何永旺，李 娟，黃 儉，周一卿，趙祥月，楊根夢，李 楨，李 娜*，曾曉鋒,*

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，昆明 650500； 2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所， 云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南省實(shí)驗(yàn)樹鼩標(biāo)準(zhǔn)化與應(yīng)用研究創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，昆明 650118)

樹鼩是處于食蟲類與靈長類之間的動(dòng)物，其大腦發(fā)達(dá)，常用于神經(jīng)系統(tǒng)研究。而樹鼩尾靜脈注射是神經(jīng)系統(tǒng)藥理、毒理實(shí)驗(yàn)中藥物干預(yù)常用的注射方法，一般在清醒狀態(tài)下進(jìn)行，要求注射時(shí)準(zhǔn)確快速。樹鼩較為活躍，容易旋轉(zhuǎn)和扭動(dòng)身體，而且尾靜脈較細(xì)小，操作較為困難，常規(guī)固定裝置難以準(zhǔn)確快速固定樹鼩，導(dǎo)致藥物難以順利地注入，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。正確的操作方法可以避免損害動(dòng)物，防止被動(dòng)物咬傷，減少對觀察指標(biāo)的影響，從而保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。目前，對于大鼠、小鼠的尾靜脈注射給藥方法報(bào)道較多[1-3]，而樹鼩尾靜脈注射方法研究報(bào)道則相對缺乏。筆者在長期的樹鼩動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能操作中，結(jié)合樹鼩的特點(diǎn)和其它動(dòng)物尾靜脈注射的方法，總結(jié)出一種新的樹鼩清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的單人操作方法，顯著提高了樹鼩尾靜脈注射給藥的成功率，節(jié)省了操作時(shí)間和操作力量。現(xiàn)將具體方法介紹如下，旨在為樹鼩尾靜脈注射相關(guān)操作提供參考。

注：A：樹鼩的抓取；B：樹鼩的控制。圖1 樹鼩的抓取與控制Note. A: Grabbing of a tree shrew. B: Holding of a tree shrew.Fig.1 Grabbing and holding methods of a tree shrew

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級雄性成年樹鼩，來源于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所全國樹鼩種質(zhì)資源中心[SCXK (滇)K2013-0001]，相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所進(jìn)行[SYXK (滇)K2013-0001]，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道主義關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

需注射的藥液，75%酒精。剪刀，1 mL一次性注射器，棉球，帆布手套，乳膠手套。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 抓取

樹鼩較為膽小易驚，不宜強(qiáng)烈刺激和受驚，所以在抓取時(shí)，必須輕柔、準(zhǔn)確和迅速。操作者雙手內(nèi)戴乳膠手套，外面戴好帆布手套。將飼養(yǎng)樹鼩的小盒子梭開一個(gè)小口，右手伸進(jìn)盒子里面抓取樹鼩，左手捂住盒子開口處(見圖1A)，防止樹鼩逃脫。右手手掌輕柔地扣住樹鼩背部，以拇指和食指環(huán)握樹鼩胸部和上肢，以中指、無名指和小指配合手掌控制住樹鼩腹部和后肢(見圖1B)，力度以能防止樹鼩掙脫為宜，不能用力抓捏，以免造成樹鼩受傷甚至死亡。

1.3.2 固定

帆布手套比較透氣，不會影響樹鼩呼吸；而且樹鼩受驚后看到手套里相對較暗的環(huán)境會迅速鉆進(jìn)帆布手套里躲避；此外，帆布手套可以限制樹鼩活動(dòng)，不會對樹鼩造成傷害。操作者左手拿另一只帆布手套，右手抓握樹鼩，雙手配合將手套入口對準(zhǔn)樹鼩頭部(見圖2A)，樹鼩將會迅速鉆進(jìn)帆布手套里。當(dāng)樹鼩鉆進(jìn)手套以后，左手收緊手套口邊緣，并作適當(dāng)調(diào)整，使手套口邊緣與樹鼩髂前上棘連線對齊為宜。調(diào)整好手套以后，用一文件夾夾緊手套口邊緣完成樹鼩固定(見圖2B)。固定好后即可對樹鼩進(jìn)行稱重并根據(jù)樹鼩體重準(zhǔn)備注射藥品。

1.3.3 注射與止血

樹鼩尾靜脈于樹鼩尾部腹側(cè)正中縱向走形(見圖3A)，用蘸有75%酒精的棉球涂擦擠壓腹側(cè)的尾巴，在剪去皮毛的部位可見一條隆起的藍(lán)線即為尾靜脈。由于樹鼩尾部皮毛較長，不易分辨，故應(yīng)首先用剪刀將樹鼩尾部腹側(cè)正中皮毛盡量剪去，以充分暴露樹鼩尾部皮膚和血管。其次用酒精棉球涂擦樹鼩尾巴剪掉皮毛的部位，再用干棉球擦干，從而保持樹鼩尾巴干凈和使血管擴(kuò)張便于注射。接下來右手控制住樹鼩尾巴尖端，左手食指和中指夾住樹鼩背腹側(cè)尾巴根部并往尾巴尖部推進(jìn)，待欲注射部位血管清晰可見時(shí)停止并夾緊樹鼩尾巴。左手拇指、無名指和小指控制住樹鼩尾巴尖端，右手持1 mL一次性注射器(4號針頭)，針尖斜面向上，使針頭與靜脈平行(小于15°)從尾部末端向近心端緩慢進(jìn)針，進(jìn)針深度以針頭進(jìn)入1/2以上為宜(見圖3B)。右手稍回抽注射器，見回血后(見圖3C)，證明穿刺尾靜脈成功，輕推無阻力即可開始注射藥液；若回抽無回血或見回血后輕推有阻力，證明針未刺入尾靜脈，可將注射針退回至皮下，進(jìn)行再次進(jìn)針，或退針止血向尾巴根部移動(dòng)重新選擇穿刺點(diǎn)消毒后再次進(jìn)針。注射完畢后，左手拇指壓住注射部位拔出針頭，右手緩慢退針，并用干棉球輕壓注射針眼止血。

注：A：將樹鼩頭部對準(zhǔn)手套口；B：樹鼩的固定。圖2 樹鼩的固定Note. A: Aligning the head of the tree shrew to the opening of a glove. B: Fixing the tree shrew with a canvas glove and a clamp.Fig.2 Fixating method of a tree shrew

注：A：樹鼩尾靜脈；B：進(jìn)針；C：回抽注射器見回血。圖3 樹鼩尾靜脈及其注射方法Note. A: Tail vein of a tree shrew. B: Inserting the needle. C: Withdrawing the pumping syringe to see blood returning.Fig.3 Tail vein injection to a tree shrew

2 結(jié)果

筆者及其所在團(tuán)隊(duì)在長期的樹鼩動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能操作中，結(jié)合樹鼩的特點(diǎn)和其它動(dòng)物尾靜脈注射的方法，總結(jié)出了樹鼩清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的單人操作方法，采用帆布手套套取和文件夾夾緊手套的方法固定樹鼩，一只手固定樹鼩尾巴，另一只手注射藥物。此方法操作簡單、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、給藥成功率高、動(dòng)物依從性好，顯著提高了樹鼩尾靜脈注射給藥的成功率。而且一人即可完成全部操作，平均1 h可以完成50～60只樹鼩的抓取和注射操作，有效地節(jié)省了操作時(shí)間和操作力量。

3 討論

3.1 固定方法

對樹鼩進(jìn)行牢固可靠的固定是有效完成尾靜脈注射的關(guān)鍵。樹鼩固定裝置固定法、樹鼩束縛衣固定法和兩人合作固定法操作繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，實(shí)際運(yùn)用效果不佳。固定裝置尺寸相對單一，難以適應(yīng)實(shí)際工作需求，雖然固定裝置能夠有效防止動(dòng)物咬傷實(shí)驗(yàn)人員，但容易導(dǎo)致樹鼩軀干扭動(dòng)，無法有效固定，而且裝置大小若選取不當(dāng)，可能會對樹鼩產(chǎn)生損傷。而且固定裝置多用金屬或有機(jī)玻璃等制成，成本較高，結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，不易清洗。兩人合作固定法往往難以取得很好的固定效果，若配合不當(dāng)，易造成穿刺失敗。與之相比，本方法采用就地取材的原則，選擇很常見的帆布手套和文件夾固定樹鼩，成本可忽略不計(jì)；帆布手套和文件夾便于攜帶，易于清洗。既穩(wěn)定地固定了樹鼩，有效地節(jié)約了實(shí)驗(yàn)成本，又增加了樹鼩的舒適感，減少了樹鼩的損傷。而且本方法可單人操作，簡便快速，既節(jié)省了人力又節(jié)約了時(shí)間，能夠在短時(shí)間內(nèi)對大量樹鼩進(jìn)行安全、快速和準(zhǔn)確的尾靜脈注射，顯著地提高了實(shí)驗(yàn)效率。

3.2 注射方法

在注射之前，要用剪刀剪去皮毛并用酒精棉球涂擦注射部位，使血管充分舒張以利于進(jìn)針。實(shí)際操作中，有些工作人員采用40℃～50℃的溫水擦洗樹鼩尾巴，以達(dá)到清潔、擴(kuò)張血管、便于穿刺的作用。但筆者認(rèn)為，用溫水擦洗樹鼩尾巴會提高樹鼩代謝率，影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)中往往需要對樹鼩進(jìn)行反復(fù)多次注射，溫水擦洗不僅操作繁瑣耗時(shí)，而且可能對樹鼩尾巴甚至樹鼩的整個(gè)生理狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響，如果掌握不好溫度和時(shí)間容易燙傷樹鼩尾巴，影響穿刺效果和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。筆者及其所在團(tuán)隊(duì)在長期的樹鼩動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能操作中發(fā)現(xiàn)，用酒精棉球擦拭可以很好地去除樹鼩尾巴表面污垢并使血管充盈，不影響樹鼩生理狀態(tài)，而且此操作方法由單人完成，簡單易行且成功率較高。也有工作人員采用靜脈留置針或頭皮針接1 mL注射器進(jìn)行注射。因?yàn)殪o脈留置針和頭皮針針頭更小，對血管的損傷更小。但在長期的實(shí)驗(yàn)操作中，筆者發(fā)現(xiàn)用1 mL注射器的4號針頭就很容易進(jìn)針，而且容易單手操作。靜脈留置針和頭皮針穿刺注射一只手很難完成，而且穿刺成功后容易發(fā)生滑脫或刺破血管等情況。

3.3 優(yōu)勢

尾靜脈注射給藥因其吸收快、劑量準(zhǔn)，故作為藥理、毒理實(shí)驗(yàn)中藥物干預(yù)常用的注射方法[3]。抓取、固定和給藥等基本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)雖然已經(jīng)有較為完整的理論體系，但在實(shí)際工作中往往會發(fā)現(xiàn)一些更為行之有效的方法。筆者總結(jié)出的樹鼩清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的單人操作方法與其他的尾靜脈注射方法比較，有明顯的優(yōu)勢：可單人操作，節(jié)省人力資源；樹鼩固定簡單，樹鼩尾巴不需熱水浸泡，操作快捷，減少了穿刺所需的時(shí)間；穿刺所需的器材都是實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用的器材，不使用固定裝置，減少了實(shí)驗(yàn)成本；固定效果好、動(dòng)物依從性高，顯著提高了樹鼩尾靜脈注射給藥的成功率。

[1] 余濤, 曾陽, 孫玉俠, 等. 一種小鼠尾靜脈注射的操作方法 [J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 26(10): 82-84.

[2] 李軼倞, 張娜, 田楓. 一種簡易小鼠尾靜脈注射固定法——籠蓋壓制法 [J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 26(10): 79-81.

[3] 張闊, 洪壽海, 何芹芹, 等. 大鼠清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的快速操作技巧與體會 [J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 26(12): 81-84.