吳霞

(皖北煤電集團(tuán)總醫(yī)院，安徽宿州234000)

流行病學(xué)[1,2]顯示，目前臨床上宮頸癌發(fā)病率可達(dá)223～344/10萬人，在合并HPV感染的高危因素人群中，宮頸癌發(fā)病率更高?；虮磉_(dá)調(diào)控水平的改變，可通過影響癌細(xì)胞的凋亡、增殖或者分化等病理過程，促進(jìn)癌細(xì)胞對于基底膜組織的突破，增加癌細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。染色體空間重組因子(Rsf-1/HBXAP)屬于染色體及轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因結(jié)構(gòu)修飾因子，其在轉(zhuǎn)基因磷酸化調(diào)控、癌細(xì)胞增殖基因等方面均具有一定的作用[3, 4]。研究已經(jīng)證實(shí)，Rsf-1/HBXAP參與了卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤的病情進(jìn)展，認(rèn)為其高表達(dá)是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和原位浸潤的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但至今缺乏對Rsf-1/HBXAP表達(dá)與宮頸癌關(guān)系的研究。2015年12月～2017年1月，我們觀察了Rsf-1/HBXAP蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)變化，并分析其與患者臨床病理特征間的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集皖北煤電集團(tuán)總院手術(shù)切除的宮頸癌組織100例(癌癥組)、正常宮頸組織30例(正常組)、宮頸上皮瘤變(CIN)組織50例(CIN組)。癌癥組患者年齡(51.8±9.9)歲，腫瘤組織高分化22例、中分化30例、低分化48例，病理類型鱗癌83例、腺癌17例，臨床分期Ⅰ期22例、Ⅱ期28例、Ⅲ期38例、Ⅳ期12例，術(shù)前未接受放化療及免疫治療。正常組來自婦科宮頸檢查婦女(檢測結(jié)果為正常宮頸組織)，年齡(50.0±11.2)歲。CIN組患者年齡(49.7±12.0)歲，CIN分級Ⅰ級22例、Ⅱ級25例、Ⅲ級3例。三組年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 宮頸組織Rsf-1/HBXAP蛋白檢測方法 采用免疫組化法。取各組石蠟切片脫蠟至水，用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌；加入牛奶液體封閉抗體，封閉時(shí)間為5 min；加入Rsf-1/HBXAP抗體(鼠源，Abcum公司)， 37 ℃ 孵育 2 h；用PBS洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(Abcum公司)，37 ℃ 孵育 30 min；加入PBS進(jìn)行洗滌，用顯色劑(南京凱基生物制劑公司)顯色，封片，鏡下觀察。免疫組化結(jié)果判定：Rsf-1/HBXAP蛋白陽性著色于細(xì)胞核的核仁，呈黃色、棕黃色、褐色。染色強(qiáng)度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色或黑色；陽性細(xì)胞比例：≤10%為1分，>10%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分；兩項(xiàng)評分乘積<3為陰性，≥3為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組Rsf-1/HBXAP蛋白陽性表達(dá)率比較 癌癥組Rsf-1/HBXAP蛋白陽性表達(dá)率67.00%(67/100)高于CIN組的34.00%(17/50)、正常組的6.67%(2/30),P均<0.05；CIN組Rsf-1/HBXAP蛋白陽性表達(dá)率高于正常組，P<0.05。

2.2 Rsf-1/HBXAP蛋白表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 低分化、臨床分期Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、發(fā)生脈管浸潤、肌層浸潤深度>1/2的宮頸癌組織Rsf-1/HBXAP蛋白陽性表達(dá)率均高于高中分化、臨床分期Ⅰ+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未發(fā)生脈管浸潤、肌層浸潤深度≤1/2的宮頸癌組織(P均<0.05)，Rsf-1/HBXAP蛋白陽性表達(dá)率在不同年齡、病理學(xué)類型、腫瘤病灶直徑的宮頸癌組織中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 Rsf-1/HBXAP蛋白表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

多次人工流產(chǎn)、宮頸HPV病毒感染等，均導(dǎo)致了現(xiàn)階段臨床上宮頸癌高發(fā)和年輕化趨勢。長期臨床隨訪研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的5年生存率較低，治療后的遠(yuǎn)期生存時(shí)間不足43個月[5]。手術(shù)治療或者放化療等治療方式，雖然可以短期內(nèi)改善患者癥狀，但治療后總體有效率仍然較低，存在一定局限性。因此，探討宮頸癌發(fā)病過程中不同的生物學(xué)機(jī)制，可為宮頸癌的早期診斷或靶向治療提供理論基礎(chǔ)。

Rsf-1/HBXAP蛋白可以影響染色體及遺傳基因的表觀位點(diǎn)，調(diào)節(jié)細(xì)胞核內(nèi)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性[6, 7]。Rsf-1/HBXAP蛋白的四級結(jié)構(gòu)上包含多個糖蛋白結(jié)構(gòu)，可在結(jié)合配體的同時(shí)，促進(jìn)癌細(xì)胞DNA的持續(xù)性擴(kuò)增，導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞對于臨床正常宮旁組織或者盆腔組織的浸潤，促進(jìn)臨床分期的進(jìn)展[6,7]。Rsf-1/HBXAP作為重要的蛋白修飾調(diào)控因子，其能夠調(diào)控p53、p16等蛋白的空間結(jié)構(gòu)，修飾宮頸癌相關(guān)信號通路蛋白的羧基末端磷酸基團(tuán)，從而提高宮頸上皮細(xì)胞的侵襲或者轉(zhuǎn)移能力，促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)的多種腫瘤信號相關(guān)蛋白通路的激活，加劇宮頸癌的病情進(jìn)展[8, 9]。在臨床上已有的少部分臨床研究結(jié)果證實(shí)，Rsf-1/HBXAP表達(dá)與惡性腫瘤患者的臨床預(yù)后或者病死率等生存指標(biāo)具有一定關(guān)系，但缺乏對于其表達(dá)水平與患者臨床病理特征關(guān)系的研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，Rsf-1/HBXAP陽性表達(dá)在宮頸癌組織中明顯上升，高于CIN組及正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示Rsf-1/HBXAP可能參與了宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。Rsf-1/HBXAP高表達(dá)可能在以下幾個方面影響宮頸病變的臨床結(jié)局[10, 11]：①Rsf-1/HBXAP高表達(dá)促進(jìn)了癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移；②Rsf-1/HBXAP高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤相關(guān)信號蛋白的表達(dá)，影響癌細(xì)胞核基因擴(kuò)增相關(guān)調(diào)控因子的異常表達(dá)，增加癌細(xì)胞DNA核的持續(xù)性增殖風(fēng)險(xiǎn)。有研究[12, 13]在分析宮頸浸潤癌患者的臨床結(jié)局過程中發(fā)現(xiàn)，Rsf-1/HBXAP表達(dá)水平越高，患者宮頸癌的臨床分期越晚，癌細(xì)胞的侵襲或者對于臨近正常組織的浸潤程度越深。在探討Rsf-1/HBXAP表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征關(guān)系的過程中發(fā)現(xiàn)，癌細(xì)胞的分化程度越低、臨床分期越晚，Rsf-1/HBXAP表達(dá)水平越高，這可以從下列幾個方面進(jìn)行理解[14, 15]：①Rsf-1/HBXAP高表達(dá)促進(jìn)癌細(xì)胞分化調(diào)控誘導(dǎo)因子α的低表達(dá)，導(dǎo)致癌細(xì)胞分化障礙，低分化表現(xiàn)較為明顯；②Rsf-1/HBXAP表達(dá)水平的改變，影響到了癌組織對于宮頸旁組織的浸潤深度。在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、發(fā)生脈管浸潤的患者中，相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)同樣明顯。這主要與染色質(zhì)重組調(diào)控因子對于淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞因子的激活，以及促進(jìn)癌細(xì)胞對于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附過程有關(guān)。但本研究未發(fā)現(xiàn)Rsf-1/HBXAP表達(dá)與宮頸癌患者病理類型的關(guān)系，提示Rsf-1/HBXAP表達(dá)可能并不影響腫瘤細(xì)胞的來源。

綜上所述，Rsf-1/HBXAP在宮頸癌組織中表達(dá)上調(diào)，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。今后我們將增加對于Rsf-1/HBXAP表達(dá)與宮頸癌患者生存預(yù)后的研究，以深入了解其作用，為宮頸癌的診斷與靶向治療提供依據(jù)。

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