張寶華 魏巍

摘 要 隨著我國農(nóng)業(yè)技術的不斷發(fā)展，蔬菜的生長期得到了縮短。但由于我國環(huán)境污染的加劇，蔬菜的病蟲害越來越重，導致了農(nóng)藥的廣泛使用，蔬菜需要施放農(nóng)藥后才能夠生長和成熟。蔬菜的農(nóng)藥殘留問題以及食品安全問題已成為社會和群眾普遍關注的問題，加強對蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測，保證蔬菜食用的安全性是急需解決的問題之一。基于此，探討與分析酶抑制法在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測中的效果。

關鍵詞 酶抑制法；蔬菜；農(nóng)藥殘留；檢測技術

中圖分類號：S481+.8 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.09.057

目前，由于市場上的生產(chǎn)者沒有嚴格遵守農(nóng)藥的安全使用準則，導致了農(nóng)藥的超量使用，甚至使用違禁的農(nóng)藥，增加了中毒事件發(fā)生率[1-2]。為了確保我國人民群眾的生命安全，必須嚴格控制農(nóng)藥的使用，加強對蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測。我國對于蔬菜農(nóng)藥殘留主要通過酶抑制法進行檢測，酶抑制法具有時間短、效率高的特點，對于檢測人員技術要求水平較低，在我國蔬菜生產(chǎn)基地、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機構中運用較為廣泛，能夠保證蔬菜產(chǎn)品的安全性。

1 蔬菜農(nóng)藥殘留

農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中施用農(nóng)藥后都會殘留農(nóng)藥，農(nóng)藥可殘留于蔬菜產(chǎn)品中，也可以殘留于水或土中，此種現(xiàn)象則被成為農(nóng)藥殘留[3]。農(nóng)藥污染較為嚴重的有小白菜、油菜、韭菜等葉類蔬菜。相關文獻報道，目前世界上農(nóng)藥的品種已經(jīng)達到上千種，常見的有殺蟲劑、除草劑、生長調(diào)節(jié)劑等，農(nóng)藥殘留嚴重危害人體的身體健康，嚴重者可能導致人體大腦、血液等受到損傷。

2 蔬菜農(nóng)藥殘留檢測的必要性

近年來，隨著病蟲害發(fā)生頻率的增加，農(nóng)藥的品種和毒性也在隨之增強，農(nóng)藥的使用有效的防治了病蟲害，為農(nóng)業(yè)帶來了巨大的豐收，但同時也嚴重破壞了生態(tài)系統(tǒng)的平衡，加重了生態(tài)壞境的惡化程度。殘留的農(nóng)藥會通過蔬菜等食品進入人體，食用含有農(nóng)藥殘留的蔬菜會導致人體急性中毒，長期食用農(nóng)藥殘留超標的蔬菜，可能引起慢性中毒，嚴重者甚至誘發(fā)癌癥[4]。我國十分重視農(nóng)藥的檢測，制定了一系列的法律法規(guī)來控制農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留值，如《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》《農(nóng)藥合理使用準則》等，降低農(nóng)藥對蔬菜的污染，切實保障大眾人群的健康和安全。

3 蔬菜農(nóng)藥殘留檢測技術

蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測方法大致可以分為快速檢測技術、色譜法、光譜法、酶抑制法等。1）快速檢測技術主要是以氧化還原反應為檢測依據(jù)，產(chǎn)物與檢測液發(fā)生作用后會變色，但該方法靈敏度較低，局限性較強，并且受到還原性物質(zhì)的影響，因此應用價值較低。2）色譜法能夠?qū)κ卟酥修r(nóng)藥的殘留進行定量分析，靈敏度較高，但該方法儀器投資大、檢測時間長，同時對技術的要求較高，不利于在基層中推廣使用。3）光譜法對樣品處理的要求較低、環(huán)境污染小、分析速度快，但光譜法只能檢測一種有機磷農(nóng)藥，因此靈敏度較為缺乏，不能作為主要檢測方法。酶抑制法具有快速、靈敏、成本低、操作便利等特點，成為蔬菜農(nóng)藥殘留檢查的標準方法之一。

4 酶抑制法檢測蔬菜農(nóng)藥殘留

4.1 檢測原理

乙酰膽堿是生物神經(jīng)傳導中重要的一種酶，能夠保證神經(jīng)沖動的正常傳導，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能夠抑制昆蟲的中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的乙酰膽堿活動，大量積累乙酰膽堿，對正常神經(jīng)傳導造成影響，從而導致昆蟲中毒而死[5]。酶抑制法則是通過昆蟲中毒原理進行農(nóng)藥殘留的檢測，將特異性抑制膽堿酯酶與樣品提取液進行反應，若特異性抑制膽堿酯酶受到抑制，則說明樣品中含有農(nóng)藥殘留。

4.2 檢測范圍

1）蔬菜。綠葉菜、白菜、瓜菜、果菜、豆菜、根莖類、茄果類、蔥蒜類等，其中，小白菜、空心菜等極易殘留農(nóng)藥，因此需要著重進行監(jiān)測。

2）農(nóng)藥。有機磷類農(nóng)藥，如甲胺磷、對硫磷、馬拉硫磷、甲基內(nèi)吸磷、甲基對硫磷、敵百蟲、敵敵畏等；氨基甲酸酯類農(nóng)藥，如涕滅威、呋喃丹、葉蟬散、異索威、西維因等。

4.3 檢測條件

室溫保持在25～30 ℃，室內(nèi)濕度不能高于85%[6]。

4.4 檢測方法

儀器主要采用農(nóng)藥殘毒快速檢測儀、電子天平、蒸餾水機、玻璃儀器、電熱恒溫培養(yǎng)箱、微型樣品混合器、移液槍等，試劑需要準備乙醇膽堿酯酶、顯色劑、緩沖劑等。1）配制緩沖液、專用酶、底物、顯色劑，并置于合適的條件下保存。2）采集蔬菜樣品且隨后進行混合。采用電子天平稱取樣品4 g，置于玻璃儀器中，加入20 mL緩沖液震蕩后倒出提取液，放置5 min左右，采用移液槍移取酶于玻璃儀器后置于電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)放置30 min。3）使用分光光度計進行吸光度測定。蔬菜農(nóng)藥殘留的范圍要控制在-10%～110%，超過此范圍則表明操作失誤，需要重新檢測。

5 注意事項

5.1 選擇安全的蔬菜

采用酶抑制法進行檢測時，需要注意蔬菜的安全狀況，采用安全的蔬菜進行檢測。其中，抑郁率≥70%，則說明蔬菜不安全；當抑制率為50%～70%時，說明蔬菜存在一定的安全隱患；當抑制率為40%～50%時，說明蔬菜較為安全；當抑制率≤40%時，說明蔬菜安全[7]。對于抑制率≥50%以上的蔬菜，需要進一步采用色譜法定性定量進行檢測與分析，確定農(nóng)藥殘留的真實超標情況。

5.2 選擇合適的酶源

酶抑制法檢測技術中，常用的酶有植物酶、家畜肝臟酶、人體血漿酶、蠅頭部腦酯酶等，不同酶的敏感性各不相同，對于蔬菜農(nóng)藥檢測來說，采用蠅頭部乙酰膽堿的效果最好，將分離純化后的醇液作為乙酰膽堿酯酶源進行檢測，可靠性和準確性較高。

5.3 選擇合適的抑制劑

蔬菜農(nóng)藥殘留檢測中，酶活性和農(nóng)藥的濃度互相關聯(lián)，酶活性會對農(nóng)藥殘留檢測結果的準確性和靈敏度造成一定的影響，部分有機磷農(nóng)藥抑制乙酰膽堿酯酶的效果較為微弱，大部分乙酰膽堿酯酶抑制劑濃度為6～

10 mol·L-1，抑制5～50 min，即可抑制酶的活性。

5.4 注意酶的固定化

蔬菜農(nóng)藥殘留檢測中需要注意酶的固定化，酶的固定化技術中常見的分為吸附法、交聯(lián)法、電聚合法等。隨著我國技術的不斷完善和發(fā)展，開始形成了以吸附-交聯(lián)法為主固定化技術，乙酰膽堿酯酶膜進行制備時，pH值會升高，從而達到了固定乙酰膽堿酯酶的目的，降低了酶分子之間的作用，減少了影響酶活動的因素，提高了酶膜的可用性。

5.5 做好酶的活動控制

酶的活性直接影響到蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測結果，保衛(wèi)時間、溫度、pH值等都會對酶活性造成一定的影響，相關文獻報道，蠅頭部乙酰膽堿酯酶的最佳保溫時間為15 min、溫度為37 ℃、pH值為7.2～8.0；肝臟酶的最佳保溫時間為28 min、溫度為30 ℃、pH值為7.6；肌肉酶的最佳保溫時間為31 min、溫度為31 ℃、pH值為7.6；魚腦酶的最佳保溫時間為35 min、溫度為32 ℃、pH值為7.6[8]。檢測過程中，具體的保溫時間、溫度、pH值需要根據(jù)不同的酶進行控制。

6 結語

酶抑制法是目前常用的一種控制高殘留、高毒農(nóng)產(chǎn)品流入市場的方法，蔬菜農(nóng)藥殘留檢測技術能夠幫助人們掌握蔬菜生產(chǎn)的質(zhì)量和安全，并且能夠防止不合格蔬菜進入市場，同時，通過對蔬菜進行檢測，能夠及時發(fā)現(xiàn)蔬菜生產(chǎn)中存在的問題，根據(jù)這些問題制定相應的解決措施，不斷完善和調(diào)整生產(chǎn)方案，指導蔬菜生產(chǎn)者科學合理的使用農(nóng)藥，推動我國農(nóng)產(chǎn)品事業(yè)的進步和發(fā)展。但在蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測中，酶抑制法只能檢測有機磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，對其他農(nóng)藥的檢測無效，因此需要結合定性與定量的方式進行檢測?？傮w來說，酶抑制檢測法應通過在實踐和操作中不斷完善和發(fā)展，力求提高檢測數(shù)據(jù)的準確性，完善蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測技術，為市場農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全提供保障。

參考文獻：

[1] 王毅紅，徐為霞，郭智廣.酶抑制法在快速檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留應用中的探討[J].理化檢驗-化學分冊，2016，52（5）：558-560.

[2] 鄒孝，鄒春艷，龍梅，等.果蔬農(nóng)藥殘留快速檢測方法研究的進展[J].科技與創(chuàng)新，2016（12）：129.

[3] 王艷樹，馬濤，王琴，等.酶抑制法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留存在的不足及提高檢測準確性的途徑[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（1）：104-105.

[4] 張登科，郝程列，鐘凱，等.果蔬農(nóng)藥殘留快速檢測固定化酶片的制作研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2017，45（28）：81-84.

[5] 黃歡，黃敬洲.微生物酯酶用于檢測有機磷農(nóng)藥殘留的研究[J].企業(yè)科技與發(fā)展，2017（6）：68-70.

[6] 李志成，鄭曉冬，閆新煥，等.快速檢測技術在果蔬農(nóng)藥殘留檢測中的應用[J].中國果菜，2016（12）：33-36.

[7] 曾慶華，宋偉華，樊琛，等.酶抑制-比色法檢測聊城市果蔬有機磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2016，55（21）：5634-5637.

[8] 金彬，沈群超，吳碧波，等.蔬菜農(nóng)藥殘留速測酶制劑的比較[J].浙江農(nóng)業(yè)科學，2016，57（4）：517-519.

（責任編輯：趙中正）