曹麗群　曠開其　王清　鄒彬彬　譚智文　謝毓濱

[摘要] 目的 分析獻(xiàn)血者ABO血型鑒定困難的原因，保證血型鑒定的準(zhǔn)確。方法 收集2012年1月—2015年12月長沙地區(qū)221名微板比色法檢測的ABO血型正反定型不符的樣本，運(yùn)用經(jīng)典的試管法進(jìn)行系統(tǒng)的ABO血型血清學(xué)鑒定。結(jié)果 221名ABO血型鑒定困難的原因依次為：抗體減弱（51.13%）、存在同種抗體（15.84%）、ABO亞型（14.48%）、其他原因（11.77%）、存在冷凝集素（5.88%）、抗原減弱（0.90%）。共檢出32例ABO亞型，其中7例存在不規(guī)則抗A或抗B抗體。結(jié)論 ABO血型鑒定困難的樣本，采用正確的處理方案，可以得到正確的結(jié)果，既不浪費(fèi)血液資源，也可保障輸血安全。

[關(guān)鍵詞] ABO血型；鑒定困難；解決方案

[中圖分類號(hào)] R457 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2018）10（c）-0001-03

Causes and Solution Plans of Difficulty in Identification of ABO Blood Group of 221 Cases of Blood Donors

CAO Li-qun， KUANG Kai-qi， WANG Qing， ZOU Bin-bin， TAN Zhi-wen， XIE Yu-bin

Changsha Blood Center， Changsha， Hunan Province， 410001 China

[Abstract] Objective To analyze the causes of difficulty in identification of ABO blood group of 221 cases of blood donors and ensure the accuracy of blood type identification. Methods The samples of unconformity of positive and reverse ABO blood typing tested by the microplate colorimetric method of 221 cases in the Changsha from Januaty 2012 to December 2015 were collected， and the classic test method was used for systematic ABO serological identification of blood group. Results The causes of difficulty in identification of ABO blood group of 221 cases of blood donors： antibody weakened（51.13%）， having the same type of antibody （15.84%）， ABO subtype （14.48%）， other causes（11.77%），having cold agglutinin（5.88%） and antigen weakened（0.90%）， the ABO subtype of 32 cases was tested， including 7 cases with irregular antibody A or B. Conclusion The accurate treatment plan for samples with difficulty in identification of ABO blood group can obtain an accurate result， which does not waste the blood resources and ensure the blood transfusion safety.

[Key words] ABO blood type； Difficulty in identification； Solution

血型是血液中各種成分的遺傳多態(tài)性標(biāo)志。自1900年Karl Landsreiner 發(fā)現(xiàn)人類第一個(gè)血型系統(tǒng)—ABO血型系統(tǒng)至今，人們已發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞上有36個(gè)血型系統(tǒng)，300多種血型抗原。其中ABO血型系統(tǒng)是人類血型系統(tǒng)中抗原免疫性最強(qiáng)的一個(gè)血型系統(tǒng)，而且有著其他血型系統(tǒng)所沒有的獨(dú)特性質(zhì)。具體表現(xiàn)在：血清中常存在反應(yīng)強(qiáng)的抗體，而紅細(xì)胞上缺乏相應(yīng)的抗原，許多組織細(xì)胞分泌液中也有規(guī)律地存在著A、B、H抗原。這兩種特有的性質(zhì)使ABO血型系統(tǒng)成為輸血與器官移植中最重要的血型系統(tǒng)[1]。ABO血型鑒定的正確與否對于獻(xiàn)血者本身及保障臨床輸血安全都非常重要，該研究對2012年1月—2015年12月長沙地區(qū)無償獻(xiàn)血人群中篩出的221名ABO血型鑒定困難的樣本進(jìn)行了系統(tǒng)的血型血清學(xué)鑒定，現(xiàn)將產(chǎn)生原因及解決方案報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集長沙地區(qū)無償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血后留取的EDTA-K2抗凝靜脈血標(biāo)本，所有獻(xiàn)血者均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求（GB18467-2011）》。

1.2 主要試劑

抗-A、抗-B單克隆標(biāo)準(zhǔn)血清（長春博德生物制藥有限責(zé)任公司、上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；反定型ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，直接抗球蛋白試劑，抗-M、抗-N、抗-H、抗-A1，不規(guī)則抗體篩查細(xì)胞，抗體鑒定譜細(xì)胞（均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)）；抗AB（Diagast）；凝聚胺介質(zhì)試劑（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）；以上試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 主要儀器設(shè)備

全自動(dòng)智能加樣系統(tǒng)（TECAN EVO， STAR，XANTUS），酶標(biāo)儀（TECAN SUNRISE），震蕩儀（微孔板恒溫震蕩器），血型血清學(xué)離心機(jī)（KUBOTA KA-2200），光學(xué)顯微鏡（Olympus CX21）等。

1.4 方法

1.4.1 血型初篩 使用抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清，采用紙板法進(jìn)行ABO血型正定型檢測，并在標(biāo)本管上標(biāo)示初篩血型。

1.4.2 血型復(fù)查 采用抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清50 μL分別與濃度為3%的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞反應(yīng)，判讀正定型結(jié)果；采用A型、B型紅細(xì)胞試劑50 μL分別與獻(xiàn)血者血清50 μL反應(yīng)，判讀反定型結(jié)果。ABO正反定型檢測采用微板比色法進(jìn)行，儀器加樣完成后采用震蕩儀充分混勻，靜置1 min，最后使用酶標(biāo)儀判讀結(jié)果。對于凝集強(qiáng)度不均，血型判定困難，或者ABO正反定型不符的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查后仍血型確定困難時(shí)，送輸血研究室進(jìn)一步鑒定。

1.4.3 血型鑒定 采用試管法進(jìn)行系統(tǒng)的血型血清學(xué)鑒定。鑒定實(shí)驗(yàn)包括：重新做正反定型，發(fā)現(xiàn)異常時(shí)根據(jù)具體情況增加實(shí)驗(yàn)，正定型實(shí)驗(yàn)增加抗-AB、抗-A1、抗-H試劑或者換用不同廠家的抗-A，抗-B試劑，反定型實(shí)驗(yàn)增加試劑O細(xì)胞和自身細(xì)胞做為補(bǔ)充對照，改變溫度（室溫、4℃和37℃）或改變血清量（如懷疑抗體減弱時(shí)，血清量加倍）等方法比較反應(yīng)強(qiáng)度變化，不規(guī)則抗體篩選及鑒定；吸收放散實(shí)驗(yàn)等。

2 結(jié)果

該次研究共檢出221名ABO血型鑒定困難樣本，其中最常見的原因是抗體減弱，占51.13%，其次是同種抗體的存在及ABO亞型，其他原因，冷凝素的存在，抗原減弱也是重要的干擾因素。2012年1月—2015年12月ABO血型鑒定結(jié)果不明確的原因分析見表1。其中，共檢出32名共11種ABO亞型樣本，其中7例存在IgG類抗A或抗B抗體，其檢出情況見表2。

3 討論

患者輸注ABO血型不合的血液后會(huì)出現(xiàn)急性溶血性輸血反應(yīng)。進(jìn)行輸血前交叉配合實(shí)驗(yàn)，可以有效預(yù)防溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。而準(zhǔn)確地對患者及獻(xiàn)血者進(jìn)行ABO血型鑒定是保證交叉配血成功的基礎(chǔ)。ABO血型鑒定的過程中難免遇到疑難血型，如何選擇合適的血液輸注給合適的患者，常常困擾著輸血科工作人員。事實(shí)上，只要避開抗原抗體反應(yīng)，遵循抗原少輸多，抗體無輸有的原則，進(jìn)行交叉配血后相合再輸注，一般來說是安全的。

該次研究涉及的221名ABO血型定型困難者均為健康無償獻(xiàn)血者，可以基本排除因血液系統(tǒng)、腫瘤等相關(guān)性疾病導(dǎo)致的血型抗原、抗體表達(dá)異常。該文調(diào)查發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生ABO定型困難的主要原因有抗體減弱、存在同種抗體、ABO亞型、其他原因、存在冷凝集素、抗原減弱。這與國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道[2-4]基本一致。

抗體減弱原因居首，占51.13%，其中抗-B減弱占 76.10%，抗-A減弱占23.89%。這與張坤蓮等[5]學(xué)者統(tǒng)計(jì)的遼寧地區(qū)獻(xiàn)血者抗體減弱比例（抗-B減弱占62.43%，抗-A減弱占23.36%）基本一致。該次調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)有4例固定獻(xiàn)者均為抗B抗體減弱，2例獻(xiàn)血者為抗原減弱，因未做家系調(diào)查，有待進(jìn)一步追蹤研究原因。排除單純因抗體減弱導(dǎo)致血型鑒定困難的方案：①要在抗體最適反應(yīng)溫度下反應(yīng)；②應(yīng)用新鮮的ABO紅細(xì)胞與之反應(yīng)；③加做吸收放散等實(shí)驗(yàn)排除ABO亞型。對弱凝集都要高度重視，不管是抗原減弱還是抗體減弱，都應(yīng)引起足夠的重視，一個(gè)都不放過[6-7]。

獻(xiàn)血者血清中存在同種抗體和冷凝集素也會(huì)導(dǎo)致獻(xiàn)血者正反定型不合，如果抗體漏檢發(fā)往臨床，將導(dǎo)致臨床輸血交叉配血實(shí)驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)次側(cè)不合而產(chǎn)生困擾甚至退血。為了節(jié)約寶貴的血液資源，建議將存在不規(guī)則抗體的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞三洗后用于臨床，血漿不能供應(yīng)臨床。對于這類獻(xiàn)血者也應(yīng)在個(gè)人獻(xiàn)血檔案中進(jìn)行標(biāo)注，提示該獻(xiàn)血者再次獻(xiàn)血時(shí)要高度重視，對于某些有高效價(jià)特異性抗體的獻(xiàn)血者，尤其是IgG抗體，建議該獻(xiàn)血者不宜再次常規(guī)獻(xiàn)血，其血清可用于制備抗血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究[8]。該次統(tǒng)計(jì)的35例同種抗體中，抗-M抗體占絕大部分（28例，80.00%），既有單純IgM型，也有IgG及IgM混合型。發(fā)現(xiàn)2例IgM型抗-P1抗體。另外2例存在IgM性質(zhì)抗體，未確定出特異性，可能與抗體鑒定譜細(xì)胞的質(zhì)量有關(guān)[9]。反定型加O細(xì)胞，結(jié)合自身對照，能發(fā)現(xiàn)自身抗體和同種抗體，再用篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞能鑒定抗體的特異性。存在抗體的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞經(jīng)三洗后用于臨床，血漿制品淘汰。

該研究中，ABO亞型是導(dǎo)致獻(xiàn)血者正反定型不合的第二大原因。當(dāng)弱的抗原反應(yīng)在健康獻(xiàn)血者中發(fā)現(xiàn)時(shí)，亞型是最可能的解釋。ABO抗原的亞型在A抗原中最多，所以在獻(xiàn)血者中的A亞型（B亞型極少見）有被錯(cuò)誤鑒定為O型的危險(xiǎn)[1]。一旦ABO亞型獻(xiàn)血者漏檢，當(dāng)成O型血輸注給沒有相應(yīng)抗原的患者，就會(huì)發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)或者刺激產(chǎn)生相應(yīng)抗體。既有安全隱患，也浪費(fèi)寶貴的血液資源。抗-AB分型血清能檢出不與抗-A或抗-B試劑發(fā)生反應(yīng)的A及B亞型。加做抗-A1，抗-AB和抗-H，必要時(shí)做吸收放散試驗(yàn)確認(rèn)抗原或進(jìn)行血型物質(zhì)檢測，可以綜合判定ABO亞型[6]，如果難以鑒定亞型型別，就判定“弱A/弱B”型。因?yàn)榧词硅b定清楚亞型的型別，臨床也不一定能找到同型的患者來輸注。若把“弱A/弱B”型血輸給相應(yīng)ABO型別的患者，既安全有效，又不浪費(fèi)寶貴的血液資源。這類獻(xiàn)血者將被征集進(jìn)行ABO血型基因分型幫助做進(jìn)一步確認(rèn)，并且在其獻(xiàn)血檔案中進(jìn)行標(biāo)注，下次再獻(xiàn)血時(shí)高度重視，以免漏檢造成危害。為了最大限度地保護(hù)患者的利益，避免給臨床輸血帶來困擾，該中心暫時(shí)屏蔽經(jīng)血清學(xué)鑒定為亞型的獻(xiàn)血者，不允許其常規(guī)獻(xiàn)血，具體應(yīng)該如何處置，有待相關(guān)政府部門出臺(tái)政策。

其他原因也是該次統(tǒng)計(jì)中發(fā)現(xiàn)的導(dǎo)致定型困難的常見原因，經(jīng)血型參比實(shí)驗(yàn)室反復(fù)實(shí)驗(yàn)，正反定型都提示血型正常。分析造成這類錯(cuò)誤的主要原因有：①紅細(xì)胞懸液配制過濃或過淡；②試劑未按照正常儲(chǔ)存條件保存導(dǎo)致抗體效價(jià)、親和力降低甚至失效；③器材不潔；④自動(dòng)加樣不準(zhǔn)或漏加；⑤離心過度或不足；⑥震蕩及靜置時(shí)長不準(zhǔn)確等。改正措施有：①規(guī)范操作，嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作；②強(qiáng)化試劑管理，確保試劑在有效期內(nèi)和得到正確的使用，按需領(lǐng)用、正確儲(chǔ)存、先開啟先用完、定期監(jiān)測質(zhì)量，避免低效價(jià)試劑的使用[7]，有條件的實(shí)驗(yàn)室可以備一套不同廠家或批號(hào)的試劑；③強(qiáng)化工作人員責(zé)任心，嚴(yán)格做好質(zhì)量控制，對可能出現(xiàn)的原因一一排查。因?yàn)槿藛T和儀器難免不出錯(cuò)，制度也不一定絕對完美。但是只要做到操作規(guī)范，細(xì)心核對，就可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤，糾正錯(cuò)誤，將不良后果降到最低。

綜上所述，血型鑒定是一項(xiàng)高度嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ?，工作人員必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，熟練掌握各種實(shí)驗(yàn)技能，認(rèn)真對待每一份標(biāo)本，仔細(xì)辨別各種異常情況，保證獻(xiàn)血者血型定型準(zhǔn)確。血型鑒定過程中，發(fā)現(xiàn)ABO正反定型異常時(shí)，應(yīng)高度重視，排除技術(shù)原因仍出現(xiàn)正反定型不合時(shí)，應(yīng)采取合適的方法進(jìn)行系統(tǒng)的血型血清學(xué)鑒定，確定血型后采取相應(yīng)的處理方案，與臨床做好充分的溝通。否則一旦錯(cuò)誤定型的血液發(fā)往臨床，由于未及時(shí)發(fā)現(xiàn)，錯(cuò)誤地輸注給患者后，將導(dǎo)致無效輸血甚至發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，危及患者生命。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉達(dá)莊.免疫血液學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：32-127.

[2] 俞廣舒，凌霞，林蘋蘋，等.杭州地區(qū)無償獻(xiàn)血者ABO血型正反定型不符調(diào)查分析[J].中國輸血雜志，2013，26（1）：65-66.

[3] 譚慶芬，羅志.無償獻(xiàn)血者ABO血型正反定型不符分析[J].中國輸血雜志，2009，22（6）：436-437.

[4] 劉敬閃，戚海，何路軍，等.獻(xiàn)血者ABO血型正反定型不符情況分析[J].臨床血液學(xué)雜志，2013，26（12）：842-843.

[5] 張坤蓮，黃旭穎，周助人，等.732例全自動(dòng)血型分析儀檢測ABO血型結(jié)果不確定的分析[J].中國輸血雜志，2017，9（30）：1012-1015.

[6] 向東.ABO亞型的檢測[J].中國輸血雜志，2010，23（8）：577-579.

[7] 劉冬，曾付芳，魏勝男.無償獻(xiàn)血初篩血型錯(cuò)誤原因分析[J].中國輸血雜志，2014，27（4）：431-432.

[8] 劉福昌，許春玲，姜珍一，等.獻(xiàn)血者ABO血型正反定型不符18例分析[J].中國輸血雜志，2014，27（4）：393-395.

[9] 陳春霞，魏曾珍，譚金哲，等.國內(nèi)抗體篩查細(xì)胞試劑比對[J].中國輸血雜志，2017，30（11）：1243-1245.

（收稿日期：2018-07-21）