吳曹英 鄒云敏 于世榮 張德志 康曉靜

共聚焦激光顯微鏡(confocal laser scanning microscopy，簡稱CLSM)是一種新的皮膚成像技術(shù)，因其具有實時性、無創(chuàng)性、可重復(fù)性、高分辨率等特點，國內(nèi)外學(xué)者利用CLSM對皮膚色素障礙性皮膚病[1]、皮膚腫瘤[2]、炎癥性疾病[3]等多種疾病進行觀察，并且對某些疾病治療前后進行對比療效觀察[4]，目前已廣泛應(yīng)用于臨床皮膚科的檢測中。毛囊蠕形螨又稱毛囊螨、螨蟲、毛囊蟲，常棲居在人的毛囊及皮脂腺，多在面部，尤其是皮脂腺分泌旺盛的部位，如鼻部、頰部、額部、下頜等。少數(shù)的蟲體感染并不引起癥狀。但由于其蟲體繁殖快，自身代謝產(chǎn)物及蟲體崩解物刺激可引起局部炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致多種面部皮膚病的發(fā)生，如酒渣鼻樣皮炎、痤瘡等。在CLSM中蠕形螨表現(xiàn)為毛囊漏斗部環(huán)狀結(jié)構(gòu)(蠕形螨的橫斷面)[5]。Sattler首先將CLSM用于毛囊蠕形螨的檢測和計數(shù)[6]，并對酒渣鼻患者和正常人群面部蠕形螨計數(shù)進行比較，提示酒渣鼻患者面部蠕形螨數(shù)量明顯高于正常人群。但并未將CLSM檢測結(jié)果與鏡檢結(jié)果相比較。直接鏡檢觀察到蟲體是檢測毛囊蟲的金標(biāo)準(zhǔn)，但檢測多個部位過程繁瑣，且不能清晰地觀察每個毛囊的感染情況，故本研究將直接鏡檢結(jié)果與CLSM結(jié)果相比較，以期觀察CLSM在面部蠕形螨檢測中的優(yōu)勢。

1 對象與方法

1.1 對象 選取近4個月就診于我院門診的患者180例，其中男29例，女151例，年齡15～80歲，平均(38±13.18)歲；漢族110例，維吾爾族45例，回族17例，哈薩克族8例。臨床考慮酒渣鼻樣皮炎93例，痤瘡56例，脂溢性皮炎31例。

1.2 方法 分別于兩側(cè)鼻翼旁、鼻尖部、下頜部、額部共五個部位進行CLSM檢查，每個部位進行一個4×4 mm Block掃描(約30～100個毛囊，平均51個毛囊)，觀察受累及的毛囊數(shù)目。并記錄毛囊蠕形螨的數(shù)量，每個毛囊≥4只以上記錄為強陽性，1～3只記錄為陽性。這些患者24小時不洗臉不外用護膚產(chǎn)品，帶清潔手套擠壓鼻翼兩側(cè)皮膚，取擠壓出的分泌物置于載玻片上，滴石蠟油后直接顯微鏡下觀察，記錄陽性結(jié)果。

1.3 檢測指標(biāo) CLSM蠕形螨陽性表現(xiàn)為：在擴張的毛囊內(nèi)有一個或多個環(huán)形、橢圓形、錐形灰色或高折光結(jié)構(gòu)，周圍有透明環(huán)(圖1)。鏡檢陽性：視野下可見一個或多個蠕形螨蟲體(圖2)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行分析，采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 蠕形螨在CLSM檢查中呈多種形態(tài)表現(xiàn)，紅色數(shù)字標(biāo)記個數(shù)

圖2 鏡檢螨蟲陽性可直接觀察蠕形螨蟲

2 結(jié)果

180例患者中CLSM蠕形螨檢測陽性124例，其中強陽性38例(21%)。見表1。

表1 兩種檢測方法的陽性結(jié)果比較

注：兩種方法比較，χ2=3.9，P<0.05

4 討論

幾乎所有人面部都存在蠕形螨，健康人皮膚表面蠕形螨≤5個/cm2。少量蠕形螨并不會引起臨床癥狀，但當(dāng)人們發(fā)生面部疾病，同時又鏡檢出蠕形螨，往往會將兩者聯(lián)系起來，但此時的蠕形螨是正常寄生還是致病原因就容易混淆。傳統(tǒng)的檢測方法是直接鏡檢，而且陽性率不低，但是這個結(jié)果并不能告知我們螨蟲的感染程度及毛囊的受累情況。

在本研究中，對面部蠕形螨多發(fā)部位如額部、兩側(cè)鼻翼旁、下頜、鼻部進行多點檢測，并每個點掃描4 mm×4 mm Block，可同時觀察到多個毛囊的受累情況，并同時記錄毛囊蠕形螨的計數(shù)(取數(shù)量最多者記錄)，其陽性率明顯高于鏡檢取材結(jié)果。但由于直接鏡檢多點取材觀察結(jié)果記錄較繁瑣，且蠕形螨數(shù)量并不能反映每個毛囊的感染情況，故無法進行陽性、強陽性分組。這很好的說明了CLSM能簡便直觀的觀察毛囊蠕形螨這一特點。不過沒有哪一項研究明確表明單位面積蠕形螨達到某一確定數(shù)量會引起皮膚疾病，本研究中人為的將CLSM檢測結(jié)果分為陽性、強陽性，其目的在于提示CLSM在蠕形螨的檢測中有更清晰、可計數(shù)的優(yōu)勢。而蠕形螨計數(shù)呈強陽性是否會導(dǎo)致面部疾病，則需要更多的臨床數(shù)據(jù)支持。

另外CLSM還能監(jiān)測蠕形螨的治療效果。有研究[7]對8例患者治療前后進行CLSM檢測，治療前均有10%以上毛囊感染，治療后有50%患者癥狀改善且蠕形螨檢測完全消失，癥狀未改善的病例蠕形螨也沒有消失。他們認(rèn)為直接鏡檢陰性而CLSM陽性的病例可能是蠕形螨的數(shù)量較少或需要多點取材，而CLSM無論蠕形螨多少，可以直觀的觀察到,并且可以多點重復(fù)檢查，減少漏診。不過也有學(xué)者提出[8]，CLSM只能觀察毛囊漏斗表面200～300 μm的范圍，更深的蠕形螨CLSM無法觀察，而且直接鏡檢蠕形螨已經(jīng)實行數(shù)十年，技術(shù)成熟，易操作，而CLSM儀器昂貴，檢查費用相對較高。但是CLSM以一種新的蠕形螨檢查方法，且較直接鏡檢更敏感，同時具有無創(chuàng)性、可重復(fù)性、可計數(shù)等優(yōu)勢，可廣泛運用于臨床檢驗中。

[1] Xiang WZ, Xu AE, Xu I.The application of dermal papillary rings in dermatology by in vivo confocal laser scanning microscopy[J].Laser Physics,2010,20(8):1767-1773.

[2] Eicherl S, Mohtie M, Breuninger H,et al.Diagnosis of cutaneous tumors with in vivo confocal laser scanning microscopy[J].Dtsch Dermatol Ges,2010,8(6):400-410.

[3] 林燕，劉華緒，張福仁.共聚焦激光掃描顯微鏡在皮膚科的應(yīng)用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2014,13(3)：198-201.

[4] 張靜,徐麗敏,梁淑靜,等.尋常性銀屑病局部治療前后共聚焦激光掃描顯微鏡觀察[J].臨床皮膚科雜志,2011,40(3):147-149.

[5] 劉華緒,林燕,于世榮,等.反射式共聚焦顯微鏡皮膚病圖譜[M].人民衛(wèi)生出版社,2013.31.

[6] Sattler EC, Maier T, Hoffmann VS, et al.Noninvasive in vivo detection and quantification of demodex mites by confocal laser scanning microscopy[J].Br J Dermatol,2013,169(1):213-215.

[7] 孫瑞鳳.共聚焦激光顯微鏡在毛囊蠕形螨病診斷和治療監(jiān)測方面的優(yōu)勢[J].實用皮膚性病學(xué)雜志，2013，4：255-256.

[8] Lacey N, Forton FMN, Powell FC.Demodex quantification methods:limitations of confocal laser scanning microscopy[J].Br J Dermatol，2013，3：168-212.