張步彩, 管遠紅, 李 永, 劉培根, 陶建平

(1. 揚州大學獸醫(yī)學院, 江蘇 揚州225009 ;2. 江蘇農牧科技職業(yè)學院, 江蘇 泰州225300)

龔地弓形蟲(Toxoplasma gongdii)是一種細胞內寄生的人獸共患寄生性原蟲,其寄生宿主非常廣泛,包括人類在內200 多種哺乳動物和鳥類,呈世界性流行[1]。 貓首次感染弓形蟲后,可向環(huán)境排出數百萬個卵囊[2]。 有貓經常出入的養(yǎng)殖場,其弓形蟲抗體陽性率往往較無貓出入的養(yǎng)殖場要高[3]。 弓形蟲對豬有較強的致病性,豬暴發(fā)弓形蟲病?？缮婕暗秸麄€豬場,死亡率高達60%以上[4]。 我國豬的弓形蟲病時有報道,各地豬的弓形蟲血清陽性率不盡一致。 為了全面準確地掌握泰州地區(qū)豬弓形蟲病的流行情況,采用間接血凝試驗對泰州市的海陵、高港、姜堰、興化、泰興、靖江等6 個區(qū)、市的豬血清進行了弓形蟲抗體檢測,其目的為泰州地區(qū)豬弓形蟲病的防控提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試劑 弓形蟲間接血凝試驗凍干抗原、標準陽性血清、標準陰性血清、稀釋液,均購自中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.2 豬血清的采集與分離 在泰州6 個區(qū)、市選擇不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場采集血液,飼養(yǎng)頭數小于100 頭的統(tǒng)計為小型豬場,大于500 頭的統(tǒng)計為規(guī)?；i場[5]。 每頭豬采集血液2 ～2.5 mL。 將采集的新鮮血液加到1.5 mL 無菌EP 管中,放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置30 min,自行析出血清后再將EP 管放入4 ℃冰箱中,充分析出血清。 3 000 r/min 離心5 min后,用移液槍吸取位于EP 管中上層的血清至另一個新的無菌EP 管,做好標記后置于-20 ℃保存,待檢。 檢測前,將待檢血清放入56 ℃水浴鍋中孵育30 min。 共采集775 份血清。

1.3 弓形蟲抗體檢測 在96 孔有機玻璃板上進行檢測,弓形蟲IHA 診斷制劑按瓶上標示毫升數加入滅菌蒸餾水稀釋搖勻,1 500 r/min ～2 000 r/min 離心5 ～10 min,棄上清液,加等量稀釋液搖勻,置4 ℃下靜置24 h 后使用。

加稀釋液：用微量加樣器在96 孔有機玻璃反應板的每孔中加0.075 mL 稀釋液。 每個樣品加稀釋液4 孔;每塊板上均設陽性血清、陰性血清、空白對照。

加待檢血清、陽性對照血清、陰性對照血清：第1 孔加相應血清0.025 mL。

稀釋：檢測時稀釋至第3 孔,對照血清稀釋至第7 孔。 檢測的第4 孔和對照的第8 孔為稀釋液對照。

加診斷液：將診斷液搖勻,每孔加0.025 mL 診斷液,加完后將反應板置微型振蕩器上振蕩1 ～2 min,取下反應板,蓋上一塊與反應板大小相近的玻璃置37 ℃作用2 ～3 h 后觀察結果。

1.4 結果判定標準 在陽性對照血清效價不低于1∶1 024,陰性血清除第1 孔有前滯現(xiàn)象“ +”,其余孔和稀釋液對照孔均為“ -”的前提下,對被檢血清進行判定。 被檢血清抗體效價達到或超過1∶64 為陽性。 “ ++”為陽性終點。

判定標準：“ ++++”表示100%紅細胞均勻地呈膜狀凝集在孔底表面,邊緣整齊、致密;“ +++”表示75%紅細胞呈膜狀均勻凝集在孔底表面,而不凝集紅細胞于孔底中央集中成很小的圓點; “ ++”表示50%紅細胞凝集稀疏,不凝集紅細胞于孔底中央成較大圓點;“ +”表示25%紅細胞凝集孔底,不凝集紅細胞于孔底中央集中成大圓點; “ -”表示所有紅細胞均不凝集,孔底中央呈規(guī)則的集中最大圓點。

2 結果

2.1 不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場弓形蟲抗體檢測結果 陽性率為7.61%。 其中,規(guī)?；i場陽性率為4.68%(25/534),小型豬場陽性率為14.11%(34/241);育肥豬的總陽性率為9.94%,斷奶仔豬總陽性率為5.24%,母豬總陽性率為8.57%,公豬陽性率為2.70%;小型豬場育肥豬、斷奶仔豬、母豬陽性率分別為17.31%、9.78%、15.56%;規(guī)?；i場育肥豬、斷奶仔豬、母豬、公豬陽性率分別為6.25%、3.09%、5.26%、2.70%。 見表1。

表1 泰州地區(qū)不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場弓形蟲抗體檢測結果

2.2 不同地區(qū)豬弓形蟲抗體檢測結果 泰州6 個區(qū)、市775 份豬血清弓形蟲抗體檢測結果：海陵、高港、姜堰、興化、泰興、靖江的陽性率分別為7.26%、8.22%、6.20%、6.82%、9.60%、7.56%,其中,小型豬場陽性率分別為12.77%、15.00%、13.16%、11.63%、20.00%、12.12%,規(guī)?；i場陽性率分別為3.90%、5.66%、3.30%、4.49%、4.71%、5.81%。見表2。

3 討論

本次調查采集泰州地區(qū)豬血清775 份,檢測弓形蟲抗體陽性數為59 份,占總調查豬血清樣品的7.61%,孔猛等[6]對泰州興化豬弓形蟲病流行情況調查,檢測113 份豬血清,陽性血清為16 份,陽性率14.2%。 本次調查,采自泰州興化132 份血清,陽性血清9 份,占總調查血清數的6.82%,結果明顯低于孔猛調查的陽性率。

表2 泰州不同地區(qū)豬弓形蟲抗體檢測結果

從飼養(yǎng)模式方面比較。 徐斌[7]調查發(fā)現(xiàn),散養(yǎng)戶豬弓形蟲感染陽性率為75.46%,規(guī)模場陽性率為69.96%。 許正茂等[8]對新疆巴州部分地區(qū)豬感染弓形蟲病現(xiàn)狀調查發(fā)現(xiàn),散養(yǎng)豬場陽性率為16.83%,規(guī)?；B(yǎng)殖場為9.94%,散養(yǎng)豬場陽性率顯著高于規(guī)?；i場。 本次調查也同樣發(fā)現(xiàn)規(guī)?；i場陽性率為4.68%(25/534),小型豬場陽性率為14.12%(34/241),規(guī)?；i場的陽性率明顯低于小型豬場陽性率。 原因分析：一是貓、鼠、蚊和蠅對弓形蟲病傳播的影響。 鄭斌等[9]調查發(fā)現(xiàn),新鄉(xiāng)地區(qū)的豬弓形蟲感染與豬場有貓、鼠和狗的存在、動物流產史等因素相關;二是飼養(yǎng)密度對弓形蟲病感染率的影響。 王正松[10]調查發(fā)現(xiàn),飼養(yǎng)密度大的豬場豬群弓形蟲病的陽性率為24.8%,密度小的陽性率為16.2%;三是衛(wèi)生、消毒措施對弓形蟲病傳播的影響。 規(guī)模化豬場做到科學的衛(wèi)生與消毒措施,小型豬場則不易做到;四是規(guī)?；i場科學應用磺胺類藥物,對弓形蟲有一定的抑制作用,小型豬場用藥則存在無科學合理性。

從樣本種類方面比較。 李英[11]等調查發(fā)現(xiàn),互助縣地區(qū)1 ～4 月齡豬群中弓形蟲的感染率為0%,而5 ～8 月齡的感染率為11.86%,9 ～12 月齡的感染率為18.91%,與1 ～4 月齡的豬相比差異極顯著,表明隨著月齡增加其感染率有上升趨勢。 王正松[10]調查發(fā)現(xiàn),不同周齡對弓形蟲感染率不同,7周齡以內豬群的感染率較低, 為8.8% (0 ～46.2%)、12 ～16 周齡為16.5%(0 ～44.4%)。 本次調查發(fā)現(xiàn),小型豬場育肥豬、斷奶仔豬、母豬陽性率分別為17.31%、9.78%、15.56%;規(guī)模化豬場育肥豬、斷奶仔豬、母豬、公豬陽性率分別為6.25%、3.09%、5.26%、2.70%。 無論是小型豬場還是規(guī)模化豬場,育肥豬陽性率最高,這與李英、王正松的調查相一致。