徐小艷,陳昌海,徐正軍,王相子,開 妍

(江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇 南京 210036)

獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室是指隸屬于各級(jí)獸醫(yī)主管部門,并承擔(dān)動(dòng)物疫病診斷、監(jiān)測(cè)和檢測(cè)等任務(wù)的國(guó)家級(jí)區(qū)域獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室、省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室、地(市)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室和縣(市)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室[1]。2017年7月,根據(jù)農(nóng)業(yè)部辦公廳和江蘇省農(nóng)業(yè)委員會(huì)有關(guān)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)的文件要求,江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織實(shí)施了2017年度江蘇省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)。為更好地發(fā)揮比對(duì)結(jié)果的作用,我們對(duì)此次比對(duì)結(jié)果進(jìn)行了總結(jié)和分析,旨在為今后的相關(guān)工作提供參考,為全省獸醫(yī)系統(tǒng)檢測(cè)能力提升作出貢獻(xiàn)。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)項(xiàng)目根據(jù)市級(jí)和縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的不同,本次比對(duì)設(shè)置了市級(jí)比對(duì)項(xiàng)目和縣級(jí)比對(duì)項(xiàng)目?jī)纱箢?。市?jí)設(shè)置了高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)、布魯菌病抗體檢測(cè)、小反芻獸疫抗體檢測(cè)、細(xì)菌分離與鑒定4個(gè)項(xiàng)目;縣級(jí)設(shè)置了小反芻獸疫抗體檢測(cè)、布魯菌病抗體檢測(cè)、細(xì)菌分離與鑒定3個(gè)項(xiàng)目。

1.2 比對(duì)方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑針對(duì)4個(gè)比對(duì)項(xiàng)目,明確了各自的檢測(cè)方法,采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或農(nóng)業(yè)部推薦的方法進(jìn)行比對(duì)。所用試劑一部分由省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一提供,一部分由參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室自行準(zhǔn)備。各比對(duì)項(xiàng)目所采用的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑見表1。

1.3 比對(duì)樣品制備由省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心完成所有比對(duì)項(xiàng)目樣品的制備、標(biāo)定、分裝和編號(hào)。

1.3.1 高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)樣品參考值為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性的高致病性豬藍(lán)耳病疫苗稀釋物樣品中隨機(jī)抽取5份組成1組樣品。

1.3.2 布魯菌病抗體檢測(cè)樣品參考值為＜1∶25(記作 ＜25)或 1∶25(記作 25)、1∶50(記作 50)、1∶100(記作100)、＞1∶200(記作＞200)的羊血清樣品中隨機(jī)抽取5份組成1組樣品。

1.3.3 小反芻獸疫抗體檢測(cè)樣品參考值為陽(yáng)性和陰性的羊血清樣品中隨機(jī)抽取5份組成1組樣品。

1.3.4 細(xì)菌分離與鑒定樣品參考值為乙型副傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌的細(xì)菌培養(yǎng)物樣品中隨機(jī)抽取3份組成1組樣品。

1.4 比對(duì)樣品傳遞比對(duì)樣品為具有生物學(xué)活性的血清或疫苗稀釋物,為保持其良好的生物學(xué)活性,樣品冷凍保存。分發(fā)時(shí)將樣品用裝有冰袋的保溫箱運(yùn)送,由13個(gè)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室派專人在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取本市所有樣品和試劑,并在當(dāng)日分發(fā)到轄區(qū)內(nèi)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室。

1.5 結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”;陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

1.5.2 布魯菌病抗體檢測(cè)結(jié)果與參考值一致,判為結(jié)果正確,否則判為錯(cuò)誤。

1.5.3 小反芻獸疫抗體檢測(cè)陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”;陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

1.5.4 細(xì)菌分離與鑒定乙型副傷寒沙門菌的鑒定結(jié)果還可為“沙門菌”或“副傷寒沙門菌”;金黃色葡萄球菌的鑒定結(jié)果還可為“葡萄球菌”;銅綠假單胞菌的鑒定結(jié)果還可為“綠膿桿菌”;“枯草芽孢桿菌”的鑒定結(jié)果還可為“芽孢桿菌”或“枯草桿菌”,大腸埃希菌的鑒定結(jié)果還可為“埃希大腸桿菌”或“大腸桿菌”。

2 結(jié)果

2.1 總體結(jié)果根據(jù)比對(duì)結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),在13個(gè)市級(jí)、75個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室中,有6個(gè)市級(jí)和28個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確,其余7個(gè)市級(jí)和47個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室部分比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)值存在較大偏差;整體樣品正確率87.99%,實(shí)驗(yàn)室正確率78.34%,見表 2。

表1 比對(duì)項(xiàng)目的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑

表2 實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)比對(duì)結(jié)果本項(xiàng)目比對(duì)采用熒光RT-PCR方法檢測(cè)高致病性豬藍(lán)耳病疫苗稀釋物樣品5份,13個(gè)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確,樣品正確率100%,實(shí)驗(yàn)室正確率100%,說(shuō)明各市級(jí)實(shí)驗(yàn)室在熒光RT-PCR檢測(cè)技術(shù)方面較為熟練。

2.3 布魯菌病抗體檢測(cè)比對(duì)結(jié)果本項(xiàng)目比對(duì)采用試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)羊血清樣品5份。13個(gè)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室中,6個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確,另7個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果存在不同程度的偏差;75個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室中,36個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確,另39個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果存在不同程度的偏差;樣品正確率74.32%,實(shí)驗(yàn)室正確率47.73%。檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)較多偏差的是參考值為1∶50和1∶100的中間稀釋度樣品。個(gè)別縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果表述格式錯(cuò)誤,只報(bào)送了定性結(jié)果(陽(yáng)性或陰性),未報(bào)送定量結(jié)果。結(jié)果見表3。

表3 各實(shí)驗(yàn)室布魯菌病抗體檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

2.4 小反芻獸疫抗體檢測(cè)比對(duì)結(jié)果本項(xiàng)目比對(duì)采用ELISA方法檢測(cè)羊血清樣品5份。13個(gè)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確;75個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室中,73個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確,另2個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果存在不同程度的偏差;樣品正確率98.64%,實(shí)驗(yàn)室正確率97.73%。結(jié)果見表4。

表4 各實(shí)驗(yàn)室小反芻獸疫抗體檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

2.5 細(xì)菌分離與鑒定比對(duì)結(jié)果本項(xiàng)目比對(duì)采用細(xì)菌分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化鑒定等方法檢測(cè)細(xì)菌培養(yǎng)物3份。13個(gè)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確;75個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室中,63個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果全部正確,另12個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果存在不同程度的偏差;樣品正確率95.08%,實(shí)驗(yàn)室正確率86.36%。檢測(cè)值出現(xiàn)較多偏差的是參考值為枯草芽孢桿菌的樣品。個(gè)別縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室還鑒定出除了參考值中5種細(xì)菌以外的其他種屬細(xì)菌。結(jié)果見表5。

3 討論

從比對(duì)結(jié)果來(lái)看,整體樣品正確率87.99%,實(shí)驗(yàn)室正確率78.34%,說(shuō)明各級(jí)實(shí)驗(yàn)室對(duì)自身質(zhì)量管理較為重視,檢測(cè)能力與技術(shù)水平較高,結(jié)果較好。同時(shí),仍有部分實(shí)驗(yàn)室部分比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)值存在較大偏差,說(shuō)明這些實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制和檢測(cè)能力水平仍有待持續(xù)改善和提高。

表5 各實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌分離與鑒定檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

本次比對(duì)涉及4種檢測(cè)方法,分別為熒光RTPCR、ELISA、細(xì)菌分離與鑒定和試管凝集試驗(yàn)。其樣品正確率分別為：100.00%、98.64%、95.08%和74.32%;實(shí)驗(yàn)室正確率分別為：100.00%、97.73%、86.36%和47.73%。4種方法中,定性的熒光RTPCR方法的樣品正確率和實(shí)驗(yàn)室正確率最高,均為100%,其次為定性的ELISA及細(xì)菌分離與鑒定,最低的是半定量的試管凝集試驗(yàn),說(shuō)明半定量的血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目,其難度和要求遠(yuǎn)大于定性的分子生物學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)方法[2-3]。

按市級(jí)和縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室兩類進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì),市級(jí)實(shí)驗(yàn)室樣品正確率93.16%,實(shí)驗(yàn)室正確率86.54%;縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室樣品正確率86.77%,實(shí)驗(yàn)室正確率76.44%。結(jié)果表明,市級(jí)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)能力顯著高于縣級(jí)。但縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室數(shù)量多,與養(yǎng)殖場(chǎng)戶聯(lián)系緊密,其檢測(cè)能力高低對(duì)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)體系整體水平起決定性作用,是今后很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)需要著重加強(qiáng)和提高的關(guān)鍵環(huán)節(jié)所在。

按13個(gè)市進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì),各市樣品正確率和實(shí)驗(yàn)室正確率高低不一(圖1)。常州市、蘇州市所轄各個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有檢測(cè)項(xiàng)目均正確,宿遷市、南京市正確率較高,淮安市的樣品正確率和實(shí)驗(yàn)室正確率均最低,說(shuō)明各市的綜合檢測(cè)能力參差不齊。

圖1 各市樣品正確率和實(shí)驗(yàn)室正確率

分析比對(duì)結(jié)果還發(fā)現(xiàn),在出現(xiàn)較大偏差的布魯菌病抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,各市的樣品正確率與市本級(jí)的樣品正確率密切相關(guān)(圖2),二者呈現(xiàn)相似的變化趨勢(shì),市本級(jí)樣品正確率高,全市的樣品正確率也較高;市本級(jí)樣品正確率低,全市的樣品正確率也偏低,說(shuō)明市本級(jí)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力在全市整體檢測(cè)水平中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。這也提示我們應(yīng)加強(qiáng)對(duì)市本級(jí)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn),并通過市級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步向縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室延伸。

圖2 布魯菌病抗體檢測(cè)項(xiàng)目各市與市本級(jí)樣品正確率

為進(jìn)一步有效提升獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力,應(yīng)加強(qiáng)以下幾項(xiàng)工作：一是加強(qiáng)對(duì)獸醫(yī)技術(shù)人員的培訓(xùn)。注重實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理、生物安全管理以及各類常見檢測(cè)技術(shù)和檢測(cè)結(jié)果分析與利用等方面的培訓(xùn)工作,保證人員技術(shù)和能力;二是加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備和硬件投入。只有把實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和硬件條件控制在滿足試驗(yàn)條件的前提下,才能得出準(zhǔn)確科學(xué)的檢測(cè)結(jié)果;三是加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理。仍有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、樣品、環(huán)境、方法、試劑、報(bào)告、人員培訓(xùn)與考核等嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)管理不到位、不規(guī)范,需要加強(qiáng)培訓(xùn)和指導(dǎo),督促其改善和提高。