1.河北省遷安市中醫(yī)醫(yī)院，河北 遷安 064400；2.河北省遷安市人民醫(yī)院，河北 遷安 064400；3.河北中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050000

缺血性中風(fēng)約占中風(fēng)病的30%，其發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高，給家庭及社會(huì)造成極大負(fù)擔(dān)。氧化應(yīng)激學(xué)是缺血性腦血管病的病理生理機(jī)制之一[1]。金蛭方系課題組經(jīng)過(guò)10余年臨床篩選出的治療缺血性中風(fēng)的效方，擬通過(guò)建立大鼠急性腦缺血再灌注模型，觀察金蛭方對(duì)大鼠血清及腦組織中SOD活性及MDA含量的影響，以探討其抗氧自由基水平方面的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康雄性SD大鼠60只，清潔級(jí)，體重250～300 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：1119069。

1.2 藥物與試劑 金蛭方組成：水蛭、郁金、川芎、冰片(由遷安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備)，上4味除冰片外水提濃縮成高、低劑量后加入相應(yīng)研磨冰片，所含生藥分別為：0.30 g/mL(高劑量)、0.15 g/mL(低劑量)。尼莫地平片(國(guó)藥準(zhǔn)字：H41022175，規(guī)格：20 mg/片，鄭州瑞康制藥有限公司)配制成0.001 g/mL水溶液。

水合氯醛注射液(批號(hào)：20120206，上海化學(xué)試劑公司)；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(批號(hào)：20130704)、丙二醛(MDA)試劑盒(批號(hào)：20130709)均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 MSE-25型高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，LAUDA-C3型循環(huán)恒溫水浴箱(泰克儀器有限公司)，F(xiàn)6/10型超細(xì)勻漿機(jī)(上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司)，AR1140型電子分析天平(Ohaus USA)，722型光柵分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.4 造模方法 參考改良的Longa法[2]：頸部正中切口，用3-0手術(shù)絲線結(jié)扎頸外動(dòng)脈(ECA)遠(yuǎn)端及枕動(dòng)脈，在結(jié)扎線距分叉部2 mm處剪斷ECA，將一端已加工成光滑球形的尼龍線從ECA殘端插入進(jìn)行結(jié)扎，將尼龍線經(jīng)頸總動(dòng)脈(CCA)分叉部插入頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，此時(shí)松開CCA，ICA套線恢復(fù)血流，線栓推送順滑，無(wú)出血。將線栓向上深入至分叉以上18～19 mm達(dá)到大腦中動(dòng)脈開口處，將頸總動(dòng)脈連同尼龍線一起結(jié)扎，縫合切口后外留尼龍線0.5 cm，放到單籠中，2 h后外拉尼龍線使其球端回至ECA進(jìn)行缺血后再灌注。

1.5 分組與給藥[3]60只大鼠自由進(jìn)食飲水，飼養(yǎng)于18～22 ℃明暗各12 h的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組。①假手術(shù)組：手術(shù)時(shí)僅作頸部手術(shù)切口，鈍性分離頸前肌，游離暴露頸總、頸外、頸內(nèi)動(dòng)脈，術(shù)后當(dāng)日灌服蒸餾水。②模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組)：造模當(dāng)日灌服蒸餾水。③金蛭方低劑量組(簡(jiǎn)稱低劑量組)：造模當(dāng)日灌服金蛭方，每日用藥劑量為1.5 g/kg(相當(dāng)于成人劑量的10倍)。④金蛭方高劑量組(簡(jiǎn)稱高劑量組)：術(shù)后當(dāng)日灌服金蛭方，每日用藥劑量為3.0 g/kg(相當(dāng)于成人劑量的20倍)。⑤性藥尼莫地平片對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)：術(shù)后當(dāng)日灌服尼莫地平片，每日用藥劑量為0.01 g/kg(相當(dāng)于成人劑量的20倍)。各組1次/d灌胃，每次用藥體積均按1 mL/100g計(jì)算，連續(xù)給藥2周。

1.6 檢測(cè)方法 實(shí)驗(yàn)2周末，于最后一次給藥禁食12 h后，戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血5 mL，注入離心管中待凝固后，4 ℃，3000 r/min離心，10 min，分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。取血后，迅速斷頭冰浴中取右側(cè)大腦額葉皮層同一位置取腦組織100 g，濾紙吸干血跡，盡快加入預(yù)冷的生理鹽水碾磨，制成組織勻漿，4 ℃3000 r/min離心，15 min，取上清液，-20 ℃保存?zhèn)溆?。放免法檢測(cè)血清及腦組織中SOD活性和MDA的含量，具體操作嚴(yán)格遵照試劑盒說(shuō)明書。

2 結(jié) 果

模型組大鼠血清、腦組織中SOD活性較假手術(shù)組明顯降低(P<0.01)；MDA含量均較假手術(shù)組明顯升高(P<0.01)。用藥后各治療組大鼠血清和腦組織中SOD活性明顯升高(P<0.05，P<0.01)；MDA含量明顯降低(P<0.05，P<0.01)。高、低劑量組在增強(qiáng)SOD活性和降低MDA含量方面的作用優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

組別鼠數(shù) 血清 腦組織勻漿 SOD/U/mLMDA/nmol/mLSOD/NU/ngprotMDA/nmol/mgprot假手術(shù)組12281.33±10.24**3.88±0.57**88.61±6.66**166.38±16.19**模型組11187.12±9.888.16±0.9937.89±3.91240.71±15.86高劑量組10264.84±9.65**▲3.92±0.64**▲79.19±5.49**▲172.52±16.05**▲

組別鼠數(shù) 血清 腦組織勻漿 SOD/U/mLMDA/nmol/mLSOD/NU/ngprotMDA/nmol/mgprot低劑量組11258.67±9.47**▲4.10±0.78**▲70.12±4.88**▲185.63±15.94**▲對(duì)照組12237.14±8.14*4.55±0.84**55.61±4.67*200.38±15.67*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較，▲P<0.05。

3 討論

中風(fēng)病臨床癥候?qū)W研究認(rèn)為，缺血性中風(fēng)患者多是在氣血內(nèi)虛的基礎(chǔ)上，加之勞倦內(nèi)傷、憂思惱怒、嗜食厚味、煙酒等誘因，導(dǎo)致氣血逆亂，直沖犯腦，致氣血瘀滯，腦脈痹阻。氣滯、血瘀、絡(luò)阻為本病的主要病機(jī)，“氣行則血行”，行氣、活血、通絡(luò)為其有效治則。院內(nèi)制劑“金蛭膠囊”(制劑號(hào)：冀藥制字Z20051013)治療缺血性中風(fēng)10余年，療效滿意。方中水蛭破血逐瘀、通經(jīng)活絡(luò)，《本草匯言》曰：“水蛭逐惡血、散瘀血之要藥也”；郁金行氣活血，化痰降火，《本草匯言》曰：郁金其性清揚(yáng)，能散郁滯，順逆氣，上達(dá)高巔，善行下焦；川芎行氣活血，歷代醫(yī)家認(rèn)為其善治中風(fēng)病，稱為治風(fēng)圣藥[4]；冰片醒神通竅，《本草衍義》：“芳香走竄，引藥上行，獨(dú)行則勢(shì)弱，佐使則有功”，四藥合用，共奏活血、化瘀、通絡(luò)之功。

氧自由基損傷是缺血性卒中發(fā)生發(fā)展最重要且肯定的因素之一[5]。正常機(jī)體內(nèi)自由基水平保持相對(duì)穩(wěn)定，當(dāng)腦缺血缺氧時(shí)，體內(nèi)自由基產(chǎn)生、清除的平衡狀態(tài)遭到破壞，使得自由基迅速大量產(chǎn)生，細(xì)胞膜的膽固醇含量耗竭，從而破壞神經(jīng)細(xì)胞膜的完整性，最終導(dǎo)致細(xì)胞壞死、腦水腫及其他并發(fā)癥[6]。SOD為主要的抗氧化酶之一，通過(guò)催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)阻斷自由基毒性反應(yīng)[7]，清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的代謝終產(chǎn)物，存在于細(xì)胞膜的不飽和脂肪酸受到自由基的作用而產(chǎn)生的過(guò)氧化脂質(zhì)中[8]。MDA的含量間接反映出機(jī)體細(xì)胞氧自由基的受損程度[9]。

研究表明，采用線栓法復(fù)制的缺血性中風(fēng)大鼠模型腦組織中SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增加。用藥干預(yù)后，各治療組大鼠血清、腦組織中SOD的活性降低及 MDA的含量升高，說(shuō)明金蛭方減少自由基的產(chǎn)生，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，起到腦保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上，將對(duì)金蛭方對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠在抗氧自由基水平方面進(jìn)行深入系統(tǒng)地研究。

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