崔悅 齊遵利

DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2018.12.002

摘要：以凡納濱對蝦為研究對象，通過在養(yǎng)殖池中施用益生菌制劑，在露天土池中的使用量分別為0、0.3 g/m3、0.45 g/m3 、0.6 g/m3水體，研究了在凡納濱對蝦養(yǎng)殖水體中使用益生菌制劑對氨氮（NH+4-N）、亞硝酸鹽氮（NO-2-N）、化學(xué)需氧量（COD）等水質(zhì)指標(biāo)的影響和對凡納濱對蝦成活率以及飼料系數(shù)的影響，目的是探討益生菌制劑在凡納濱對蝦養(yǎng)殖池塘中的適宜使用量。

關(guān)鍵詞：露天土池;益生菌制劑;凡納濱對蝦;水質(zhì);成活率

凡納濱對蝦（Penaeus vannamei）俗稱南美白對蝦（Litopenaeus vannamei，Boone），是我國于80年代引進(jìn)的一個對蝦品種，具有生長效率快、鹽度適應(yīng)范圍廣、容易集約飼養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)，位居世界上養(yǎng)殖蝦產(chǎn)量的前三位[1]。近年來，我國凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展，養(yǎng)殖模式多樣性，養(yǎng)殖密度迅速提高，但高密度養(yǎng)殖也使養(yǎng)殖水體污染情況日趨嚴(yán)重。為此，以凡納濱對蝦為研究對象，通過在養(yǎng)殖土池中施用益生菌制劑，在露天土池中的使用量分別為0、0.3、0.45、0.6 g/m3水體（含活菌數(shù)1.53×1010 cfu/g以上），研究了在凡納濱對蝦養(yǎng)殖水體中使用益生菌制劑對氨氮（NH+4-N）、亞硝酸鹽氮（NO-2-N）、化學(xué)需氧量（COD）等水質(zhì)指標(biāo)的影響和對凡納濱對蝦成活率以及飼料系數(shù)的影響，目的是探討益生菌制劑在凡納濱對蝦養(yǎng)殖池塘中的適宜使用量。

1研究目標(biāo)及內(nèi)容

通過人為將復(fù)合益生菌制劑投入到養(yǎng)殖池水中，增加池水中的有益微生物的數(shù)量，人為制造有益微生物優(yōu)勢種群，強(qiáng)化微生物的代謝作用，增加水體自身凈化能力，達(dá)到降解池水中氨氮、亞硝態(tài)氮、COD等有害物質(zhì)調(diào)控水質(zhì)的目的，同時以池水中的有益菌抑制有害菌，達(dá)到減少養(yǎng)殖動物病害發(fā)生的目的。

研究內(nèi)容：通過在養(yǎng)殖水體中，定期施用一定量的復(fù)合益生菌制劑后，測定養(yǎng)殖水體的水質(zhì)指標(biāo)：氨氮（NH+4-N）、硝酸鹽氮（NO-3-N）、亞硝酸鹽氮（NO-2-N）、無機(jī)磷（PO3-4-P）、溶解氧（DO）、COD、pH值等濃度變化，養(yǎng)殖對象的生長指標(biāo)：體長增長、成活率、飼料系數(shù)等，并與空白對照組進(jìn)行比較，以了解復(fù)合益生菌制劑對凡納濱對蝦養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響。

2材料與方法

2.1露天養(yǎng)殖池塘

試驗(yàn)在灤南縣某養(yǎng)殖場進(jìn)行，露天海水養(yǎng)殖池塘8個，每個池塘面積為33 300 m2，池深2.0 m，平均水深1.2 m。

2.2主要儀器設(shè)備、試劑

UV-5200型紫外可見分光光度計(jì)、YXQ-LS-50S11高壓滅菌器、FA2104N電子分析天平、SYNERGY超純水系統(tǒng)、Starter2100pH計(jì)、水下水溫計(jì)、鹽度計(jì)、DHG-9240A電熱恒溫干燥箱等。

2.3對蝦放養(yǎng)規(guī)格、數(shù)量

每個池塘放養(yǎng)全長0.8～1.0 cm的凡納濱對蝦苗125萬尾。蝦苗購買時經(jīng)過POCKIT核酸分析儀進(jìn)行白斑病毒（WSSV）、傳染性皮下及造血組織壞死病毒（IHHNV）、傳染性肌肉壞死癥病毒（IMNV）等特定病毒的檢測，確保購進(jìn)無特定病毒蝦苗。

2.4益生菌制劑的使用

試驗(yàn)用的益生菌制劑由江蘇某生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，由枯草芽孢桿菌、硝化細(xì)菌、反硝化細(xì)菌、光合細(xì)菌等多種活菌組成，活菌總數(shù)>1.53×1010 cfu/g。設(shè)試驗(yàn)組3組，編號為A1、A2、A3，1個對照池組，編號為A0，每組設(shè)3個平行重復(fù)。放養(yǎng)對蝦苗后每隔13 d左右潑一次益生菌制劑，每次潑灑量：A1、A2、A3組池潑灑量分別為12、18、24 kg（潑灑濃度為0.3、0.45 、0.6 g/m3水體），初次潑灑益生菌制劑用量加倍，使用前2 d進(jìn)行活化擴(kuò)增，活化時1 kg益生菌制劑加紅糖0.5 kg，溶于20 m3水中，全部溶解，放在透光大容器內(nèi)或透明塑料袋中，在自然陽光下活化，活化時間為2 d，然后均勻潑入池塘中，期間每隔2～3 h對容器或塑料袋中的水?dāng)噭右淮?，有條件的可進(jìn)行充氣。對照組A0組不潑灑益生菌制劑，其余條件對照組和試驗(yàn)組完全相同。

2.5飼養(yǎng)管理

放苗前1個多月向池塘中進(jìn)水，進(jìn)水深度1.5 m。放苗前一周使用漂白粉對試驗(yàn)池和對照池池水進(jìn)行徹底消毒。

期間每天投喂4次，根據(jù)對蝦個體大小、數(shù)量、水質(zhì)、攝食和生長情況靈活確定投飼量，以投飼后70 min內(nèi)對蝦大部分吃飽為宜。隨著對蝦個體的增大，飼料粒徑做適當(dāng)調(diào)整。養(yǎng)殖前期每周換水7～8 cm;養(yǎng)殖后期適當(dāng)加大換水量，每周換水一次，每次換水30 cm。試驗(yàn)組池塘和對照組池塘飼養(yǎng)管理方法完全一致，投飼量也相同，整個試驗(yàn)過程不用任何藥物及消毒劑。結(jié)合投飼每天巡視池塘，便于及時發(fā)現(xiàn)問題，每天記錄好各試驗(yàn)蝦池的日常管理情況，記錄內(nèi)容包括潑灑益生菌時間和數(shù)量、天氣、水溫、鹽度、投飼量、換水量等。在蝦池邊設(shè)置3～4個網(wǎng)筐，用于觀察凡納濱對蝦攝食和生長情況。自6月12日放蝦苗至9月28日收蝦共飼養(yǎng)107 d。

2.6采集水樣

每個池塘選取4個采樣點(diǎn)，在每個采樣點(diǎn)分別采取上層和下層的水樣混勻后測定。試驗(yàn)從6月11日開始，6月12日放苗，至9月28日收蝦結(jié)束，每隔13 d左右采集一次水樣，水樣采集時間在兩次潑灑益生菌制劑之間，每次于上午9：00-10：00固定時間進(jìn)行采樣。在放養(yǎng)蝦苗和開始潑灑益生菌制劑之前于6月11日采集一次水樣作為起始水樣樣品，隨后分別于6月24日、7月7日、7月20日、8月2日、8月15日、8月28日、9月10日、9月23日在試驗(yàn)組池和對照組池各采水樣一次，共采水樣9次，然后進(jìn)行水質(zhì)分析。

2.7水質(zhì)分析方法

池水水質(zhì)指標(biāo)均按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB17378.4-2007海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分（海水分析）規(guī)定的方法測定，其中：

3結(jié)果與分析

3.1對水質(zhì)的影響

3.1.1對氨氮（NH+4-N）的影響露天池塘中氨氮（NH+4-N）含量的變化情況見圖1。

由圖1可見，整個養(yǎng)殖試驗(yàn)期A1、A2、A3各試驗(yàn)組池水中的氨氮含量均低于對照組，以A3組的氨氨含量最低，變化幅度最小。對照組A0和試驗(yàn)組A1池水中氨氮含量波動的幅度較大，而試驗(yàn)組A2和試驗(yàn)組A3池水中氨氮的波動幅度相對較小，說明潑灑一定濃度的益生菌制劑能使凡納濱對蝦養(yǎng)殖池水中的氨氮含量保持在相對比較穩(wěn)定的水平。

3.1.2對亞硝酸鹽氮（NO-2-N）的影響露天養(yǎng)殖池塘中亞硝酸鹽氮含量的變化情況見圖2。

由圖2可見，整個養(yǎng)殖試驗(yàn)期A1、A2、A3各試驗(yàn)組池水中的亞硝酸鹽氮含量均低于對照組，以A3組的亞硝酸鹽氮含量最低，自8月2日開始A3組的亞硝酸鹽氮含量顯著低于對照組A0池中亞硝酸鹽氮含量，且較其他三組變化幅度最小，說明在養(yǎng)蝦池塘中潑灑一定量的益生菌制劑降低了池塘中的亞硝酸鹽氮含量，因試驗(yàn)組A1和試驗(yàn)組A2池中加入量較小，降低效果不明顯。

3.1.3對硝酸鹽氮（NO-3-N）的影響露天池塘中硝酸鹽氮含量的變化情況見圖3。

由圖3可見，各試驗(yàn)組蝦池中硝酸鹽氮呈先稍上升后下降的趨勢，試驗(yàn)組A2、A3池水中硝酸鹽氮含量變化幅度不大，而試驗(yàn)組A1和對照組A0池水中硝酸鹽氮含量波動較大。

3.1.4對溶解氧（DO）的影響露天池塘中溶解氧含量的變化情況見圖4。

由圖4可見，整個試驗(yàn)過程試驗(yàn)組A2和試驗(yàn)組A3池中的溶解氧基本保持穩(wěn)定，溶解氧維持在5.36 ～6.42 mg/L之間。對照組A0池的溶解氧含量試驗(yàn)前期較穩(wěn)定，后期隨著對蝦投飼量的增大溶解氧逐漸降低。各試驗(yàn)組池水中溶解氧含量均略高于對照組池水中溶解氧含量，但與對照組池水中溶解氧的含量差異均不大。

3.1.5對化學(xué)需氧量（COD）的影響露天池塘中化學(xué)需氧量（COD）的變化情況見圖5。

由圖5可見，在整體養(yǎng)殖試驗(yàn)過程中，各試驗(yàn)組和對照組池水中的COD均逐漸升高，對照組A0升高速度比較快，最高時達(dá)到9.27。各試驗(yàn)組池水的COD均低于對照組，而A2、A3組池的COD開始有所降低，后期逐步升高。由于受強(qiáng)降雨影響，在7月20日各實(shí)驗(yàn)組和對照組的COD均略有下降。

3.1.6對無機(jī)磷（PO3-4-P）的影響露天池塘池水中無機(jī)磷（PO3-4-P）的變化情況見圖6。

從圖6中可以看出：整個養(yǎng)殖試驗(yàn)過程中，前期各組間無機(jī)磷（PO3-4-P）含量在表現(xiàn)比較穩(wěn)定，均在緩慢上升，在7月20日由于降雨原因略微有些下降，之后進(jìn)入快速上升期，至8月28日開始由于每天加大了換水量無機(jī)磷（PO3-4-P）含量又有所下降。

3.1.7對pH值的影響露天池塘中池水的pH的變化情況見圖7。

由圖7可見，在整個養(yǎng)殖試驗(yàn)過程當(dāng)中，各試驗(yàn)組A1、A2、A3池水pH值變化波動較小，保持相對穩(wěn)定，而對照組A0池水的pH值變化波動幅度較大。在養(yǎng)殖試驗(yàn)中后期，對照組A0 池水的pH值明顯低于A2和A3組池。

3.2對對蝦生長的影響

露天池塘中凡納濱對蝦不同處理組的生長指標(biāo)見表1。

從表1中可以看出，在露天池塘條件下，各試驗(yàn)組凡納濱對蝦成活率、規(guī)格和產(chǎn)量都比對照組有所提高，各試驗(yàn)組的飼料系數(shù)均低于對照組。4結(jié)果討論

露天土池養(yǎng)殖是目前凡納濱對蝦養(yǎng)殖的主要方式，其特點(diǎn)為：露天土池面積大、對蝦放養(yǎng)密度低、受外界環(huán)境的影響較大、養(yǎng)殖管理要求技術(shù)含量低、產(chǎn)量高。本試驗(yàn)在凡納濱對蝦養(yǎng)殖過程中使用益生菌，研究其使用效果和適宜的使用量，為凡納濱對蝦的健康養(yǎng)殖提供理論和實(shí)踐依據(jù)。

4.1對水質(zhì)的影響

4.1.1對氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮的影響本試驗(yàn)中露天池塘中的氨氮（NH+4-N）、亞硝酸鹽氮（NO-2-N）含量均隨著養(yǎng)殖時間的延長而增高。整個養(yǎng)殖試驗(yàn)期間池水中氨氮含量的變化較大，養(yǎng)殖試驗(yàn)后期氨氮含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于前期氨氮含量，主要是由于后期對蝦攝食量大，殘餌、糞便、有機(jī)碎屑等增多造成的，而添加一定量益生菌的會降低池水中是氨氮含量，維持氨氮一個相對穩(wěn)定水平。

本養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)中，露天池塘中潑灑益生菌制劑后試驗(yàn)組A1、A2和A3組池均比對照組A0池水中亞硝酸鹽氮含量有所降低，自8月2日開始A3組的亞硝酸鹽氮含量顯著低于對照組A0亞硝酸鹽氮含量（P≤0.05）。

本養(yǎng)殖試驗(yàn)期間露天池塘硝酸鹽氮（NO-3-N）的變動范圍0.207～0.433 mg/L。露天池塘水體中的硝酸鹽氮（NO-3-N）含量呈先上升后逐漸下降趨勢，可能是因?yàn)樵缙诟∮沃参锕夂献饔迷鰪?qiáng)產(chǎn)生大量氧氣，中后期益生菌中的反硝化細(xì)菌在硝酸還原酶、亞硝酸還原酶、一氧化二氮和一氧化氮還原酶還原酶催化作用下，將硝酸鹽最終還原成或N2O或N2的原因。

4.1.2對溶解氧（DO）的影響?zhàn)B殖池塘池水中溶解氧的主要來源是池水中浮游植物的光合作用產(chǎn)的氧，其次是風(fēng)力，是自然增氧，受天氣及池水中浮游生物影響較大，自然池水中的溶解氧變動范圍為4.43～6.42 mg/L。

4.1.3對化學(xué)需氧量（COD）的影響本試驗(yàn)中露天池塘中COD隨著養(yǎng)殖時間的延長而呈上升趨勢，但從結(jié)果看，除試驗(yàn)組A3池和對照組A0池中COD呈顯著差異外，其他各組間均無顯著差異，這與沈南南，李純厚，賈曉平等的研究相吻合[2]。

通過排污、換水等措施可以在一定程度上降低池水在有機(jī)物質(zhì)的含量，降低COD值，在露天池塘中每天的換水量非常少，而每天還有大量的新的殘餌、糞便產(chǎn)生，COD值很難降低。本試驗(yàn)中在池水中使用一定量的益生菌可以降低COD值。

4.1.4對無機(jī)磷（PO3-4-P）的影響在整個養(yǎng)殖試驗(yàn)過程中，露天池塘池水中無機(jī)磷（PO3-4-P）的含量保持在較低水平，一是對蝦投飼量低，殘餌、糞便中釋放的磷不多，二是池水中大部分的磷都被池塘底泥吸附，儲存在底泥中。試驗(yàn)過程中，露天池塘中無機(jī)磷（PO3-4-P）的含量除降雨和換水時間外，隨著養(yǎng)殖試驗(yàn)的進(jìn)行始終保持上升的趨勢，原因是各種水處理方法均不能很好地降低池水中無機(jī)磷（PO3-4-P）含量的積累[3]，向池塘中潑灑益生菌對降低池水中的無機(jī)磷（PO3-4-P）含量效果也不明顯。

4.1.5對pH值的影響隨著試驗(yàn)時間的延長，對蝦養(yǎng)殖池中生物總量不斷地增多，殘餌、糞便、生物殘骸等數(shù)量也不斷地增多，池中大量有機(jī)物質(zhì)的分解消耗大量的溶解氧，導(dǎo)致池水pH下降。

露天池塘中影響pH值變化的主要因素是浮游植物的光合作用，在養(yǎng)殖試驗(yàn)的中后期，凡納濱對蝦、微生物及其他生物的呼吸作用以及池中有機(jī)物質(zhì)的分解產(chǎn)生的CO2也會影響到池水的pH值，池水的pH值變動幅度大，一般pH值的變動范圍為7.86～8.56。

4.2對對蝦生長的影響

4.2.1對成活率的影響本試驗(yàn)研究表明，整個養(yǎng)殖試驗(yàn)過程中凡納濱對蝦成活率各試驗(yàn)組都高于對照組，主要是因?yàn)槭褂靡嫔蟪靥了|(zhì)條件得到了改善，有利于凡納濱對蝦成活率的提高。

4.2.2對飼料系數(shù)的影響本試驗(yàn)研究表明，整個養(yǎng)殖試驗(yàn)過程中凡納濱對蝦飼料系數(shù)各試驗(yàn)組都低于對照組，主要是因?yàn)槭褂靡嫔蟪靥了|(zhì)條件得到了改善，有利于凡納濱對蝦攝食、消化，降低飼料系數(shù)。

4.2.3對養(yǎng)殖生產(chǎn)的指導(dǎo)整個試驗(yàn)期間，養(yǎng)殖池水中的氨氮、亞硝酸鹽、COD呈逐漸增高的趨勢，前期氨氮、亞硝酸鹽、COD含量比較低，是因?yàn)槲r苗個體小，攝食量少，殘餌和排泄的糞便少，池水中的有機(jī)物質(zhì)也就少，水質(zhì)污染較輕。試驗(yàn)中、后期氨氮、亞硝酸鹽、COD含量較前期明顯增高，是因?yàn)槲r苗個體逐漸增大，攝食量明顯增大，殘餌和排泄的糞便明顯增多，池水中的有機(jī)物質(zhì)也隨之增多，水質(zhì)污染越來越重，尤其后期氨氮、亞硝酸鹽含量達(dá)到高峰。

通過在養(yǎng)殖池中使用益生菌制劑，不但大大降低了氨氮、亞硝酸鹽、COD含量，提高了池水的溶解氧、硝酸鹽氮含量，穩(wěn)定了池水pH，改善了養(yǎng)殖池水的水質(zhì)。另外，通過生物之間的競爭，池水中的益生菌數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于弧菌等有害菌數(shù)量，抑制了有害菌的生長和繁殖，給對蝦養(yǎng)殖提供了一個良好環(huán)境，減少了蝦病發(fā)生，大大提高了對蝦的成活率，從而提高了養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益，與此同時，在保證養(yǎng)殖池水良好的情況下，對蝦健康生長，大大減少了池塘換水量，節(jié)約了養(yǎng)殖用水，又降低了對蝦養(yǎng)殖對環(huán)境的污染。

益生菌制劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)起步較晚， 但是也呈現(xiàn)了一定的規(guī)模。目前，我國市場上的益生菌制劑產(chǎn)品很多，其主要成分都是益生菌群[3]。其中，復(fù)合微生態(tài)制劑具有天然、無毒、無副作用、無污染、無殘留、安全可靠等優(yōu)點(diǎn)。正因?yàn)橐嫔苿┯兄T多優(yōu)點(diǎn)，近年來國內(nèi)外的很多研究人員嘗試著各種方式應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中。黃永春[4]利用復(fù)合微生態(tài)制劑凈化了對蝦養(yǎng)殖水環(huán)境。陳靜等[5]、杭小英等[6]研究表明枯草芽孢桿菌能顯著降低水體中的氨氮和亞硝態(tài)氮。Ziaei 等[7]研究表明，利用芽孢桿菌能促進(jìn)對蝦的生長，提高了成活率，提高了消化道內(nèi)相關(guān)酶的活性。陳秋紅等[8]、李曉英等[9]研究表明利用復(fù)合微生態(tài)制劑能降低養(yǎng)殖池中的氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫含量，提高了溶解氧含量。

在本試驗(yàn)條件下，在露天土池中添加菌制劑可以降低池水中氨氮（NH+4-N）、亞硝酸鹽氮（NO-2-N）、化學(xué)需氧量（COD），提高池水中的（NO-3-N）、溶解氧（DO），穩(wěn)定pH值，提高凡納濱對蝦的成活率，降低飼料系數(shù)。綜合各項(xiàng)指標(biāo)并從節(jié)約養(yǎng)殖成本的角度來看，建議在露天池塘中添加由枯草芽孢桿菌、光合細(xì)菌等配制成的復(fù)合益生菌制劑最適添加量為0.45 g/m3水體（含活菌數(shù)1.53×109 cfu/g以上）。

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（收稿日期：2018-11-23）