周瑞艷 段沖 馮艷 鄭瑞

【摘要】 目的：探討極性蛋白ASPP2在棘層肥厚型皮膚病中的表達特點及意義。方法：選取本院棘層肥厚型皮膚病患者121例，按照疾病種類不同分為濕疹組（n=15）、銀屑病組（n=15）、扁平苔蘚（lichen planus，LP）組（n=20）、結(jié)節(jié)性癢疹組（n=20）、脂溢性角化?。╯eborrheic keratosis，SK）組（n=23）、鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）組（n=13）、基底細(xì)胞癌（basal cell carcinoma，BCC）組（n=15），同時選取正常皮膚組織者30例為正常皮膚組。采用免疫組化方法檢測ASPP2在各組中的表達情況。結(jié)果：ASPP2在濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC和BCC組中的陽性表達率明顯高于正常皮膚組（P<0.05）；腫瘤組（SK、SCC、BCC）中ASPP2陽性表達率明顯高于炎癥性皮膚疾病組（濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP），比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=4.12，P=0.04）；惡性腫瘤組（SCC、BCC）中ASPP2陽性表達率明顯高于良性腫瘤組（SK），比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=4.71，P=0.03）。結(jié)論：極性蛋白ASPP2很可能與濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC和BCC的發(fā)病具有一定的相關(guān)性，且極性蛋白ASPP2在表皮腫瘤中很可能存在完全不同于其他器官組織腫瘤中的調(diào)節(jié)通路。

【關(guān)鍵詞】 棘層肥厚； 極性蛋白； ASPP2； 免疫組化

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and significance of polar protein ASPP2 in acanthosis skin disease.Method：A total of 121 patients with acanthosis skin disease in our hospital were selected.According to the different types of diseases，they were divided into eczema group（n=15），psoriasis group（n=15），lichen planus（LP） group（n=20），prurigo nodularis group（n=20），seborrheic keratosis（SK） group（n=23），squamous cell carcinoma（SCC） group（n=13），basal cell carcinoma（BCC） group（n=15），and 30 cases of normal skin organizer were selected as normal skin group at the same time.Immunohistochemical method was used to detect the expression of ASPP2 in each group.Result：The positive expression rate of ASPP2 in psoriasis，eczema，prurigo nodularis，LP，SK，SCC and BCC group were significantly higher than those of normal skin group（P<0.05），the positive expression rate of ASPP2 in tumor group（SK，SCC，BCC） was significantly higher than that of inflammatory skin disease group（psoriasis，eczema，prurigo nodularis，LP），the difference was statistically significant（ 字2=4.12，P=0.04），the positive expression rate of ASPP2 in malignant tumor group（SCC，BCC） was significantly higher than that of benign tumor group（SK），the difference was statistically significant

（ 字2=4.71，P=0.03）.Conclusion：The polarity protein ASPP2 may be associated with psoriasis，eczema，prurigo nodularis，LP，SK，SCC and BCC，and ASPP2 in epidermal tumors is likely to have completely different from other tissue tumor pathways.

【Key words】 Acanthosis； Polar protein； ASPP2； Immunohistochemical

First-authors address：First Clinical Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.05.007

濕疹（eczema）、銀屑?。╬soriasis）、結(jié)節(jié)性癢疹（prurigo nodularis）及扁平苔蘚（lichen planus，LP）是皮膚科常見的炎癥性疾病；脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）、鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）、和基底細(xì)胞癌（basal cell carcinoma，BCC）是皮膚科臨床上常見的皮膚腫瘤。上述7種常見的皮膚病，迄今為止，發(fā)病機制仍不清楚，但是在病理上均有棘層肥厚的特點，導(dǎo)致表皮增生[1]。既往研究表明，表皮增生性疾病，主要是角質(zhì)形成細(xì)胞增殖加速、分化異常[2-3]。細(xì)胞的增殖和分化涉及細(xì)胞間緊密連接，即表皮的屏障功能。例如，有學(xué)者對銀屑病發(fā)病機制研究發(fā)現(xiàn)，部分識別表皮的基因作為銀屑病的危險因素，可以證明細(xì)胞間緊密連接（即表皮屏障功能）異常是銀屑病發(fā)病的基礎(chǔ)[4]，緊密連接的形成過程中逐漸形成細(xì)胞極性。細(xì)胞極性是指細(xì)胞形狀、物質(zhì)分布和功能的不對稱性，是真核細(xì)胞在水平上遷移、發(fā)育和形成各種器官組織的關(guān)鍵步驟[5]，還有研究認(rèn)為，細(xì)胞極性異常是上皮腫瘤的一個共同特點[6]。所以細(xì)胞極性對于多數(shù)細(xì)胞都是十分重要的屬性。極性蛋白Apoptosis stimulating proteins 2 （ASPP2）是一個p53結(jié)合蛋白家族的促凋亡成員[7]，具有抑制細(xì)胞遷移和增殖的作用[8]，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞間緊密連接和細(xì)胞極性。本項研究用免疫組化SP方法檢測極性蛋白ASPP2在濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC、BCC和正常對照皮膚組織中的表達，并進行差異比較和分析，為濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC、BCC的發(fā)病機制、診斷及治療提供新的理論基礎(chǔ)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年12月-2017年5月本院病理室確診存檔石蠟切塊的棘層肥厚型皮膚病患者121例，同期選取本院門診正常皮膚組織者30例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：病理標(biāo)本取自于本院門診及住院患者；正常皮膚組織取自本院門診接受美容或整形外科手術(shù)者，且均無其他相關(guān)皮膚疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：病理標(biāo)本患者接受其他系統(tǒng)及局部藥物治療。按照疾病種類不同分為濕疹組（n=15）、銀屑病組（n=15）、LP組（n=20）、結(jié)節(jié)性癢疹組（n=20）、SK組（n=23）、SCC組（n=13）、BCC組（n=15）、正常皮膚組（n=30）。各組標(biāo)本臨床資料如下：濕疹組男8例，女7例，平均病程2.3年，平均年齡30.5歲；銀屑病組男8例，女7例，平均病程3.8年，平均年齡37.5歲；LP組男10例，女10例，平均病程1.6年，平均年齡42.5歲；結(jié)節(jié)性癢疹男11例，女9例，平均病程2.6年，平均年齡52.5歲；SK組男11例，女12例，平均病程3.2年，平均年齡56.5歲；SCC組男7例，女6例，平均病程4.1年，平均年齡59.5歲；BCC組男7例，女8例，平均病程3.6年，平均年齡57.5歲；正常皮膚組男14例，女16例，平均年齡38.5歲。本研究已經(jīng)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 方法 主要試劑：兔抗人ASPP2多克隆抗體，即用型SP免疫組化試劑盒均購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。皮膚組織均經(jīng)過常規(guī)石蠟包埋后切成4 μm厚的切片，脫蠟至水，以3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化酶的活性，高壓鍋抗原修復(fù)，滴加正常兔血清封閉液，依次加入一抗、生物素化兔抗山羊IgG、鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物，DAB顯色，自來水充分沖洗，蘇木素復(fù)染，中性樹脂封片。以正常表皮作為對照組，以用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 極性蛋白ASPP2陽性定位于細(xì)胞核，陽性染色為棕黃色至棕褐色顆粒，陰性為淡藍(lán)色，鏡下每張切片選取5個高倍視野，計數(shù)

2 000個細(xì)胞，參考Mohsin等[9]的標(biāo)準(zhǔn)，采用陽性細(xì)胞比例和染色強度綜合評定陽性結(jié)果，即陽性細(xì)胞數(shù)<25%計0分、25%～49%計1分、50%～74%計2分、≥75%計3分；染色+計1分、++計2分、+++計3分。每張切片兩項得分之和≤5分為陰性（-）、>5分為陽性（+）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 極性蛋白ASPP2在皮膚組織中的表達 正常皮膚組織中，ASPP2染色強度強度+～++，分布集中在基底層和棘層，見圖1；在濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP皮膚組織中，ASPP2染色強度強度+～+++，且在表皮基本成彌漫分布，見圖2～5；在SK、SCC及BCC皮膚組織中，ASPP2染色強度強度++～+++，且陽性細(xì)胞在瘤體內(nèi)呈彌漫分布，見圖6～8。

2.2 各組極性蛋白ASPP2表達水平比較 ASPP2在濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC和BCC組中的陽性表達率明顯高于正常皮膚組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其余各組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1；腫瘤組（SK、SCC、BCC）中ASPP2陽性表達率明顯高于炎癥性皮膚疾病組（濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP），比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=4.12，P=0.04），見表2；惡性腫瘤組（SCC、BCC）中ASPP2陽性表達率明顯高于良性腫瘤組（SK），比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=4.71，P=0.03），見表3。

3 討論

正常細(xì)胞極性在細(xì)胞分化、增殖及定向遷移之間平衡的維持中起到關(guān)鍵性的作用，極性失調(diào)與多種增生性皮膚病、一些癌前病變及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[10]。極性蛋白ASPP2是一種腫瘤抑制因子，可以通過增強對p53的依賴，促進細(xì)胞凋亡[11]。至今為止，關(guān)于ASPP2的報道，主要是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移及耐藥性的相關(guān)研究。例如，在肝癌的研究中發(fā)現(xiàn)ASPP2可以抑制肝癌血管的生長和增殖，還可以通過調(diào)節(jié)自噬潮來影響抗癌藥物的耐藥性和敏感性[12]。但目前，關(guān)于ASPP2在增生性皮膚疾病中的研究少之又少。

研究表明，極性蛋白ASPP2可促進間充質(zhì)-上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化（Mesenchymal-Epithelial Transition，MET）[13]，從而導(dǎo)致棘層肥厚，本研究結(jié)果顯示，ASPP2在濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC和BCC組中的陽性表達率明顯高于正常皮膚組織，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Tordella等[14]發(fā)現(xiàn)在胃和宮頸的鱗狀細(xì)胞癌中ASPP2的表達明顯降低，這與本研究中結(jié)果相悖。這說明雖然鱗狀細(xì)胞癌都是來源于上皮，但是表皮作為一種特殊的器官組織，發(fā)病機制與其他器官組織仍然有很大的不同。研究表明，ASPP2在惡性腫瘤中具有抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用[15]。本研究結(jié)果顯示，腫瘤組ASPP2陽性表達率明顯高于炎癥性皮膚疾病組（P<0.05）；惡性腫瘤組ASPP2陽性表達率明顯高于良性腫瘤組（P<0.05）。這是否與表皮惡性腫瘤極少轉(zhuǎn)移有關(guān)，有待于進一步研究。

文獻[16]報道認(rèn)為，極性蛋白ASPP2通過對Par3的影響來控制細(xì)胞的黏附和極性。Par3（PDZ結(jié)構(gòu)劃分缺陷3）是一種分子支架，其功能是招募和組織空間信號因子[17]。大量研究證明，極性失調(diào)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的早期階段與極性蛋白Par3密切相關(guān)[18-19]。ASPP2和Par3作為合作伙伴，可以協(xié)同調(diào)節(jié)上皮和間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間的轉(zhuǎn)化，完成細(xì)胞重塑的過程[13]。在肺、腎等由上皮細(xì)胞組成的組織中，Par3主要是通過a PKC來調(diào)節(jié)細(xì)胞定向遷移和細(xì)胞極性，從而誘導(dǎo)形成正確的組織結(jié)構(gòu)[20]。表皮也是由上皮細(xì)胞構(gòu)成，因此很可能在表皮腫瘤中，極性蛋白ASPP2作為Par3的調(diào)節(jié)因子，通過Par3/a PKC來調(diào)控其病理機制。

綜上所述，極性蛋白ASPP2很可能參與了濕疹、銀屑病、結(jié)節(jié)性癢疹、LP、SK、SCC及BCC的發(fā)病；且極性蛋白ASPP2在表皮腫瘤中很可能存在完全不同于其他組織腫瘤的調(diào)節(jié)通路，很可能與Par3/a PKC共同來完成病理機制過程，有待于進一步研究。

參考文獻

[1]朱學(xué)駿.皮膚病的組織病理學(xué)診斷[M].3版.北京：北京醫(yī)科大學(xué)出版社，2016：6-12.

[2] Smith S H，Jayawickreme C，Rickard D J，et al.Tapinarof Is a Natural AhR Agonist that Resolves Skin Inflammation in Mice and Humans[J].J Invest Dermatol，2017，137（10）：2110-2119.

[3] Yang P P，Peng J，Wu Y Y，et al.Immunohistochemical evaluation of epidermal proliferration，differentiation and melanocytic density in symmetrical acrokeratoderma[J].Clin Exp Dermatol，2017，42（5）：509-515.

[4] Bergboer J G，Oostveen A M，de Jager M E，et al.Paediatric-onset psoriasis is associated with ERAP1 and IL23R loci，LCE3C_LCE3B deletion and HLA-C*06[J].Br J Dermatol，2012，167（4）：922-925.

[5] Rappel W J，Edelstein-Keshet L.Mechanisms of Cell Polarization[J].Curr Opin Syst Biol，2017，3：43-53.

[6] Zhou P J，Xue W，Peng J，et al.Elevated expression of Par3 promotes prostate cancer metastasis by forming a Par3/aPKC/KIBRA complex and inactivating the hippo pathway[J].J Exp Clin Cancer Res，2017，36（1）：139.

[7] Liu Z，Qiao L，Zhang Y，et al.ASPP2 Plays a Dual Role in gp120-Induced Autophagy and Apoptosis of Neuroblastoma Cells[J].Front Neurosci，2017，11：150.

[8] Wang L，Jin X，Lin D，et al.Clinicopathologic significance of claudin-6， occludin， and matrix metalloproteinases-2 expression in ovarian carcinoma[J].Diagn Pathol，2013，8：190.

[9] Mohsin S K，Zhang M，Clark G M，et al.Maspin expression in invasive breast cancer：association with other prognostic factors[J].J Pathol，2003，199（4）：432-435.

[10] Ambrosi F，Righi A，Ricci C，et al.Hobnail Variant of Papillary Thyroid Carcinoma：a Literature Review[J].Endocr Pathol，2017，28（4）：293-301.

[11] Van Hook K，Wang Z，Chen D，et al.ΔN-ASPP2，a novel isoform of the ASPP2 tumor suppressor，promotes cellular survival[J].Biochem Biophys Res Commun，2017，482（4）：1271-1277.

[12] Liu X，Xu J，Wang S，et al.Synergistic inhibitory effects on hepatocellular carcinoma with recombinant human adenovirus ASPP2 and oxaliplatin via p53-independent pathway in vitro and in vivo[J].Int J Oncol，2017，51（4）：1291-1299.

[13] Wang Y，Bu F，Royer C，et al.ASPP2 controls epithelial plasticity and inhibits metastasis through β-catenin-dependent regulation of ZEB1[J].Nat Cell Biol，2014，16（11）：1092-1104.

[14] Tordella L，Koch S，Salter V，et al.ASPP2 suppresses squamous cell carcinoma via RelA/p65-mediated repression of p63[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2013，110（44）：17969-17974.

[15] Posada I M，Serulla M，Zhou Y，et al.ASPP2 Is a Novel Pan-Ras Nanocluster Scaffold[J].PLoS One，2016，11（7）：e0159677.

[16] Kim H，Claps G，M?ller A，et al.Siah2 regulates tight junction integrity and cell polarity through control of ASPP2 stability[J].Oncogene，2014，33（15）：2004-2010.

[17] Archibald A，Mihai C，Macara I G，et al.Oncogenic suppression of apoptosis uncovers a Rac1/JNK proliferation pathway activated by loss of Par3[J].Oncogene，2015，34（24）：3199-3206.

[18] McCaffrey L M，Montalbano J，Mihai C，et al.Loss of the Par3 polarity protein promotes breast tumorigenesis and metastasis[J].Cancer Cell，2012，22（5）：601-614.

[19] Iden S，van Riel W E，Sch?fer R，et al.Tumor type-dependent function of the par3 polarity protein in skin tumorigenesis[J].Cancer Cell，2012，22（3）：389-403.

[20] Castelli M，Boca M，Chiaravalli M，et al.Polycystin-1 binds Par3/aPKC and controls convergent extension during renal tubular morphogenesis[J].Nat Commun，2013，4：2658.