任妮

美國(guó)農(nóng)業(yè)部國(guó)家家禽改良計(jì)劃（US Department of Agriculture National Poultry ImprovementPlan，NPIP）是美國(guó)聯(lián)邦政府、各州政府與行業(yè)組織合作的一個(gè)綜合性項(xiàng)目，旨在消除由包括雞白痢沙門氏茵和雞傷寒沙門氏菌等在內(nèi)的致病菌所引起的垂直傳播性疾病。

中圖分類號(hào)：S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C

文章編號(hào)：1001-0769（2018）07-0009-05

在最近幾年里，美國(guó)農(nóng)業(yè)部國(guó)家家禽改良計(jì)劃（US Department of Agriculture NationalPoultry Improvement Plan， NPIP）在其家禽病原體監(jiān)測(cè)對(duì)象中增加了對(duì)雞毒支原體（Mycoplasma

Gallisepticum，MG）、滑液囊支原體（Mycoplasma Svnoviae，MS）、腸炎沙門氏菌（Salmonella Enteridi tis，SE）和低致病性禽流感（Low Pathogenic Avian Influenza，LPAI）等的監(jiān)控，以作為驗(yàn)證種雞群并鼓勵(lì)養(yǎng)雞生產(chǎn)者凈化這些病原體的手段。

NPIP還明確了項(xiàng)目中所涉及病原體的采樣方法和特異性診斷手段。雖然該項(xiàng)目是自愿參加的，但它仍然是美國(guó)種雞和商品小母雞出口認(rèn)證及國(guó)內(nèi)銷售的黃金標(biāo)準(zhǔn)。

其他國(guó)家和地區(qū)的政府機(jī)構(gòu)也有與之類似的項(xiàng)目，以保證種雞群沒有各種類型的疾病。以下種雞群疾病監(jiān)測(cè)和檢測(cè)方法都是在NPIP的基礎(chǔ)上建立的，且僅作為指導(dǎo)方針使用。

由于各地疾病流行情況、實(shí)驗(yàn)室的數(shù)量和/或出口（或當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)）需求的不同，相關(guān)人員可能需要準(zhǔn)備可替代的檢測(cè)和認(rèn)證方法。

1 獸醫(yī)檢查

美國(guó)農(nóng)業(yè)部認(rèn)證的獸醫(yī)至少每隔30 d就要對(duì)美國(guó)海蘭公司（Hy-Line）的所有父母代種雞（Parent Stock，PS）和PS原種場(chǎng)進(jìn)行檢查，以便為產(chǎn)品的出口做好準(zhǔn)備。

獸醫(yī)檢查項(xiàng)目包括：家禽生產(chǎn)力、疾病臨床癥狀以及是否遵守動(dòng)物福利規(guī)定。雞場(chǎng)管理員需要每天報(bào)告重要的生產(chǎn)數(shù)據(jù)，并提醒獸醫(yī)雞群的死亡率是否增加、產(chǎn)蛋率是否下降、雞蛋大小是否減小、采食量或飲水量是否減少以及是否出現(xiàn)臨床疾病或其他異常跡象。

很多重要的家禽疾病僅僅由對(duì)雞群進(jìn)行定期檢查的獸醫(yī)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

2 沙門氏菌

腸炎沙門氏菌是一種重要的人食源性致病菌，它通常通過(guò)食用蛋傳給人?？刂品N雞群中腸炎沙門氏菌和其他重要沙門氏菌菌種是控制這些病原菌在商品雞群中傳播的第一步（圖1）。

在其他國(guó)家，其他類型的沙門氏菌也受到當(dāng)?shù)卣谋O(jiān)測(cè)和控制。

2.1收集病原菌

2.1.1孵化場(chǎng)

在每個(gè)出雛箱中，對(duì)來(lái)自全部種雞群的出雛筐至少采集1個(gè)手持拭子（1支拭子）。

拭子采集的范圍應(yīng)包括出雛筐的筐底、死胚和蛋殼。

拭子應(yīng)放入含有合適培養(yǎng)基（雙倍脫脂牛奶）的試管中。

樣本送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)或聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polvmerase Chain Reaction，PCR）檢測(cè)。

2.1.2種雞場(chǎng)

雛雞入舍前，在對(duì)雞舍進(jìn)行清潔和消毒后應(yīng)采集并檢測(cè)環(huán)境拭子，以確定該雞舍無(wú)沙門氏菌污染。

采用細(xì)菌培養(yǎng)法或PCR法檢測(cè)雛雞運(yùn)送箱墊紙上的胎便和/或第1周死亡的雛雞。

每4周從種雞場(chǎng)收集環(huán)境拭子樣本。

●采用地面或板條地板的雞舍：使用短靴拭子（bootie swab）（4支拭子）采集地面/板條地板區(qū)上的細(xì)菌檢測(cè)樣本。用手持拭子采集雞蛋運(yùn)送帶（1支拭子）和產(chǎn)蛋箱墊子（1支拭子）上的細(xì)菌檢測(cè)樣本。

●籠養(yǎng)雞舍：

使用短靴拭子采集走道（4支拭子）上的細(xì)菌檢測(cè)樣本。用手持拭子采集雞糞傳送帶或糞池（1個(gè)拭子）、雞蛋運(yùn)送帶（1支拭子）和雞籠地板（1支拭子）上的細(xì)菌檢測(cè)樣本。

拭子放入含有合適培養(yǎng)基（雙倍脫脂牛奶）的試管中。

根據(jù)NPIP指南確定雞群中沙門氏菌的流行狀態(tài)：

如果PCR和/或細(xì)菌培養(yǎng)的檢測(cè)結(jié)果為陰性，則該雞群可認(rèn)定為沙門氏菌陰性雞群。

如果PCR檢測(cè)結(jié)果不確定，則應(yīng)對(duì)該雞群重新檢測(cè)。

如果PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，則需要對(duì)環(huán)境的細(xì)菌檢測(cè)樣本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。

如果環(huán)境檢測(cè)樣本的細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性，則應(yīng)對(duì)菌落進(jìn)行血清分型以鑒定沙門氏菌的類型。

細(xì)菌培養(yǎng)需重復(fù)進(jìn)行以便驗(yàn)證結(jié)果的正確性，并且在重復(fù)培養(yǎng)試驗(yàn)中，該雞群應(yīng)當(dāng)作已受感染而尚未確定檢測(cè)結(jié)果的雞群處理。

采集60羽雞的腸道和其他組織樣本進(jìn)行沙門氏菌培養(yǎng)，具體如下：

●腸道組織（與其他器官組織分開收集樣本以避免交叉污染）：消化道組織包括嗉囊壁、十二指腸、空腸、盲腸、盲腸扁桃體和直腸/泄殖腔。

●其他器官：肝臟、心臟、心包膜、脾臟、

肺臟、腎臟、腹膜、膽囊、輸卵管、畸形卵或睪丸以及發(fā)炎或未吸收的卵黃囊。

將這些器官的樣本混合在一起并作為一個(gè)單獨(dú)的樣本進(jìn)行處理。

如果這些器官或腸道培養(yǎng)物的檢測(cè)結(jié)果呈腸炎沙門氏菌或官方監(jiān)管的其他類型沙門氏菌陽(yáng)性，則該雞群可認(rèn)定為沙門氏菌陽(yáng)性雞群。

2.2雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌

雞白痢沙門氏菌可引起青年雞白?。ò咨?xì)菌性腹瀉），雞傷寒沙門氏菌也可導(dǎo)致幼齡雛雞大量死亡。

這兩種細(xì)菌都能夠垂直傳播，且難以從環(huán)境樣本中培養(yǎng)出或檢測(cè)出。

在雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌感染檢測(cè)中，最常用的方法是快速全血平板凝集試驗(yàn)（圖2）。

在雞16周齡時(shí)，使用全血平板凝集試驗(yàn)對(duì)300羽雞（每個(gè)雞群采集300份全血樣本）進(jìn)行檢測(cè)。

首次合格檢測(cè)完成后，對(duì)該雞群進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，方法是用全血平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)300羽雞（每個(gè)雞群采集300份全血樣本）。

在接種沙門氏菌滅活苗或弱毒苗的雞群中，留下300羽不予接種疫苗并做好標(biāo)記，在16周齡對(duì)這些標(biāo)記的雞進(jìn)行檢測(cè)和鑒定，12個(gè)月后再次檢測(cè)。

應(yīng)按照NPIP指南確定雞群沙門氏菌感染狀況，具體如下：

●如果全血平板凝集試驗(yàn)結(jié)果為陰性，則該雞群可認(rèn)定為雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌陰性雞群。

●如果全血平板凝集試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，則從雞群中取25羽進(jìn)行安樂死。從處死的每羽雞中采集腸道和其他器官組織樣本進(jìn)行雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌培養(yǎng)，具體如下：

●腸道組織混合樣本（與其他器官組織分開收集樣本以避免交叉污染）：采集嗉囊壁、十二指腸、空腸、盲腸、盲腸扁桃體和直腸/泄殖腔的樣本。將這些器官的樣本混合在一起并作為一個(gè)單獨(dú)的樣本進(jìn)行處理，但不要將不同雞的樣本混到一起。

○其他器官組織（與腸道組織分開收集樣本以避免交叉污染）：采集肝臟、心臟、心包膜、脾臟、肺臟、腎臟、腹膜、膽囊、輸卵管、畸形卵或睪丸以及發(fā)炎或未吸收的卵黃囊樣本。將這些器官的樣本混合在一起并作為一個(gè)單獨(dú)樣本進(jìn)行處理，但不要將不同雞的樣本混在一起。

○對(duì)任何有明顯異常的組織用拭子取樣以進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。

●如果該器官或腸道的細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性，那么該雞群可認(rèn)定為雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌陽(yáng)性雞群。

根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)，確診為雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌陽(yáng)性的雞群應(yīng)處以安樂死。

2.3雞毒支原體和滑液囊支原體

雞毒支原體和滑液囊支原體都可以從種母雞向雛雞垂直傳播，導(dǎo)致雛雞質(zhì)量較差，發(fā)生呼吸道疾病和滑膜炎，并且降低未來(lái)的生產(chǎn)力。加入NPIP的種雞場(chǎng)必須凈化雞毒支原體和滑液囊支原體（圖3）。

在雞16周齡，用血清平板凝集試驗(yàn)或抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA）對(duì)150羽雞進(jìn)行雞毒支原體和滑液囊支原體檢測(cè)（每個(gè)雞群采集150份血清樣本）。

在產(chǎn)蛋階段，每隔90 d檢測(cè)75羽雞（75份血清樣本）或每隔30 d檢測(cè)25羽雞（25份血清樣本）。

應(yīng)按照NPIP指南確定雞群雞毒支原體和滑液囊支原體感染狀況：

●如果ELISA或血清平板凝集試驗(yàn)結(jié)果為陰性，那么該雞群可認(rèn)定為雞毒支原體和滑液囊支原體陰性雞群。

●如果ELISA或血清平板測(cè)試結(jié)果為陽(yáng)性，那么必須至少對(duì)25份樣本進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)或?qū)谘适米舆M(jìn)行分子檢測(cè)。如果血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果的血清滴度為1：80或更高，那么該雞群可確診為陽(yáng)性雞群;如果血清滴度為1：40，則可認(rèn)定為疑似病例，需在最終判斷前進(jìn)一步檢測(cè)以便確診。

在疾病流行的高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)，檢測(cè)間隔應(yīng)縮短至每2周進(jìn)行一次以更快速地檢測(cè)感染狀況。

根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)，確診為陽(yáng)性的雞群應(yīng)進(jìn)行撲殺。

3 禽流感

在NPIP中增加了對(duì)低致病性禽流感（Low Pathogenic Avian Influenza， LPAI）監(jiān)測(cè)的項(xiàng)目，一方面是為了增強(qiáng)對(duì)禽流感的監(jiān)測(cè)工作，另一方面是為了補(bǔ)償那些必須撲殺的H5或H7 LPAI陽(yáng)性雞群的生產(chǎn)者。監(jiān)測(cè)低致病性H5/H7 LPAI感染能更容易地預(yù)防可以引發(fā)高致病性禽流感（Highly Pathogenic AvianInfluenza，HPAI）的病毒基因重組事件。在美國(guó)，仍然由美國(guó)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物衛(wèi)生檢查局負(fù)責(zé)HPAI響應(yīng)，并要求受感染雞群得到可控的處置（圖4）。

在雞16周齡時(shí)，使用抗體ELISA或瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散法（Agar Gel Immunodiffusion，AGID）對(duì)30羽雞進(jìn)行檢測(cè)。

16周齡后，用AGID或ELISA法，每隔90 d對(duì)30羽雞（30份血清樣本）或每隔30 d對(duì)10羽雞（10份血清樣本）進(jìn)行LPAI病毒檢測(cè)。

應(yīng)按照NPIP指南確定雞群的禽流感狀況：

●如果ELISA或AGID檢測(cè)結(jié)果為陰性，則該雞群可認(rèn)定為禽流感陰性雞群。

●如果ELISA或AGID檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，那么需要進(jìn)行AGID或分子檢測(cè)（PCR）。采集口咽拭子，每5個(gè)拭子放入3 mL（或者每11個(gè)拭子放入5 mL）合適的轉(zhuǎn)移介質(zhì)（腦心浸出物培養(yǎng)液）中。

●如果AGID或PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，則應(yīng)將血清樣本和口咽/氣管拭子送往樣本來(lái)源國(guó)認(rèn)可的國(guó)家實(shí)驗(yàn)室（在美國(guó)，應(yīng)送至美國(guó)獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室）進(jìn)行驗(yàn)證和血清分型。

在疾病流行的高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)，應(yīng)縮短檢測(cè)間隔時(shí)間以便能快速檢測(cè)感染狀況。

根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)，確診為L(zhǎng)PAI的雞群應(yīng)進(jìn)行撲殺。

4 監(jiān)測(cè)安排

表1給出了對(duì)種雞群進(jìn)行上述疾病監(jiān)控的取樣監(jiān)測(cè)計(jì)劃。

更嚴(yán)格的監(jiān)測(cè)計(jì)劃需要投入更多的資金，但可以更快地確定潛在的疾病威脅。

提高檢測(cè)頻率、擴(kuò)大樣本規(guī)模以及使用更敏感的篩選試驗(yàn)?zāi)軌颢@得更快速的響應(yīng)，并且可以降低疾病對(duì)生產(chǎn)連續(xù)性、客戶信心以及公共關(guān)系的影響。

如果某種疾病在當(dāng)?shù)氐牧餍新瘦^高，采用更為密集的檢測(cè)方案可能會(huì)更有利。