常鵬環(huán)，楊澤妹，林 鈴，陳 霞，林衛(wèi)瓊，王海燕，林莉香，楊照新

(1.?？谑腥嗣襻t(yī)院婦產(chǎn)科，?？?570208； 2.海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安評中心，?？?571199)

全子宮切除術(shù)是婦科領(lǐng)域常見的手術(shù)，但近代研究表明全子宮切除術(shù)對卵巢內(nèi)分泌功能具有一定程度的影響，易造成卵巢功能衰退[1-3]。隨著學(xué)者們不斷的深入研究，全子宮切除術(shù)實驗動物模型越發(fā)受到重視。本實驗以BALB/c雌性小鼠為研究對象，建立全子宮切除術(shù)實驗動物模型，并對術(shù)后卵巢內(nèi)分泌功能以及組織形態(tài)等指標(biāo)進(jìn)行了研究和分析，以探討該模型的優(yōu)勢及特點，現(xiàn)報道如下。

圖1 全子宮切除術(shù)式示例圖Fig.1 Sample pictures of total hysterectomy in the mice

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級BALB/c雌性小鼠24只，體重18～20 g，4～6周齡，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供[SCXK(湘)2016-0002]；所有動物飼養(yǎng)及無菌手術(shù)均在海南省藥物安全性評價研究中心屏障動物實驗設(shè)施內(nèi)進(jìn)行[SYXK(瓊)2016-0013]。并按實驗動物使用的3R原則給予人道關(guān)懷，福利倫理審查證號2017006DE。

1.2 主要試劑及儀器

Estradiol Parameter Assay KIT(KGE014，美國RD公司)；Multiskan FC型全波段酶標(biāo)儀(Thermo Scientific)；VIP 3000 型氣體麻醉系統(tǒng)(美國Matrx公司)。

1.3 實驗分組及模型建立方法

將BALB/c雌性小鼠隨機(jī)分為空白對照組，假手術(shù)組和模型組，每組8只；空白對照組不予任何處理，常規(guī)飼養(yǎng)；模型組采用MatrxVIP3000型氣體麻醉系統(tǒng)對實驗動物進(jìn)行持續(xù)氣體麻醉，麻醉劑為異氟烷[4-5]。待動物麻醉平穩(wěn)后，取仰臥位，常規(guī)消毒腹部皮膚，于下腹正中橫切約0.5 cm的切口(見圖1 A)，暴露子宮，分離左右側(cè)雙角子宮，在子宮角與卵巢連接處剪斷子宮，并完整剝離子宮，切勿損傷卵巢及與子宮伴行的血管(見圖1B)。然后在子宮頸口與陰道連接部位，先用0-1號手術(shù)線進(jìn)行結(jié)扎(見圖1C)，在子宮頸結(jié)扎部位上方剪下子宮(見圖1D)，關(guān)閉腹腔，縫合皮膚并消毒(見圖1E)；假手術(shù)組麻醉后僅切開皮膚，暴露子宮，不做任何操作，于5 min后縫合皮膚，關(guān)閉腹腔；術(shù)前12 h禁食禁飲，術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲食，術(shù)前術(shù)后記錄動物體重。于術(shù)后28 d，摘眼球采血，分離血清，采用ELISA法檢測外周血雌二醇含量；分離左右側(cè)卵巢，4%中性甲醛固定，常規(guī)HE染色。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般癥狀觀察

小鼠術(shù)后3～5 h內(nèi)清醒，少動，步態(tài)蹣跚，弓背，輕微顫抖，痛苦狀態(tài)，12 h后緩解，并能自由飲食。術(shù)后飼養(yǎng)期間各組實驗動物均未見明顯行為及精神狀態(tài)等異常表現(xiàn)，腹部切口未見明顯滲出及炎癥等表現(xiàn)，5～7 d切口完全愈合。

2.2 體重變化

各組實驗動物術(shù)前體重未見明顯差異，2周末和3周末模型組小鼠體重較對照組和假手術(shù)組高(P< 0.05)，至4周末已明顯高于對照組和假手術(shù)組(P< 0.01)。(見表1)

2.3 外周血雌二醇變化

術(shù)后四周末模型組小鼠外周血雌二醇含量明顯低于對照組和假手術(shù)組(P< 0.01)，假手術(shù)組與空白對照組比較差異無顯著性(P> 0.05)。(見表2)

表 1 各組實驗動物術(shù)前及術(shù)后體重變化結(jié)果Tab.1 Changes of the preoperative and postoperative body weight in the mouse groups

注：與空白對照組比，*P< 0.05，**P< 0.01；與假手術(shù)組相比，#P< 0.05，##P< 0.01。

Note.Compared with the control group,*P< 0.05,**P< 0.01. Compared with the sham-operated group,#P< 0.05,##P< 0.01.

表 2 各組實驗動物外周血雌二醇檢測結(jié)果Tab.2 Measurement of estradiol in the mouse groups

注：與空白對照組比，*P< 0.01；與假手術(shù)組相比，#P< 0.01。

Note.Compared with the control group,*P< 0.01. Compared with the sham-operated group,#P< 0.01.

2.4 卵巢組織學(xué)檢查結(jié)果

陰性對照組和假手術(shù)組為正常卵巢組織；模型組鏡下多數(shù)卵泡形態(tài)不規(guī)則，可見偏位，顆粒細(xì)胞松散、固縮，部分凋亡。

注：(A)陰性對照組；(B)假手術(shù)組；(C)模型組。圖2 卵巢組織學(xué)檢查結(jié)果示例圖(×400)Note.(A)Control group.(B)Sham operation group.(C)Model group.Fig.2 Examples of histological changes of the mouse ovaries

3 討論

全子宮切除術(shù)自初創(chuàng)以來已有百余年的歷史，是婦科領(lǐng)域常見的手術(shù)，適用于子宮肌瘤、惡性腫瘤等多種婦科疾病。但隨著學(xué)者們不斷的研究和發(fā)現(xiàn)，子宮不僅是一個受激素作用的靶器官，也是一個功能復(fù)雜的內(nèi)分泌器官，切除子宮術(shù)后可影響卵巢的血運及卵巢功能，使卵巢功能衰退[2-3]，而僅僅切除輸卵管，并不引起其功能衰退[6]。隨著研究的深入，該術(shù)式動物模型越來越受到學(xué)者的重視，本實驗通過建立BALB/C種小鼠全子宮切除術(shù)模型，首次在該種小鼠身上模擬出全子宮切除術(shù)以及術(shù)后卵巢功能衰退、體重增加以及組織形態(tài)學(xué)等臨床表現(xiàn)。該術(shù)式模型可滿足機(jī)制和機(jī)理相關(guān)研究，并且具有模型動物存活率高，宜操作等優(yōu)點，主要風(fēng)險來源于麻醉意外和術(shù)后感染。

本研究通過檢測外周血清雌二醇含量發(fā)現(xiàn)：該造模方法可使模型小鼠外周血雌二醇含量明顯降低，較對照組和假手術(shù)組存在明顯差異。目前已有大量研究表明絕經(jīng)前行全子宮切除術(shù)，可使卵巢功能發(fā)生衰退[7-8]。子宮除了是胎兒繁育場所，也參與調(diào)節(jié)局部及全身的生理、病理過程，維持機(jī)體精確的動態(tài)平衡，切除子宮不僅破壞了這種平衡，也使卵巢功能發(fā)生衰退[9]。此外，子宮切除術(shù)由于鄰近血管的結(jié)扎及術(shù)后粘連，也影響卵巢的血運，造成卵巢功能的早衰，使血清雌激素水平下降[10]。這種卵巢功能的衰退和血供受損，在組織形態(tài)上主要表現(xiàn)為卵巢內(nèi)卵泡數(shù)量減少及細(xì)胞凋亡、間質(zhì)增生等[11]。本研究中也發(fā)現(xiàn)模型組小鼠鏡下多數(shù)卵泡形態(tài)不規(guī)則，可見偏位，顆粒細(xì)胞松散、固縮、部分凋亡，與文獻(xiàn)報道基本一致。

雌激素對維持女性體重的穩(wěn)定起著調(diào)節(jié)作用，在雌激素不足情況下會導(dǎo)致發(fā)熱、情緒波動、肥胖等癥狀[12]。使用雌激素替代治療能夠明顯改善這些癥狀，減輕體重增加并阻止脂肪的重新分配[13]。在本研究中模型組小鼠術(shù)后2周末體重已經(jīng)開始升高，至3、4周末明顯高于對照組和假手術(shù)組，與文獻(xiàn)報道相符合。

下丘腦是能量平衡的調(diào)節(jié)器，在下丘腦中的一些區(qū)域，已被證明含有雌激素受體ERα/ERβ。此外，在脂肪等組織也發(fā)現(xiàn)雌激素受體，這些受體被認(rèn)為雌激素可以對脂肪組織有直接的影響作用[14]。有文獻(xiàn)表明：當(dāng)雌激素受體缺失或雌激素減少時，可導(dǎo)致體重增加[15]。Campello等[16]也證實了雌二醇可通過誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)運載體-4(GLUT-4)的調(diào)控，提高胰島素刺激的葡萄糖攝取率，改善胰島素敏感性。在本研究中也發(fā)現(xiàn)模型組卵巢功能的衰退，雌激素分泌減少，可通過雌激素代謝調(diào)節(jié)作用，引起模型小鼠體重增加。

綜上所述，本實驗所采用的BALB/c種小鼠全子宮切除術(shù)模型，可在短時間內(nèi)建立與人體相似癥狀和體征的動物模型，該模型可以很好的模擬人全子宮切除術(shù)后卵巢功能衰退、體重增加等發(fā)病過程，是研究子宮切除術(shù)后并發(fā)癥及篩選治療藥物理想的動物模型。

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