楊文嬌，宋春陽，于振洋，姜建陽

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東青島266109）

復(fù)合蛋白酶已經(jīng)成為豬日糧中有益的添加劑，日糧中添加復(fù)合酶制劑可以提高生長育肥豬的生長性能，改善胴體性狀和肉品質(zhì)。研究表明，在仔豬日糧中添加含有蛋白酶的復(fù)合酶制劑，能夠促進(jìn)仔豬生長發(fā)育、提高飼料利用率；增強(qiáng)仔豬免疫力，降低死亡率。楊春雷（2013）認(rèn)為，日糧中添加復(fù)合酶制劑可以顯著提高鈣、磷和總能的表觀消化率，極顯著降低仔豬腹瀉率；對斷奶仔豬的平均日增重及采食量無顯著影響。葉慧（2013）認(rèn)為組合型蛋白酶對仔豬生產(chǎn)性能和養(yǎng)分表觀消化率相較于單一蛋白酶組能量的表觀消化率提高6.08%，粗蛋白質(zhì)的表觀消化率提高7.53%。另外，研究表明，在日糧中添加適量的蛋白酶，能夠有效補(bǔ)充機(jī)體消化道中內(nèi)源蛋白酶，提高飼料中粗蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，進(jìn)而達(dá)到提高生產(chǎn)性能的目的。蛋白酶的添加量是影響其作用效果的一個重要因素，適宜的添加量既可以提高飼料消化率，改善生產(chǎn)性能，又可以避免過量添加造成的成本及資源的浪費(fèi)，因此研究蛋白酶的添加量對于生產(chǎn)實(shí)踐具有重要意義。本試驗(yàn)旨在通過研究不同蛋白酶水平對魯煙白豬生產(chǎn)性能、養(yǎng)分消化率及血液生化指標(biāo)的影響，確定復(fù)合蛋白酶在最優(yōu)日糧組型中的適宜添加量，為復(fù)合蛋白酶在魯煙白豬上的科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料 復(fù)合蛋白酶由兩種酸性蛋白酶（蘇柯漢生物工程有限公司，SUKAPro AC，酶活力10萬U/g；山東安克生物工程有限公司，酸性蛋白酶，酶活力4萬 ～10萬U/g）和一種中性蛋白酶（蘇柯漢生物工程有限公司，SUKAPro NE PW 100，酶活力10萬U/g）按3：3：2的比例混合而成。

蛋白酶活性定義為1 g固體酶粉（或1 mL液體酶），在一定溫度和pH條件下，1 min內(nèi)水解酪素產(chǎn)生1 μg酪氨酸所需要的酶量，以U/g表示。1.2 試驗(yàn)動物與飼養(yǎng)管理 本試驗(yàn)選用150頭（26±1）kg去勢健康生長的魯煙白公豬，按體重將其隨機(jī)分配到5個試驗(yàn)組中，即對照組；復(fù)合蛋白酶0.05%；復(fù)合蛋白酶0.075%；復(fù)合蛋白酶0.1%；復(fù)合蛋白酶0.125%，每個試驗(yàn)組3個重復(fù)，每個重復(fù)10頭豬。

飼養(yǎng)管理按常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行，試驗(yàn)前對豬舍進(jìn)行徹底清理和消毒，同時給豬打耳號，驅(qū)蟲，并在試驗(yàn)期間注射疫苗，生長豬每天以圈為單位飼喂 2 次（7：00，16：00），豬自由采食和飲水，每日早晚各打掃一次圈舍，保持圈內(nèi)清潔、衛(wèi)生、地面干燥，每周消毒3次（多種消毒液輪換使用）。試驗(yàn)期為28 d。

1.3試驗(yàn)日糧 采用玉米-雜粕型日糧，飼料為制粒型，其配方及營養(yǎng)水平見表1。

表1　試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4樣品采集

1.4.1飼料與糞便的采集 試驗(yàn)期間每個重復(fù)抽取500 g飼料樣品，留做飼料養(yǎng)分含量的測定；在試驗(yàn)最后一天以重復(fù)為單位，收集適量新鮮糞便，于65℃烘箱內(nèi)烘干，之后再置于空氣中回潮24 h，混合、粉碎后備用。

1.4.2血液的采集 稱重前每個重復(fù)隨機(jī)選1頭豬于前腔靜脈采血10 mL，3000 r/min離心10 min后分裝血清，-20℃保存。

1.5測定指標(biāo)

1.5.1生產(chǎn)性能測定指標(biāo) 試驗(yàn)開始前和結(jié)束后，分別將已空腹12 h的豬逐個稱重，以重復(fù)為單位結(jié)算飼料消耗。計算平均日總重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）。

1.5.2日糧中各種養(yǎng)分消化率的測定 使用2 mol/L HCl不溶灰分（AIA）作內(nèi)源指示劑，分別測定料樣和糞樣中水分含量，計算干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗灰分、有機(jī)物含量；根據(jù)指示劑法計算日糧中各養(yǎng)分的表觀消化率：

1.5.3血液生化指標(biāo)的測定 血清尿素氮和總蛋白分別使用比色法和雙縮脲法測定，測定儀器均為全自動生化分析儀。

1.6數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel進(jìn)行統(tǒng)計、計算，采用SPSS 20.0軟件中的ANOVA進(jìn)行單因子方差分析，用LSD法進(jìn)行多重比較。

2　結(jié)果與分析

2.1復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產(chǎn)性能的影響 由表2可知，在玉米-雜粕型日糧中添加復(fù)合蛋白酶能夠顯著降低耗料增重比 （p＜0.05），其中0.1%組與對照組之間差異極顯著，且0.075%和0.1%組之間差異不顯著（P＞0.05）?；貧w分析表明，復(fù)合蛋白酶添加量與魯煙白豬的料重比之間符合二次曲線模型，其回歸方程為y=0.0421x2-0.3039x+3（R2=0.8729，P ＜ 0.05），極值點(diǎn)在0.075%和 0.1%組之間；但在平均日采食量和平均日增重方面，雖然添加復(fù)合蛋白酶之后都有所提高，但各組間差異不顯著（P＞ 0.05）。

2.2復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬養(yǎng)分消化率的影響 由表3可知，在玉米-雜粕型日糧中，隨著復(fù)合蛋白酶添加水平的提高，干物質(zhì)、有機(jī)物的消化率隨之逐漸升高并趨于平穩(wěn)。其中0.075%和0.1%組的養(yǎng)分消化率都顯著高于對照組 （p＜0.05或p＜0.01），并且0.075%和0.1%組之間差異不顯著 （P＞0.05）。蛋白酶的添加量對日糧粗蛋白質(zhì)消化率有顯著影響（p＜0.01）。

表2　復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產(chǎn)性能的影響

表3　復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬養(yǎng)分消化率的影響 %

2.3復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬血液生化指標(biāo)的影響 由表4可知，復(fù)合蛋白酶在玉米-雜粕型日糧中隨著添加量的提高，對魯煙白豬的血清生化指標(biāo)有顯著影響（p＜0.01）。其中血清總蛋白含量各試驗(yàn)組均顯著高于對照組（p＜0.01）；血清尿素氮除0.05%組外，其他各組均顯著低于對照組（p＜0.05或p＜0.01），且0.075%和0.1%組與對照組差異極顯著，0.075%組和0.1%組之間差異不顯著（P＞0.05），回歸分析表明，復(fù)合蛋白酶添加量與魯煙白豬的血清總蛋白和尿素氮含量之間符合二次曲線模型，其回歸方程分別為y=-0.2357x2+1.8743x+66.48（R2=0.9497，P ＜ 0.01）、y=0.0543x2-0.4057x+5.78（R2=0.8327，P ＜ 0.01），極值點(diǎn)都在0.075%和0.1%組之間。

3　討論

3.1復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產(chǎn)性能的影響 對于飼用酶制劑而言，不管其對哪一種底物發(fā)揮作用，根本的目的都是要在降低飼料成本的同時盡可能的提高或保持動物的生產(chǎn)性能。蛋白酶作為飼料添加劑的使用為多種植物性蛋白飼料在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的大量應(yīng)用提供了有效的途徑。在日糧中添加適量的蛋白酶，能夠有效補(bǔ)充機(jī)體消化道中的內(nèi)源蛋白酶，提高飼料中粗蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，進(jìn)而達(dá)到提高生產(chǎn)性能的目的（于桂陽，2005；Yin，2001；Ghazi，1997）。 楊久仙等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬日糧中添加蛋白酶可顯著降低耗料增重比，其中添加量為0.08%和0.12%時飼料轉(zhuǎn)化率分別提高6.3%和8%。郭建來等（2007）發(fā)現(xiàn)仔豬日糧中添加酸性蛋白酶，日增重提高11.98%、采食量提高5.49%，料重比降低5.68%。

表4　復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬血液生化指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)在玉米-雜粕型日糧中添加復(fù)合蛋白酶耗料增重比顯著降低，但在平均日采食量和平均日增重方面，雖然添加復(fù)合蛋白酶之后都有所提高，但各組間差異不顯著。徐奇友等（1995）研究發(fā)現(xiàn)，加酶日糧與對照日糧在平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率這兩項(xiàng)指標(biāo)中差異均不顯著。分析其原因，這種結(jié)果可能是由于飼料類型、蛋白酶配比、蛋白酶來源和活性的不同所引起的。

3.2復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬養(yǎng)分消化率的影響 相關(guān)研究表明，蛋白酶能夠提高能量、蛋白質(zhì)、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，提高飼料轉(zhuǎn)化率（Selle，2010；Gracia，2009）。 在仔豬日糧中添加酸性蛋白酶，可以提高日糧中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣、磷的表觀消化率，但均未達(dá)到差異顯著的水平（郭建來，2007）。 楊久仙等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加蛋白酶可以顯著提高仔豬對粗蛋白質(zhì)和干物質(zhì)的消化率，試驗(yàn)組中粗蛋白質(zhì)與干物質(zhì)的消化率分別提高了4.8%和3.2%。Rooke等（1998）研究表明，飼喂經(jīng)蛋白酶處理后的豆粕，可以顯著提高斷奶仔豬的生長性能和養(yǎng)分消化率，其原因可能是由于蛋白酶降解了豆粕中的一些特異性多肽。也有一些研究得出了不同的結(jié)論，Olukosi等（2008）研究報道，在玉米-豆粕日糧中添加蛋白酶為主的復(fù)合酶制劑未能對肉仔雞的養(yǎng)分表觀消化率產(chǎn)生顯著影響。余有貴（2005）研究發(fā)現(xiàn)，在以玉米豆粕型日糧為基礎(chǔ)日糧，小麥分別占谷物組成的38%和73%的試驗(yàn)日糧，3種不同組成的日糧中添加復(fù)合酶制劑均可顯著提高其養(yǎng)分消化率。添加0.025%復(fù)合酶的玉米豆粕型日糧獲得了最大營養(yǎng)物質(zhì)消化率。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在玉米-雜粕型日糧中添加復(fù)合蛋白酶能顯著提高干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、有機(jī)物的消化率（p＜0.05），其中0.1%的添加量作用效果最明顯，粗蛋白質(zhì)消化率提高了2.78%（p＜0.01）；干物質(zhì)和有機(jī)物分別提高了2.35%和3.96%（P ＜ 0.05）。

3.3復(fù)合蛋白酶添加量對魯煙白豬血液生化指標(biāo)的影響 血清總蛋白的水平可以從整體上反映機(jī)體蛋白合成代謝的強(qiáng)弱，當(dāng)血清總蛋白含量升高時，表明血清總蛋白與組織蛋白質(zhì)保持的動態(tài)平衡向組織蛋白沉積方向移動，組織器官生長得到促進(jìn)；另一方面，血清總蛋白還能夠反映機(jī)體免疫機(jī)能的狀態(tài)。血清總蛋白質(zhì)含量高有利于提高動物機(jī)體免疫力和代謝水平（高玉紅，2000）。

本試驗(yàn)中在魯煙白豬玉米-雜粕型日糧中添加復(fù)合蛋白酶使血清總蛋白含量顯著提高，其中各試驗(yàn)組均顯著高于對照組 （p＜0.01）。由此可見，蛋白酶可以提高飼料蛋白利用率，增加機(jī)體蛋白沉積，提高動物的生產(chǎn)性能。

尿素氮是機(jī)體內(nèi)各種氨基酸降解程度的檢測指標(biāo)，能夠準(zhǔn)確的反映出動物體內(nèi)各種氨基酸之間的平衡狀況及蛋白質(zhì)的代謝水平。血清尿素氮是通過動物體內(nèi)鳥氨酸循環(huán)合成，是機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的終產(chǎn)物，其含量與蛋白質(zhì)及氨基酸的消化率息息相關(guān)。因此關(guān)于營養(yǎng)代謝的研究通常會把血清尿素氮作為動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝水平和日糧氨基酸平衡狀況較為準(zhǔn)確的反映指標(biāo)。Choct（1995）研究發(fā)現(xiàn)，血清尿素氮含量與機(jī)體內(nèi)氮沉積率及蛋白質(zhì)利用率呈顯著負(fù)相關(guān)（y=-0.9）。血清尿素氮含量的降低，表明除尿素氮以外的含氮化合物的合成加快或是機(jī)體內(nèi)含氮物質(zhì)的分解減少，氮的沉積量增加，利用率提高；反之則表明體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝增強(qiáng)，氮沉積量減少。

本試驗(yàn)中，添加蛋白酶的各試驗(yàn)組的血清尿素氮含量除0.05%以外，其他各組均顯著低于對照組（p＜0.05或p＜0.01），其中以0.075%組效果最為理想。分析其原因，日糧中添加復(fù)合蛋白酶之后，有效補(bǔ)充了消化道中內(nèi)源酶的不足，促進(jìn)了消化道對飼料中蛋白質(zhì)或氨基酸的消化吸收，從而使體內(nèi)蛋白質(zhì)合成代謝加強(qiáng)，氮沉積率提高。這與本試驗(yàn)中復(fù)合蛋白酶提高魯煙白豬對粗蛋白質(zhì)及氨基酸表觀消化率的試驗(yàn)結(jié)果相符合。

4　小結(jié)

隨著復(fù)合蛋白酶在玉米-雜粕型日糧中添加水平的提高，魯煙白豬的平均日增重、平均采食量都有所提高，但各組間差異不顯著，耗料增重比顯著降低，復(fù)合蛋白酶為0.075%時，耗料增重比最佳。隨著日糧中復(fù)合蛋白酶的增加，粗蛋白質(zhì)、干物質(zhì)、有機(jī)物的消化率及血清總蛋白含量都顯著提高；血清尿素氮含量隨著蛋白酶添加水平升高而顯著降低。其中添加量為0.075%時，作用效果最理想。

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