼠背部較為平坦之處脫毛，龍膽紫標(biāo)記約1.5 cm×1.5 cm大小面積，水合氯醛麻醉后在無菌條件下將造模區(qū)皮膚剪去，深達(dá)筋膜。

1.1.2 藥物制備 丹黃散由該院藥劑科統(tǒng)一制備，丹參、大黃、地榆、乳香、沉香、沒藥共6味中藥按照1：1比例混合粉碎成粉過六號篩。對照藥選用重組人表皮生長因子凝膠（批號：14020213）。

1.2 實驗方法

1.2.1 給藥方法 將糖尿病潰瘍成模后大鼠隨機(jī)分為3組，中藥組、西藥組、空白組各12只、另取正常SD大鼠12只設(shè)為正常組，空白組和正常組不進(jìn)行藥物干預(yù)。中藥組創(chuàng)面外敷丹黃散，西藥組創(chuàng)面外敷生長因子凝膠，1次/d觀察30 d。

1.2.2 HE染色、Masson染色 創(chuàng)面中心點取新生肉芽組織（約3 g），平均分為2份分別進(jìn)行HE、Masson染色，采用多功能熒光顯微鏡觀察組織創(chuàng)面和周圍組織的病理形態(tài)。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，行t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠不同時間點愈合率比較

采用重復(fù)的方差分析對4組大鼠不同時間點愈合率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。中藥組與西藥組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明丹黃散在促進(jìn)糖尿病大鼠潰瘍愈合上與生長因子凝膠具有同等作用；中藥組、西藥組與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001），說明丹黃散與生長因子凝膠均能明顯促進(jìn)創(chuàng)面的愈合，短愈合時間。4組大鼠不同時間點愈合面積從大到小具有相同趨勢，可依次排列為：中藥組>西藥組>正常組>空白組。見表1。

2.2 組織HE染色與Masson染色

光鏡觀察結(jié)果：空白組可見較多炎性細(xì)胞，少見成纖維細(xì)胞，罕見新生毛細(xì)血管；正常組較空白組炎性細(xì)胞數(shù)量減少，成纖維細(xì)胞增多，可見散在的新生毛細(xì)血管；西藥組和中藥組較空白組，可見少量的炎性細(xì)胞，成纖維細(xì)胞數(shù)量較多，大量新生毛細(xì)血管?？傮w上看，中藥組毛細(xì)血管增生明顯，成纖維細(xì)胞較多且染色較深，炎性細(xì)胞少見，西藥組、正常組居中，空白組最差，極少見血管增生，炎性細(xì)胞浸潤明顯。見圖1。

3 討論

糖尿病足（Diabetic Foot，DF）又稱糖尿病肢端壞疽，屬中醫(yī)“消渴”“脫疽”“瘡瘍”范疇。WHO將糖尿病足定義為糖尿病患者由于合并神經(jīng)病變及各種不同程度末梢血管病變而導(dǎo)致下肢感染、潰瘍形成和（或）深部組織的破壞[3]。糖尿病足潰瘍存在不同程度的血管和神經(jīng)病變，中醫(yī)脈絡(luò)學(xué)說認(rèn)為糖尿病足患者血管尤其是微血管損傷造成了足潰瘍的發(fā)生和發(fā)展[4]，潰瘍創(chuàng)面缺乏新生肉芽組織與毛細(xì)血管致使其遷延不愈，由新生毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞構(gòu)成的肉芽組織形成在潰瘍面愈合過程中至關(guān)重要，可直接影響潰瘍面愈合過程及預(yù)后。新生毛細(xì)血管可改善創(chuàng)面微循環(huán)，提供營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，加速創(chuàng)面新陳代謝，促進(jìn)潰瘍面愈合；而成纖維細(xì)胞在皮膚損傷后可被激活，使胞質(zhì)中出現(xiàn)張力纖維，從而促進(jìn)潰瘍面愈合。

中醫(yī)治療糖尿病足潰瘍以“拔膿祛腐”“脫瘡生肌”“補(bǔ)益氣血”“活血化瘀”等法通暢氣血、去腐生肌。丹黃散是該院十余年的經(jīng)驗總結(jié)，在中醫(yī)“筋癰”理論指導(dǎo)下結(jié)合現(xiàn)代藥理研究形成的院內(nèi)制劑，主方為丹參、大黃、當(dāng)歸、沉香、松香、沒藥等6味中藥按1：1：1比例組成的外用散劑，方中丹參為君藥，性溫味甘辛，具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、抗菌及消炎等作用[5]。大黃共為君藥，性寒味苦，具有清熱解毒、涼血祛瘀、抗炎解毒等作用[6]，可抑制多種細(xì)胞和病毒；當(dāng)歸為臣藥，性溫味甘辛，具有抗血小板集聚、減少血粘度、提高單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能等作用；沒藥為佐藥，性溫味辛苦，具有散血消腫、止痛生肌等作用，還能促進(jìn)粘膜再生[7]；沉香共為佐藥，性溫味辛苦，具有行氣鎮(zhèn)痛、抗菌抑菌等作用；松香為使藥，性辛甘，有鎮(zhèn)靜理氣、拔膿祛腐、生肌止痛等效果，諸藥合用具有清熱解毒、活血利濕，祛腐生肌等功效，可明顯促進(jìn)創(chuàng)面愈合。該實驗中HE染色和Masson染色結(jié)果均表明，丹黃散與重組人表皮生長因子凝膠均有促進(jìn)新生毛細(xì)血管生長、增殖、升高成纖維細(xì)胞數(shù)等作用，中藥組、西藥組較空白組與正常組顯微鏡相同視野下可見成纖維細(xì)胞、新生毛細(xì)血管數(shù)量明顯增多，從而促進(jìn)潰瘍創(chuàng)面新生肉芽組織生成，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，縮短愈合時間。推測，這很可能是丹黃散促進(jìn)糖尿病潰瘍創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制。此外，不同時間點各組大鼠創(chuàng)面愈合率的比較也支持這一結(jié)論，中藥組、西藥組第7、15、21、28天創(chuàng)面愈合率均優(yōu)于正常組與空白組，具有相同趨勢，可依次排列為：中藥組>西藥組>正常組>空白組，中藥組、西藥組促進(jìn)潰瘍創(chuàng)面愈合療效顯著。

該研究將中藥制劑丹黃散外敷用于糖尿病足潰瘍模型大鼠，通過測量不同時間點大鼠潰瘍面的愈合面積，計算、比較各組大鼠不同時間點潰瘍創(chuàng)面的愈合率，觀察HE染色、Masson染色中創(chuàng)面新生組織中毛細(xì)血管、成纖維細(xì)胞的增生情況，對比四組大鼠創(chuàng)面愈合情況。結(jié)果顯示中藥丹黃散可明顯提高大鼠潰瘍創(chuàng)面的愈合率，促愈糖尿病大鼠潰瘍，其機(jī)制可能與促進(jìn)創(chuàng)面新生毛細(xì)血管形成、促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Chang PC， Tsai SC， Jheng YH， et al.Soft-tissue wound healing by anti-advanced glycation end-products agents[J].J Dent Res.2014，93（4）：388-393.

[2] 王安宇，喬藝杰，魏良綱.丹黃散外敷治療糖尿病足的臨床療效觀察[J].貴州醫(yī)藥，2011，35（6）：505-507.

[3] Apelqvist，Bakker K，van Houtum WH，et al.International consensusand guidelines on the management and the prevention of the diabeticfoot.International Working Group on the Diabetes Foot[J].DiabetesMetab Res Rev，2000.16（1）： 84.

[4] 魏聰，常麗萍，趙珊珊.脈絡(luò)學(xué)說指導(dǎo)防治“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”的理論探微[J].疑難病雜志，2015（11）：1101- 1103.

[5] 辛淑杰，丹參的藥理作用及臨床應(yīng)用探討[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，20（1）：26.

[6] 齊君，楊秋芳.外用大黃治療難愈性外傷及潰瘍[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2003（5）：59.

[7] 李曦，張麗宏，王曉曉，等.當(dāng)歸化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥材，2013，36（6）：1023-1028.endprint