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材料和方法的規(guī)范化寫作范例

2018-03-17 15:43:00
實用醫(yī)藥雜志 2018年6期
關鍵詞:勻漿脫氫酶骨骼肌

摘自《中國臨床營養(yǎng)雜志》2008年6期的“紅景天苷對不同狀態(tài)下小鼠能量代謝的影響”一文。

動物、試劑和儀器 昆明種雄性小白鼠32只,體重(18±3) g,由第二軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。SDS(SDS 的英文名為salidroside,中文名為紅景天苷?!P者注)由華東理工大學生物反應器工程國家重點實驗室提供,高效液相色譜(high performance liquid chromatogram,HPLC)檢測純度在95%以上;蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase,MDH)試劑盒、琥珀酸脫氫酶 (succinate dehydrogenase,SDH)試劑盒、丙酮酸激酶(pyruvate phosphokinase,PK)試劑盒、乳酸脫氫酶(1actate dehydrogenase,LDH)試劑盒、乳酸(lactic acid,LD)檢測試劑盒均購自南京建成生物制品研究所;Bradford蛋白質(zhì)定量試劑盒購自北京天根公司。UV754分光光度計購自上海第三分析儀器廠,DK-8D型電熱恒溫水槽購自上海森信實驗儀器有限公司,高速臺式離心機購自上海醫(yī)用分析儀器廠。

動物分組和標本采集 將32只小鼠適應性喂養(yǎng)1周后隨機分為對照組、SDS組、運動組及SDS+運動組4組,每組8只,組間體重無差異。將900 mg SDS溶于100 ml蒸餾水中配制成無色透明的SDS溶液,SDS組及SDS+運動組以180 mg/kg·d的SDS灌胃給藥;對照組及運動組以同樣體積20 ml/kg·d蒸餾水灌胃,連續(xù)給藥15 d。15 d后,末次灌胃30 min后,對照組及SDS組不做任何運動,摘眼球取血后,脫臼處死取材:運動組及SDS+運動組進行無負重游泳,120 min后將小鼠撈出擦干,摘眼球放血后脫臼處死。迅速取小鼠肝及腓腸肌,液氮凍存,待測。

骨骼肌組織勻漿MDH、SDH、PK及LD檢測 取骨骼肌組織,用生理鹽水洗去殘留血液,濾紙拭干,準確稱取組織重量,加9倍生理鹽水制成10%組織勻漿,2500 r/min離心10 min,取上清加生理鹽水稀釋成0.5%勻漿。采用考馬斯亮藍法進行骨骼肌蛋白定量,并按照試劑盒說明書檢測骨骼肌組織勻漿中MDH、SDH、PK及LD水平。

肝組織勻漿LDH檢測 取肝組織,用生理鹽水洗去殘留血液,濾紙拭干,準確稱取組織重量,加9倍生理鹽水制成lO%組織勻漿待測。采用考馬斯亮藍法進行肝臟蛋白定量,按照試劑盒說明書檢測肝組織勻漿中LDH水平。

統(tǒng)計學處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件,組間差異比較采用方差分析,P<0.05為差異有顯著性。

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