白東 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院普外三科 （遼寧 沈陽(yáng) 110024）

結(jié)直腸癌已然成為我國(guó)最為之常見的一種惡性腫瘤，近些年來(lái)其發(fā)病病死率均居高不下，并且確診時(shí)常常發(fā)現(xiàn)該病已經(jīng)發(fā)生了癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲和擴(kuò)散。因此研究結(jié)直腸癌的遷移侵襲的分子機(jī)制非常必要，有助于從基因分子水平了解這一個(gè)過(guò)程，進(jìn)而采用基因或免疫干預(yù)的方法控制結(jié)直腸癌的發(fā)展。ILK以及上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)記分子是多種癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲過(guò)程中重要的分子[1]，本研究旨在對(duì)整合素連接激酶以及上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)記分子在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行研究，并擬通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探究其與癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移CT征象的關(guān)系。

1.實(shí)驗(yàn)及材料

1.1 材料及來(lái)源

本研究中的80例結(jié)直腸癌患者的癌癥腫瘤組織及與之相配對(duì)的癌旁組織標(biāo)本均由天津市腫瘤醫(yī)院（中國(guó)天津）友情提供，所有組織樣品均較為新鮮且均未接受任何癌癥治療處理。PBS磷酸緩沖液由Hyclone公司提供，顯微鏡螺旋CT由美國(guó)GE Hispeed Advantage購(gòu)買。

2.試驗(yàn)方法

2.1 CT檢測(cè)

對(duì)本研究中的80例結(jié)直腸癌患者行螺旋CT檢查，檢查方法參照文獻(xiàn)[2]執(zhí)行。

2.2 結(jié)直腸癌組織之中ILK和EMT相關(guān)標(biāo)記分子蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)

制作癌組織切片，以已知確定的結(jié)直腸癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照并以PBS切片作為陰性對(duì)照組進(jìn)行相關(guān)分子蛋白表達(dá)情況的判定。本研究中相關(guān)分子在腫瘤組織及其旁組織中表達(dá)的陽(yáng)性和陰性判定標(biāo)準(zhǔn)均將嚴(yán)格按照以下方法加以執(zhí)行。所有的組織切片的讀取均由三名有經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)醫(yī)生盲法判斷，所有切片均任意選取5個(gè)視野進(jìn)行讀取判定。陽(yáng)性分級(jí)按照表1中的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

表1. ILK以及EMT相關(guān)標(biāo)記分子蛋白表達(dá)陽(yáng)性與陰性判定標(biāo)準(zhǔn)

表2. 結(jié)直腸癌螺旋CT征象

表3. 80例直腸癌組織中ILK以及EMT相關(guān)標(biāo)記分子陽(yáng)性和陰性表達(dá)的例數(shù)

3.結(jié)果

3.1 結(jié)直腸癌螺旋CT征象

由表2可知，結(jié)直腸癌漿膜侵犯病例數(shù)為44例，淋巴轉(zhuǎn)移侵犯為32例。

3.2 結(jié)直腸癌組織之中整合素連接激酶和EMT相關(guān)標(biāo)記分子蛋白陽(yáng)性與陰性表達(dá)情況

由表3中結(jié)果分析可知上皮細(xì)胞鈣粘蛋白在癌組織之中的陽(yáng)性表達(dá)頻率明顯較低而另外三個(gè)分子的陽(yáng)性表達(dá)概率情況則正好與之相反。

3.3 結(jié)直腸癌組織之中相關(guān)分子蛋白陽(yáng)性與陰性表達(dá)情況的相關(guān)性Spearman分析

整合素連接激酶在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平與上皮細(xì)胞鈣粘蛋白的表達(dá)情況呈顯著的負(fù)相關(guān)（r=-0.286），其與Vimentin、Snail癌組織中的表達(dá)水平呈明顯的正相關(guān)關(guān)系。

3.4 結(jié)直腸癌之中相關(guān)分子與患者CT檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性

由表5可知整合素連接激酶、Vimentin、Snail1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與漿膜侵犯和淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系，而上皮細(xì)胞鈣黏蛋白的表達(dá)則與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移線侵襲呈明顯的負(fù)相關(guān)。

表4. 結(jié)直腸癌組織中ILK以及EMT相關(guān)標(biāo)記分子蛋白表達(dá)相關(guān)性分析

表5. 結(jié)直腸癌之中相關(guān)分子與患者CT檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性

4.討論

ILK是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種參與諸多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激酶，其在腫瘤細(xì)胞中的高度表達(dá)對(duì)細(xì)胞的增殖和侵襲遷移具有重要意義。EMT是特定情況之下機(jī)體的上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞分化一種生理表現(xiàn)，但在腫瘤細(xì)胞中這一作用將削弱胞間連接對(duì)癌細(xì)胞束縛；從而加劇腫瘤細(xì)胞的遷移進(jìn)而引發(fā)癌細(xì)胞的擴(kuò)散[3]。

本研究探討了整合素連接激酶和上皮細(xì)胞鈣粘蛋白等等相關(guān)分子在癌組織之中的表達(dá)相關(guān)性。據(jù)結(jié)果推測(cè)結(jié)直腸癌組織中的這四個(gè)相關(guān)分子的異常表達(dá)可能與結(jié)直腸癌細(xì)胞在內(nèi)環(huán)境中的發(fā)展進(jìn)程具有較為密切關(guān)系。其表達(dá)相關(guān)性分析結(jié)果提示ILK與EMT相關(guān)標(biāo)記分子的表達(dá)可能存在特定的信號(hào)關(guān)系進(jìn)而影響結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。為此本研究還對(duì)這四個(gè)分子表達(dá)與癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移情況關(guān)系進(jìn)行了探討，結(jié)果表明上皮細(xì)胞鈣黏蛋白與癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，而ILK等分子在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)與癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。多項(xiàng)研究表明ILK的表達(dá)下調(diào)將會(huì)抑制癌細(xì)胞侵襲擴(kuò)散，這可能通過(guò)通過(guò)ILK/Akt/GSK3β通路進(jìn)而干預(yù)EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)達(dá)到；而上皮細(xì)胞鈣粘蛋白分子表達(dá)水平的上調(diào)以及Vimentin、Snail1表達(dá)水平的下調(diào)都將增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)胞間連接對(duì)癌細(xì)胞的束縛并減弱其侵襲能力。而這些研究也進(jìn)一步驗(yàn)證了本研究的結(jié)果，但其主要是基于膀胱癌和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)移的研究，對(duì)結(jié)直腸癌此方面的研究還較為缺乏。

根據(jù)本研究結(jié)果推測(cè)可知，由于結(jié)直腸癌細(xì)胞中ILK分子的表達(dá)上調(diào)引起EMT相關(guān)標(biāo)志分子發(fā)生一系列的變化；從而促進(jìn)了結(jié)直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力的提高，但還有待進(jìn)一步深入的分子機(jī)制和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證研究。

[1]張鳳梅,李勝水,李秀清,等.ILK和MMP-9在胃癌及其侵襲、轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及意義[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2015,24(1):95-98.

[2]魯家賢,董生根,張偉良,等.結(jié)直腸癌的CT診斷及其侵襲性征象的病理對(duì)照分析[C]//浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)放射學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì),2014.

[3]莊翔,朱軍,呂夢(mèng)欣,等.特異性ILK siRNA對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞EMT及移植瘤生長(zhǎng)的影響[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,36(2):191-198.