靳雙星,張桂枝,張 瀟,王學(xué)強(qiáng)

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450046;2.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院動物科技學(xué)院,河南 鄭州 450046;3.開封市動物疫病預(yù)防控制中心,河南 開封 475000)

中藥因其具有安全、高效、低毒、價廉、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點,在動物疫病防控中發(fā)揮著越來越大的作用。炮制中藥的工藝是中藥制藥的精髓。近年來,通過微生物發(fā)酵手段炮制中藥的研究越來越受到重視,并取得了一定進(jìn)展[1-2]。與未發(fā)酵中藥相比,發(fā)酵中藥可較大幅度地改變藥性,提高療效,降低毒副作用,擴(kuò)大適應(yīng)癥,是現(xiàn)代生物技術(shù)和中藥研究的完美結(jié)合,為中藥的發(fā)展開辟了廣闊新空間,成為中藥研究與開發(fā)的新熱點[3]。因此,本課題組根據(jù)中獸醫(yī)理論及養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐研制出補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑。為探討其對肉雞生長性能和免疫功能的影響,在飼料中添加不同劑量的補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑,測定艾拔益加(AA)肉雞的日增重、料肉比、免疫器官指數(shù)、新城疫(ND)抗體效價和血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)等指標(biāo)的變化,為該制劑在生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品 復(fù)方中藥是由黃芪、白術(shù)、黨參、甘草、當(dāng)歸、柴胡、陳皮、升麻等8味中藥組成的補(bǔ)中益氣湯。發(fā)酵方法參考張桂枝的文獻(xiàn)[4]。

1.2 日糧組成及試驗設(shè)計

1.2.1 日糧組成,見表1。

表1 試驗動物日糧組成

1.2.2 試驗設(shè)計 1日齡健康A(chǔ)A肉雞,隔離飼養(yǎng)至7日齡,選取300只體重相近健康的肉仔雞,隨機(jī)分為4組,每組設(shè)5個重復(fù),每個重復(fù)15只雞,分籠飼養(yǎng),自由采食和飲水,試驗期間各組飼養(yǎng)管理條件一致。空白對照組,飼喂基礎(chǔ)日糧;中藥對照組,基礎(chǔ)日糧中添加1%未發(fā)酵補(bǔ)中益氣湯中藥;試驗1、2組,在飼料中分別添加0.5%、1.0%補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑。免疫程序：4組雞均在7日齡1.5倍量點眼滴鼻接種新城疫活疫苗(LaSota株);21日齡2.5倍量飲水接種新城疫活疫苗(LaSota株)。

1.3 主要試劑 IgG、IgA、IgM ELISA檢測試劑盒(均購自南京建成生物工程研究所),新城疫(ND)標(biāo)準(zhǔn)濃縮抗原、ND標(biāo)準(zhǔn)陽性血清(均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所),雞新城疫活疫苗(LaSota株)(購自齊魯動物保健品有限公司)。

1.4 主要儀器 高壓蒸汽滅菌鍋、生化培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)、96孔V型反應(yīng)板、微量移液器等。

1.5 檢測指標(biāo)及測定方法

1.5.1 平均日增重 每組分別在 7、14、21、28、35日齡早上未飼喂情況下空腹稱重,計算平均日增重。平均日增重=(周末平均體重-周初平均體重)/7。

1.5.2 階段料肉比 雞群在7日齡開始準(zhǔn)確記錄喂料量,并且準(zhǔn)確稱量雞只體重并記錄。階段料肉比=平均喂料量/(末體重-初體重)。

1.5.3 免疫器官指數(shù)測定 于14、21、28、35日齡,每個處理組共選15只雞,分別稱重,頸靜脈放血致死,迅速摘取胸腺、脾臟和腔上囊,進(jìn)行稱重并計算其免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=免疫器官重量(g)/試驗階段體重(kg)。

1.5.4 抗體效價測定 分別在14、21、28、35日齡,每個處理組共選15只雞,采用微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(HI)檢測血清中ND抗體,用n log2來表示。

1.5.5 免疫球蛋白濃度測定 按照ELISA試劑盒說明書,測定血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM濃度。

1.6 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件的One-Way ANOVA法進(jìn)行單因素方差分析,并用Duncan's法進(jìn)行顯著性檢驗,以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn),試驗結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞生長性能的影響

2.1.1 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞平均日增重的影響 由表2可以看出,在14、21、28日齡時各組之間差異均不顯著(P＞0.05);35日齡時試驗1組的平均日增重與空白對照組相比差異顯著(P＜0.05),但與中藥對照組和試驗2組相比差異不顯著(P＞0.05)。

2.1.2 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞階段料肉比的的影響 由表3可知,14、21日齡時各組之間差異均不顯著(P＞0.05),28、35日齡時試驗1組料肉比與空白對照組和中藥對照組之間差異顯著(P＜0.05);但與試驗2組相比差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響 由表4可以看出,14日齡時各組之間免疫器官指數(shù)無顯著差異(P＞0.05);21日齡時中藥對照組、試驗1組和2組胸腺指數(shù)明顯增高,與空白對照組相比差異顯著(P＜0.05);28、35日齡時試驗1組所有的免疫器官指數(shù)均顯著高于空白對照組和中藥對照組(P＜0.05);28日齡,試驗1組與試驗2組免疫器官指數(shù)差異不顯著(P＞0.05),35日齡試驗1組腔上囊指數(shù)顯著高于試驗2組(P＜0.05)。

表2 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對肉雞平均日增重的影響 (gd-)

表3 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對肉雞料肉比的影響

表4 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞ND抗體效價的影響 由表5可知,14、21日齡時各組之間ND抗體效價無明顯差異(P＞0.05)。28日齡和35日齡時,中藥對照組、試驗1組和2組的ND抗體效價明顯高于空白對照組(P＜0.05),且試驗1組和2組明顯高于中藥對照組(P＜0.05),但試驗1組和2組之間無明顯差異(P＞0.05)。

2.4 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞血清免疫球蛋白的影響 由表6可以看出,在14日齡時各組IgG、IgA、IgM指標(biāo)差異均不顯著(P＞0.05)。在21日齡時,試驗1、2組的IgG濃度明顯升高,與空白對照組和中藥對照組相比差異顯著(P＜0.05);IgA濃度,中藥對照組、試驗1組和2組顯著高于空白對照組(P＜0.05)。28日齡時,IgG和IgA濃度,中藥對照組、試驗1組和2組顯著高于空白對照組(P＜0.05);試驗1組IgM濃度顯著高于空白對照組和中藥對照組(P＜0.05)。35日齡時,IgG濃度,中藥對照組、試驗1組和2組顯著高于空白對照組(P＜0.05),且試驗1、2組與中藥對照組相比差異顯著(P＜0.05);IgA濃度,試驗1組明顯高于空白對照組和中藥對照組(P＜0.05)。

表5 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對肉雞新城疫抗體效價的影響 (n log2)

表6 補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑對AA肉雞血清免疫球蛋白的影響

3 討論

現(xiàn)代藥理研究顯示[5-7],補(bǔ)中益氣湯具有調(diào)整胃腸運動的作用,能調(diào)節(jié)胃酸、胃蛋白酶的分泌;能增強(qiáng)小腸對葡萄糖的吸收功能;增加胰液的分泌。本試驗研究結(jié)果表明,在飼料中添加補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑可顯著增加肉雞的日增重,提高飼料轉(zhuǎn)化率,尤其在試驗后期效果較明顯。

胸腺、腔上囊和脾臟是禽類重要的免疫器官,免疫臟器指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱[12]。免疫器官質(zhì)量和指數(shù)增加是由于其器官自身的細(xì)胞生長發(fā)育和分裂增殖所致,是機(jī)體免疫增強(qiáng)的表現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn),補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑能顯著提高AA肉雞的免疫器官指數(shù),說明中藥補(bǔ)中益氣湯經(jīng)過發(fā)酵后,可較大幅度地提高藥效,降低藥物用量,促進(jìn)肉雞免疫器官的發(fā)育。

體液免疫是機(jī)體抵抗傳染病的主要因素之一,抗體是介導(dǎo)體液免疫的重要分子,抗體效價的高低直接反映機(jī)體的體液免疫狀態(tài)[9]。本試驗結(jié)果表明,28、35日齡時試驗1組的ND抗體效價明顯高于空白對照組和中藥對照組。說明中藥經(jīng)過發(fā)酵后免疫增強(qiáng)效果提高,這與安勝英等[10]、張桂枝等[4]試驗結(jié)果相一致。

免疫球蛋白是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體,在一定程度上反映機(jī)體對疾病的抵抗能力[11],其含量升高,說明機(jī)體體液免疫功能增強(qiáng)。通過各種方式被動獲得的各種免疫球蛋白具有抗菌、抗外毒素或抗病毒的免疫功能[12]。本研究結(jié)果表明,AA肉雞飼料中添加補(bǔ)中益氣湯發(fā)酵制劑能顯著提高IgG、IgA和IgM濃度,增強(qiáng)肉雞的體液免疫功能。

韓春楊等[13]研究表明,微生物發(fā)酵中藥是一種新的中藥炮制方法,通過微生物的降解作用,最大限度地提取藥物的有效成分和活性物質(zhì),并生成新的藥物成分,這可能是中藥發(fā)酵后藥效增強(qiáng)的主要機(jī)制。朱新術(shù)[14]研究表明,利用篩選的某乳酸菌株發(fā)酵黃芪后,微生物與中藥之間產(chǎn)生了協(xié)同效果。微生物與中藥之間存在協(xié)同效應(yīng)[15]或者是中藥與益生菌雙重疊加,調(diào)節(jié)胃腸菌群平衡,發(fā)揮促生長和免疫調(diào)節(jié)作用,有可能是發(fā)酵中藥發(fā)揮藥效的作用機(jī)理之一。本研究結(jié)果顯示,補(bǔ)中益氣湯經(jīng)過發(fā)酵后效果明顯增強(qiáng),可能是由于通過發(fā)酵有效成分以及含量發(fā)生了某些改變所致,具體有效成分發(fā)生何種改變,有待后續(xù)研究。