佟馨 董華 劉濤 張波

摘要 本文建立了氣相色譜法測(cè)定食用調(diào)和油中功能性成分角鯊烯的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)氫氧化鉀-乙醇溶液皂化，再經(jīng)正己烷萃取凈化、氣相色譜法分析測(cè)定、內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，測(cè)得方法檢出限為0.95 mg/kg；在40、80、100 mg/kg的加標(biāo)水平下，角鯊烯在食用調(diào)和油中的平均回收率為96.29%～97.33%，變異系數(shù)為1.18%～1.32%，方法分析時(shí)間短，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可用于食用調(diào)和油中功能性成分角鯊烯含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞 食用調(diào)和油；角鯊烯；含量測(cè)定；皂化；萃取；氣相色譜法

中圖分類號(hào) TS277 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）03-0249-02

角鯊烯是一種脂質(zhì)不皂化物，是最初從角鯊魚肝臟中發(fā)現(xiàn)的多不飽和烯烴。其是由6個(gè)六戊二烯組成的二萜，也是一種高度不飽和的直鏈三萜類非極性化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯。角鯊烯的生理功能顯著，具有強(qiáng)抗氧化作用[1-4]。角鯊烯具有很強(qiáng)的輸氧能力，可增強(qiáng)細(xì)胞的活力及抗病力，在醫(yī)學(xué)上對(duì)心臟病、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、肝炎及胃炎等均有療效[5]。此外，角鯊烯對(duì)防止癌細(xì)胞擴(kuò)散、促進(jìn)癌細(xì)胞失活和加速衰老有重要作用[6]。角鯊烯廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，在動(dòng)物中尤以深海魚類（特別是鯊魚）肝臟中含量最為豐富，含量為15%～69%[7-8]，植物中以莧菜籽油含量最多[9]。

本研究采用氫氧化鉀-乙醇溶液皂化、正己烷進(jìn)行萃取洗凈、氣相色譜（GC-FID）法進(jìn)行檢測(cè)，該方法重現(xiàn)性好，回收率高，可以快速對(duì)食用調(diào)和油進(jìn)行檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 原料與試劑。食用調(diào)和油由中糧東海糧油生產(chǎn)，將非轉(zhuǎn)基因豆油、非轉(zhuǎn)基因菜籽油、非轉(zhuǎn)基因玉米油、花生油、葵花籽油、芝麻油、亞麻籽油按照一定比例調(diào)配而成；角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%）；角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%）。

1.1.2 儀器設(shè)備。Agilent 7890A氣相色譜（GC-FID）；Labor-ota 4001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；QYN 100-1氮吹儀。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。①角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液。準(zhǔn)確稱取25 mg（精確至0.000 1 g）角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)品于25 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，搖勻，配成1 mg/mL角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液。②角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確稱取50 mg（精確至0.000 1 g）角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，搖勻，配成1 mg/mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。③含30 μg/mL角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)的角鯊烯工作液。將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用正己烷稀釋至濃度分別為2.5、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在工作液中加入適量的角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液，保證每個(gè)工作液中角鯊?fù)闈舛葹?0 μg/mL。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理。①稱量。準(zhǔn)確吸取300 μL角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液于250 mL圓底燒瓶中，在氮吹儀上吹干后，準(zhǔn)確稱取0.2～2.0 g食用調(diào)和油樣品（精確至0.000 1 g）于此燒瓶中。②皂化。于圓底燒瓶中加入50 mL氫氧化鉀-乙醇溶液后，將燒瓶與回流冷凝管連接好，在80 ℃恒溫水浴鍋中皂化回流50 min，停止加熱，從回流管頂部加入50 mL水，取出燒瓶搖勻，冷卻至室溫。③提取。將燒瓶中的皂化液轉(zhuǎn)移至250 mL分液漏斗中，用50 mL正己烷分3次洗滌燒瓶，并將洗滌液倒入分液漏斗中，用力搖動(dòng)分液漏斗2 min，倒轉(zhuǎn)分液漏斗，小心打開旋塞，間歇地釋放壓力，靜置分層，將下層皂化液轉(zhuǎn)移至另一個(gè)250 mL分液漏斗中，再用相同的方法分別用30、20 mL正己烷對(duì)皂化液提取2次，將3次正己烷提取液置于同一分液漏斗中。④洗滌。用25 mL乙醇溶液洗滌正己烷提取液3～4次，每次棄去下層的乙醇水溶液，用pH試紙檢驗(yàn)直至下層流出液呈中性。⑤濃縮。將洗至中性的正己烷提取液經(jīng)過鋪有約5 g無水硫酸鈉的濾紙濾入與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀配套的球形蒸發(fā)瓶中，再用約20 mL的正己烷沖洗3次分液漏斗及無水硫酸鈉，并入蒸發(fā)瓶中，在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑，待瓶中剩下約2 mL正己烷時(shí)，取下蒸發(fā)瓶，立即放入氮吹儀中吹干，最后用正己烷溶解并定容至10 mL，過0.45 μm有機(jī)濾膜，待測(cè)。

1.2.2 色譜條件。進(jìn)樣量為1 μL，峰面積外標(biāo)法定量。載氣為高純氮?dú)猓兌?9.999%；恒壓為110.32 kPa；分流比為1∶10；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；柱溫采用程序升溫方式，以15 ℃/min的速率從160 ℃升溫到220 ℃，保持2 min，然后以5 ℃/min的速率升溫到280 ℃，保持20 min，最后以5 ℃/min的速率升溫到300 ℃，保持2 min。FID檢測(cè)器：溫度300 ℃，氫氣流速40 mL/min，空氣流速450 mL/min，尾吹氣流速30 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及限量

用1 mg/mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，按上述色譜條件，進(jìn)行定量。得出線性方程Y=18.956X-1.583，相關(guān)系數(shù)R=0.999 8，測(cè)得方法檢出限為0.95 mg/kg。

2.2 方法精密度及回收率

由表1可知，檢測(cè)結(jié)果平均值為132.23 mg/kg，變異系數(shù)為1.42%；由表2可知，在40、80、100 mg/kg的加標(biāo)水平下，角鯊烯在食用調(diào)和油中的平均回收率分別為96.88%、96.29%、97.33%，變異系數(shù)分別為1.32%、1.29%、1.18%。

3 結(jié)論與討論

本文采用將食用調(diào)和油樣品進(jìn)行皂化，經(jīng)正己烷萃取凈化，用氣相色譜法進(jìn)行角鯊烯含量的定量檢測(cè)。線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，測(cè)得方法檢出限為0.95 mg/kg。在40、80、100 mg/kg的加標(biāo)水平下，角鯊烯在食用調(diào)和油中的平均回收率為96.29%～97.33%，變異系數(shù)為1.18%～1.32%，檢測(cè)過程時(shí)間短，重現(xiàn)性好，定量準(zhǔn)確，可實(shí)現(xiàn)對(duì)食用調(diào)和油樣品中角鯊烯的快速檢測(cè)。

由于調(diào)和油樣品在前處理萃取過程中易發(fā)生乳化現(xiàn)象，導(dǎo)致液液分離效果不佳，可加少許無水乙醇進(jìn)行消除。各類調(diào)和油脂產(chǎn)品中角鯊烯含量不等，在樣品前處理時(shí)可視具體樣品按方法調(diào)整稱樣量[10]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 趙振東，孫震.化學(xué)及生物學(xué)方法合成角鯊烯研究現(xiàn)狀[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2003，23（4）：95-98.

[2] BREENE W M.Food uses of grain amaranth[J].Cereal Foods World，1991，36（5）：426-429.

[3] BARNETT W A，GEWEKE J，SHELL K.Economic complexity：chaos，sunspots，bubbles，and nonlinearity.Proceedings of the Fourth International Symposium in Economic Theory and Econometrics[M].UK：Cambridge University Press，1989.

[4] 趙炎成.“八寶”合一：角鯊烯的食療保健功能[J].東方食療與保健，2006（11）：6-7.

[5] 趙振東.松節(jié)油合成生物活性角鯊烯反應(yīng)路線的研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2005（增刊1）：20-24.

[6] RAO C V，NEWMARK H L，REDDY B S.Chemopreventive effect of squ-alene on colon cancer[J].Carcinogenesis，1998，19（2）：287.

[7] DEPREZ P P，VOLKMAN J K ，DAVENPORT S R.Squalene content and neutral lipid composition of livers from deepsea sharks caught in Tasma-nian waters[J].Aust J Mar Freshw ater Res，1990，41（3）：375-387.

[8] BAKES M J，NICOLS P D.Lipid，fatty acid and squalene composition of l-iver oil from six species of deep-sea sharks collected in southern au-stralian waters[J].Comparative Biochemistry & Physiology B Comparative Bioch-emistry，1995，110（1）：267-275.

[9] 孫震，趙振東，李冬梅，等.金合歡基溴合成角鯊烯反應(yīng)及異構(gòu)體形成機(jī)理的研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2005（2）：1-5.

[10] 國家糧食局.糧油檢驗(yàn) 植物油中角鯊烯的測(cè)定 氣相色譜法：LS/T 6120-2017[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.