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基于知識圖譜的天然橡膠研究熱點(diǎn)計(jì)量分析

2018-05-14 14:44李一萍茶正早張慧堅(jiān)王大鵬
熱帶作物學(xué)報(bào) 2018年6期
關(guān)鍵詞:天然橡膠文獻(xiàn)計(jì)量研究熱點(diǎn)

李一萍 茶正早 張慧堅(jiān) 王大鵬

摘 要 利用文獻(xiàn)計(jì)量方法結(jié)合CiteSpace技術(shù),對2002~2016年Web of Science收錄天然橡膠研究文獻(xiàn)關(guān)鍵詞進(jìn)行共現(xiàn)分析,以可視化圖譜呈現(xiàn)不同時(shí)期(2002~2006、2007~2011、2012~2016年)天然橡膠領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。結(jié)果表明:該領(lǐng)域由早期橡膠樹天然橡膠生物合成與調(diào)控、產(chǎn)排膠及防御關(guān)鍵蛋白與基因、橡膠林土壤有機(jī)碳、生態(tài)效應(yīng)與生物多樣性研究,逐漸轉(zhuǎn)向產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成、橡膠樹膠乳再生及其對外界刺激或非生物脅迫的響應(yīng)、橡膠林土地利用變化效應(yīng)研究;3個(gè)時(shí)期研究內(nèi)容由少到多,由淺入深,學(xué)科交叉明顯。研究熱點(diǎn)還涉及橡膠樹雜交育種、遺傳轉(zhuǎn)化和分子標(biāo)記等輔助育種、天然橡膠制品膠乳蛋白過敏,天然橡膠微生物降解是新興研究熱點(diǎn)。

關(guān)鍵詞 天然橡膠;文獻(xiàn)計(jì)量;CiteSpace;研究熱點(diǎn)

中圖分類號 G255.51 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

Quantitative Analysis of Research Hotspots on Natural Rubber Based on Science Mapping

LI Yiping1, CHA Zhengzao2, ZHANG Huijian1, WANG Dapeng2*

1 Institute of Scientific and Technical Information, CATAS, Danzhou, Hainan 571737, China

2 Rubber Research Institute, CATAS, Danzhou, Hainan 571737, China

Abstract Bibliometrics and CiteSpace were used to perform cluster analysis of the keywords of literatures about natural rubber during 2002 to 2016 in the Web of Science database. The research hotspots of natural rubber fields in different periods (years 2002-2006, 2007-2011 and 2012-2016) were presented on the visualizing map. The results indicated that early studies focused on the natural rubber biosynthesis and its regulation, latex production and discharge or vital defense proteins and relevant genes in rubber tree. And soil organic carbon, ecological effects and biodiversity of rubber plantation were also the hotspots in this period. Afterwards, topics turned to the natural rubber biosynthesis in rubber-producing plants, latex regeneration and its responses to external stimulus or abiotic stress in rubber trees. The effects of land use changes from transformation of tropical rain forest into rubber plantation were also focused in this period. The research contents increased and deepened from time to time in three periods and the discipline-crossing was obvious. The hotspots additionally referred to cross breeding, genetic transformation and molecular markers in rubber trees, and the protein allergy of natural rubber products as well. The latest hotspot was biodegradation of natural rubber.

Key words natural rubber; bibliometric; CiteSpace; research hotspots

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.06.026

文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)是國際公認(rèn)的圖書情報(bào)領(lǐng)域重要分支學(xué)科,已發(fā)展到對文獻(xiàn)內(nèi)部知識單元進(jìn)行計(jì)量研究階段[1-4]??茖W(xué)知識圖譜是文獻(xiàn)計(jì)量領(lǐng)域的創(chuàng)新研究方法,以可視化圖形展示科學(xué)知識內(nèi)部的動態(tài)演進(jìn)過程,揭示其研究前沿、研究熱點(diǎn)和結(jié)構(gòu)關(guān)系等[5-8]。CiteSpace是目前應(yīng)用最廣泛的信息可視化工具,其利用文獻(xiàn)引文網(wǎng)絡(luò)的知識可視化分析原理,以圖譜的形式呈現(xiàn)某研究領(lǐng)域的知識基礎(chǔ)、演化歷程、發(fā)展趨勢和最新動向[5-8]。Liu等[9-10]對1985~2014年全球水稻研究文獻(xiàn)進(jìn)行計(jì)量分析,基于關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)揭示水稻領(lǐng)域的研究熱點(diǎn);繪制了園藝植物高被引論文的共被引圖譜;吳同亮等[11]分析了2016年國內(nèi)外環(huán)境土壤學(xué)的研究熱點(diǎn);Liu等[12]對作物生長模型SCI文獻(xiàn)進(jìn)行主題共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)、國家/地區(qū)合作網(wǎng)絡(luò)、作者和文獻(xiàn)共被引網(wǎng)絡(luò)分析;Chen等[13]分析了WoS收錄的農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新領(lǐng)域的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)文獻(xiàn)和演進(jìn)路徑。

橡膠(Hevea brasiliensis)是熱帶典型的經(jīng)濟(jì)作物,是重要的戰(zhàn)略物資,天然橡膠在我國熱帶農(nóng)業(yè)中仍然具有舉足輕重的地位[14]。在天然橡膠產(chǎn)業(yè)的發(fā)展歷程中,科學(xué)技術(shù)對于促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展和產(chǎn)業(yè)升級具有重要意義。一些重大技術(shù)革新和應(yīng)用極大地促進(jìn)了產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,如一系列高產(chǎn)抗性品種的選育和推廣、乙烯利刺激的低頻割膠技術(shù)等等。當(dāng)前科學(xué)技術(shù)高速發(fā)展,利用文獻(xiàn)計(jì)量的技術(shù)方法對國內(nèi)外天然橡膠科技文獻(xiàn)進(jìn)行科學(xué)計(jì)量分析,對于我國天然橡膠產(chǎn)業(yè)跟蹤國際前沿、把握研究熱點(diǎn)具有較高的參考價(jià)值。作者前期已對國內(nèi)外天然橡膠文獻(xiàn)進(jìn)行了基本的描述性統(tǒng)計(jì)分析,明確了高被引論文、高產(chǎn)機(jī)構(gòu)、學(xué)科分布和h指數(shù)等文獻(xiàn)信息,但還沒有深入到文獻(xiàn)內(nèi)部進(jìn)行研究[15]。熱帶農(nóng)業(yè)文獻(xiàn)計(jì)量分析也相對薄弱,以天然橡膠為代表的科學(xué)知識圖譜計(jì)量分析亟待開展。本研究利用文獻(xiàn)計(jì)量方法結(jié)合CiteSpace技術(shù),對2002~2016年Web of Science收錄的天然橡膠研究主題文獻(xiàn)進(jìn)行關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析,以可視化的方式展示國際天然橡膠領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),期望為中國天然橡膠研究跟蹤國際前沿、把握研究方向及規(guī)劃科研項(xiàng)目提供一定的科學(xué)量化依據(jù)。

1 數(shù)據(jù)來源與研究方法

1.1 數(shù)據(jù)來源

數(shù)據(jù)來源于Web of Science核心合集的Science Citation Index Expanded(SCI-E)數(shù)據(jù)庫。本研究定義的天然橡膠,特指從巴西三葉橡膠樹提取的天然橡膠,并包括銀膠菊(Guayule)、蒲公英(Taraxacum brevicorniculatum)等天然膠乳;本研究定義的天然橡膠文獻(xiàn),包括天然橡膠種植及其相關(guān)的分子生物學(xué)研究方法,不涉及天然橡膠加工研究。因此,采用表1制定的檢索策略進(jìn)行主題檢索,時(shí)間跨度為2002~2016年,文獻(xiàn)類型為“Article”,得到文獻(xiàn)記錄1 724條(檢索日期:2017-02-06,數(shù)據(jù)庫更新日期:2017-02-05)。按照CiteSpace軟件要求導(dǎo)出文本格式數(shù)據(jù),并采用數(shù)據(jù)過濾與除重功能進(jìn)行預(yù)處理。

1.2 研究方法

采用CiteSpace(5.0.R3.SE)進(jìn)行關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)分析。將2002~2016年劃分為3個(gè)時(shí)區(qū),分別為2002~2006、2007~2011和2010~2016,把每個(gè)時(shí)區(qū)按照5年進(jìn)行切割(即時(shí)間切片為5),選取每個(gè)時(shí)間切片中關(guān)鍵詞共現(xiàn)頻次排名前100的文獻(xiàn)構(gòu)建共詞網(wǎng)絡(luò);采用尋徑算法精簡網(wǎng)絡(luò),去除相關(guān)性較小的節(jié)點(diǎn);分別得到3個(gè)時(shí)期的天然橡膠研究共詞網(wǎng)絡(luò)圖譜。圖譜中每個(gè)節(jié)點(diǎn)代表一個(gè)關(guān)鍵詞,節(jié)點(diǎn)的大小表示關(guān)鍵詞出現(xiàn)的頻次,節(jié)點(diǎn)之間連線的粗細(xì)表示關(guān)鍵詞共現(xiàn)強(qiáng)度的高低,彼此鄰近的關(guān)鍵詞表示他們通常出現(xiàn)在相似的文獻(xiàn)中[5-8]。節(jié)點(diǎn)年輪的顏色和厚度,表示關(guān)鍵詞出現(xiàn)的時(shí)間(本次分析將5 a劃分為一個(gè)時(shí)間切片,因此只出現(xiàn)藍(lán)色)和數(shù)量。具有紫色外環(huán)的節(jié)點(diǎn),通常具有高的中介中心性,是圖譜中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),可以將網(wǎng)絡(luò)中不同的聚類連接起來,而外環(huán)越厚還表示該節(jié)點(diǎn)越重要并位于網(wǎng)絡(luò)中較為中心的位置[5-8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 2002~2006年天然橡膠研究熱點(diǎn)分析

該時(shí)期得到節(jié)點(diǎn)數(shù)量107個(gè),連線數(shù)量128條,關(guān)鍵詞形成4個(gè)網(wǎng)絡(luò)聚類的圖譜。研究熱點(diǎn)可分為“橡膠樹天然橡膠生物合成與調(diào)控”、“橡膠樹產(chǎn)排膠及防御關(guān)鍵蛋白與基因”、“橡膠林生物多樣性、生態(tài)效應(yīng)與土壤微生物碳”、“天然橡膠膠乳蛋白過敏”(圖1)。

2.1.1 橡膠樹天然橡膠生物合成與調(diào)控 基因表達(dá)(Gene expression)、克隆(Clone)、植物(Plant)等為該聚類中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),與這些節(jié)點(diǎn)相連的關(guān)鍵詞有橡膠生物合成(Rubber biosynthesis)、聚異戊二烯(Polyisoprene)、轉(zhuǎn)移酶活性(Transferase activity)、延伸因子(Elongation factor)、粒子(Particle)、分子量(Molecular weight)等,表明參與天然橡膠生物合成轉(zhuǎn)移酶類和橡膠粒子是研究熱點(diǎn)。從橡膠樹膠乳中分離得到2個(gè)CPT基因HRT1和HRT2,發(fā)現(xiàn)HRT2在體外催化合成的天然橡膠分子量已經(jīng)接近植物體內(nèi)合成的天然橡膠分子量大小,推測HRT2可能是橡膠轉(zhuǎn)移酶。從橡膠樹葉片和膠乳cDNA文庫中克隆到GGPS基因,分別命名為HbGGPPS1和HbGGPPS2,該編碼蛋白都含有反式-異戊烯鏈延長酶特有的保守區(qū)。研究表明,抗小橡膠粒子蛋白(SRPP)抗體與無花果樹(F. carica)和棕紅印度榕(F. benghalensis)的橡膠粒子均不存在免疫識別反應(yīng),認(rèn)為這兩種植物橡膠粒子的表面可能沒有與SRPP同源的蛋白,而橡膠樹的SRPP大小遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于這2種植物[16-18]。聚類圖中還出現(xiàn)鎂(Magnesium)、異戊烯焦磷酸鹽(Isopentenyl pyrophosphate)、銀膠菊(Guayule)等,說明天然橡膠生物合成調(diào)控也是關(guān)注熱點(diǎn)。(1)金屬離子調(diào)節(jié):Mg2+或Mn2+濃度影響IPP摻入合成中的天然橡膠分子的速度;在橡膠樹、銀膠菊和印度榕3種植物中,橡膠轉(zhuǎn)移酶能結(jié)合FPP、FPP-金屬離子或單獨(dú)結(jié)合金屬離子,但不能單獨(dú)結(jié)合IPP分子。在體外合成條件下,Mg2+濃度可顯著影響橡膠樹和銀膠菊所合成天然橡膠的分子量,而橡膠樹對Mg2+濃度更敏感。(2)溫度調(diào)節(jié):夜晚約20 ℃的低溫對成熟銀膠菊植株橡膠轉(zhuǎn)移酶活性有誘導(dǎo)作用。(3)茉莉酸類物質(zhì)調(diào)節(jié):外施茉莉酸甲酯可以提高膠乳的干膠含量,表明茉莉酸類物質(zhì)能夠促進(jìn)乳管中橡膠的生物合成[19-22]。

2.1.2 橡膠樹產(chǎn)排膠及防御關(guān)鍵蛋白與基因 幾丁質(zhì)酶(Chitinase)、橡膠幾丁質(zhì)酶(Hevamine)、橡膠素(Hevein)、基因(Gene)、酶(Enzyme)等關(guān)鍵詞的出現(xiàn),表明橡膠樹還側(cè)重于產(chǎn)排膠關(guān)鍵基因與蛋白研究。克隆了橡膠樹Hevein基因,Northernblot分析表明Hevein基因主要在膠乳中表達(dá),乙烯和ABA對基因的表達(dá)有誘導(dǎo)作用。對橡膠樹膠乳的多酚氧化酶(PPO)蛋白進(jìn)行分離和純化,發(fā)現(xiàn)PPO在不同品系中的蛋白含量及活性有差異,抗病性強(qiáng)、膠乳及其產(chǎn)品易褐化的GT1的PPO活性較高[23-24]。Bokma等[25]研究了橡膠樹幾丁質(zhì)酶催化區(qū)活性位點(diǎn)Asp125、Glu127和Tyr183與其底物的相互作用。防御(Defence)、抗性(Resitance)和氨基酸序列(Amino acid sequence)等的出現(xiàn)說明防御關(guān)鍵蛋白和基因也是該聚類的研究熱點(diǎn)。從無花果樹(F.carica)中分離2個(gè)橡膠粒子蛋白基因和1個(gè)乳膠基因,分別是過氧化物酶(POX)、胰蛋白酶抑制劑(TRI)和i類幾丁質(zhì)酶(CHI),相關(guān)應(yīng)激蛋白在橡膠粒子和膠乳表面的表達(dá)表明橡膠粒子和膠乳在產(chǎn)膠植物的防御中起重要作用。從膠乳RNA文庫中分離到MYB類轉(zhuǎn)錄因子,命名為HbMyb1;該轉(zhuǎn)錄因子在橡膠樹正常葉片、樹皮和膠乳中都表達(dá),但在死皮橡膠樹的樹皮中表達(dá)量顯著降低,說明HbMyb1是參與橡膠樹死皮病發(fā)生的關(guān)鍵基因。采用2-DE方法比較健康和死皮橡膠樹膠乳蛋白質(zhì)組的差異,發(fā)現(xiàn)相對分子質(zhì)量為15、22 ku的2種多酞在死皮樹的細(xì)胞質(zhì)中累積,經(jīng)鑒定分別是橡膠延長因子(REF)Hevb 1和小橡膠粒子蛋白(SRPP)Hevb 3[26-28]。

2.1.3 橡膠林生物多樣性、生態(tài)效應(yīng)與土壤微生物碳 該聚類中出現(xiàn)熱帶雨林(Tropical rain forest)、橡膠林(Rubber plantation)、農(nóng)林生態(tài)系統(tǒng)(Agroforestry system)、生物多樣性(Biodiversity)、多樣性(Diversity)等關(guān)鍵詞,代表橡膠林生物多樣性研究。通過比較蘇門答臘低濕地原始森林、橡膠復(fù)合農(nóng)林生態(tài)系統(tǒng)和橡膠林的蕨類植物在地塊和土地空間水平的多樣性。發(fā)現(xiàn)3種土地利用類型的地塊平均物種豐富度差異不顯著;橡膠農(nóng)林系統(tǒng)的物種-面積曲線具有更高的邊坡參數(shù),表明橡膠農(nóng)林系統(tǒng)的β多樣性更高;并將陸生蕨類植物劃分為“森林物種”和“非森林物種”,橡膠農(nóng)林系統(tǒng)中等數(shù)量的“森林物種”比橡膠林多,但少于原始森林;因此種植更大面積的橡膠林有利于保護(hù)物種多樣性。從印度尼西亞蘇門答臘島低濕地7種土地利用類型(原始森林、砍伐森林、成熟橡膠農(nóng)林系統(tǒng)、成熟橡膠林、南洋楹種植園、白茅草地、木薯種植園)收集白蟻種群棲息地的相關(guān)變量數(shù)據(jù),研究白蟻群落多樣性下降原因。通過比較亞馬遜中部冠層封閉的原始林、12 a

次生林、農(nóng)林系統(tǒng)、橡膠林、桃棕櫚單作的小氣候特征。發(fā)現(xiàn)發(fā)達(dá)的冠層有效保護(hù)了土壤大型底棲動物免受高溫和干旱脅迫,優(yōu)化這些冠層封閉的農(nóng)林系統(tǒng)有助于更好地管理有益的土壤分解者群落[29-31]。氧化亞氮(Nitrous oxide)、類異戊二烯生物合成(Isoprenoid biosynthesis)、森林砍伐(Deforestation)、模型(Model)和光(Light)等的出現(xiàn)表明橡膠林氣體排放、光合特性等生態(tài)效應(yīng)也是研究熱點(diǎn)。通過測定4種土地利用類型(老齡林、過度采伐林、采伐后燒荒以及橡膠林)CO2、CH4和N2O的排放。發(fā)現(xiàn)森林管理和采伐、森林轉(zhuǎn)變?yōu)槿斯ち诛@著影響森林土壤溫室氣體排放。在旱季和雨季對云南西雙版納人工橡膠林和熱帶次生林冠層上空的異戊二烯和單萜烯排放通量進(jìn)行連續(xù)測定。雨季測到異戊二烯排放通量的最大值,日平均值為1 mg.m-1.h-1,旱季異戊二烯通量下降明顯為0.15 mg.m-1.h-1。通過比較自然遮陰下控制光線強(qiáng)度對橡膠樹生長、光合特性和暗適應(yīng)的影響,發(fā)現(xiàn)橡膠樹通過暗適應(yīng)和遮陰誘導(dǎo)的動態(tài)光抑制作用降低而加強(qiáng)在遮陰條件下的早期生長[32-34]。另外,碳(Carbon)、熱帶土壤(Tropical soil)和有機(jī)質(zhì)(Organic matter)等代表橡膠林土壤微生物碳研究熱點(diǎn)。Kurzatkowski等[35]研究巴西亞馬遜地區(qū)桃棕櫚單作、橡膠林單作和含有4個(gè)樹種的農(nóng)林系統(tǒng)的凋落物分解、土壤微生物的生物量和活性。Zhang等[36]分析中國海南植膠區(qū)土壤微生物碳和總有機(jī)碳。

2.1.4 天然橡膠膠乳蛋白過敏 該聚類關(guān)鍵詞主要有天然橡膠膠乳(Natural rubber latex)、蛋白(Protein)、手套(Glove)、過敏(Allergy)、提?。‥xtract)和抑制(Inhibition)等。開發(fā)了一種ELISA抑制方法,用于提取和定量天然橡膠膠乳產(chǎn)品蛋白,該方法測定的抗原蛋白含量更接近于提取物中總蛋白質(zhì)含量?;诓东@ELISA的單克隆抗體和純化或重組變應(yīng)原方法檢測天然橡膠膠乳過敏原。結(jié)果表明,Hevb 6.02和Hevb 5是成人的2種主要過敏原,Hevb 3和Hevb 1是脊柱裂患兒的2種主要過敏原。研究發(fā)現(xiàn),長期接觸乳膠產(chǎn)品粉末或膠乳氣溶膠的工作人員會引起過敏,最常見的癥狀是接觸性蕁麻疹,吸入可能會導(dǎo)致過敏性鼻炎和哮喘;皮膚刺痛測試是診斷NRL過敏最準(zhǔn)確方法。采用小鼠模型評估天然橡膠膠乳蛋白過敏,以降低膠乳產(chǎn)品的過敏原和致敏個(gè)體對過敏原的交叉反應(yīng)力[37-40]。

2.2 2007~2011年天然橡膠研究熱點(diǎn)分析

該時(shí)期得到節(jié)點(diǎn)數(shù)量133個(gè),連線數(shù)量151條,關(guān)鍵詞形成5個(gè)網(wǎng)絡(luò)聚類圖譜。研究熱點(diǎn)分為“橡膠樹雜交育種與分子輔助育種”、“橡膠樹膠乳再生及其對外界刺激的分子響應(yīng)”、“橡膠樹乳管關(guān)鍵蛋白及其基因表達(dá)”、“產(chǎn)膠植物天然橡膠產(chǎn)量與質(zhì)量”、“橡膠林土壤有機(jī)碳、內(nèi)生菌多樣性與病害”(圖2)。

2.2.1 橡膠樹雜交育種與分子輔助育種 該聚類出現(xiàn)遺傳多樣性(Genetic diversity)、多態(tài)性(Polymorphism)和種質(zhì)(Germplasm)等關(guān)鍵詞,反映研究人員對橡膠樹種質(zhì)資源雜交育種的關(guān)注程度。利用橡膠樹30個(gè)混合授粉-自交和異交-無性系后代群體為材料,對其干膠產(chǎn)量、莖圍長度的遺傳增益進(jìn)行評估。鑒定20個(gè)最佳個(gè)體,分別獲得67.96%和16.48%的遺傳增益,近交系數(shù)約為2.82%。對22個(gè)IAC400基因型橡膠樹的遺傳變異與分化進(jìn)行研究,利用產(chǎn)量等8個(gè)數(shù)量性狀進(jìn)行單因素和多因素分析,并采用多因素分析和SSR標(biāo)記研究60個(gè)IAC基因型橡膠樹的遺傳多樣性。采用多目標(biāo)方法選育橡膠樹無性系,確定包括割膠、15 a總產(chǎn)量、15~25 a總產(chǎn)量、抗風(fēng)性、抗病性、生理抗性、嫁接、質(zhì)量等選育標(biāo)準(zhǔn)[41-43]。體細(xì)胞胚胎發(fā)生(Somatic embryogenesis)、培養(yǎng)(Culture)和誘導(dǎo)(Induction)等代表橡膠樹遺傳轉(zhuǎn)化分子輔助育種研究熱點(diǎn)。通過次生體細(xì)胞胚發(fā)生對橡膠樹自根幼態(tài)無性系(CATAS 7-33-97和CATAS 88-13)進(jìn)行快繁。利用綠色熒光蛋白(GPF)作為橡膠樹根癌膿桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的有效選擇標(biāo)記[44-45]。

2.2.2 橡膠樹膠乳再生及其對外界刺激的分子響應(yīng) 該聚類出現(xiàn)橡膠生物合成(Rubber biosynthesis)、聚異戊二烯生物合成(Isoprenoid biosynthesis)、橡膠粒子(Rubber particle)和克?。–loning)等關(guān)鍵詞,說明天然橡膠合成、產(chǎn)排膠和膠乳再生仍是科學(xué)家持續(xù)關(guān)注的研究熱點(diǎn)。利用C14標(biāo)記研究膠乳中小橡膠粒子(SRP)在天然橡膠體外合成中的作用。分析橡膠樹硫氧還蛋白h基因(HbTRX1)在自根幼態(tài)無性系與其供體老態(tài)無性系膠乳中的差異表達(dá)。推測該基因可能影響膠乳流動和膠乳產(chǎn)量差異??寺『捅碚飨鹉z樹肌動蛋白解聚因子(ADF)基因,表達(dá)譜分析表明HbADF可能與乳膠再生和流動有關(guān)[46-48]。而乙烯利(Ethephon)、茉莉酸甲酯(Jasmonic acid)、途徑(Pathway)和轉(zhuǎn)錄組分析(Transcriptome analysis)等代表橡膠樹膠乳再生對乙烯利、茉莉酸甲酯等外界刺激的分子響應(yīng)。對外界傷害、茉莉酸甲酯和乙烯利刺激響應(yīng)的一組信號和代謝途徑中所涉及基因的轉(zhuǎn)錄豐度進(jìn)行研究,揭示橡膠樹響應(yīng)外界刺激的25個(gè)基因的表達(dá)模式。克隆和表征橡膠樹乳管細(xì)胞中與茉莉酸信號途徑相關(guān)的HbJAZ1基因和鈣調(diào)蛋白基因HbCDPK1,初步證明乳管細(xì)胞橡膠生物合成主要受茉莉酸信號調(diào)控;機(jī)械損傷、茉莉酸甲酯和乙烯利誘導(dǎo)HbCDPK1表達(dá)上調(diào),推測該基因可能與膠乳產(chǎn)量和橡膠生物合成有關(guān)[49-51]。

2.2.3 橡膠樹乳管關(guān)鍵蛋白及其基因表達(dá) 該聚類出現(xiàn)乳管(Laticifer)、純化(Purification)、天然橡膠膠乳(Nature rubber latex)、蛋白(Protein)和質(zhì)膜(Plasma membrane)等關(guān)鍵詞。鑒定了一個(gè)乳管中高豐度表達(dá)的蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因HbSUT3的功能。發(fā)現(xiàn)乙烯利和割膠可以誘導(dǎo)該基因的表達(dá),與膠乳產(chǎn)量正相關(guān);由此推斷HbSUT3是決定乳管蔗糖供給、影響橡膠產(chǎn)量的關(guān)鍵SUT基因。研究了施用乙烯利、生長素、脫落酸和水楊酸對提高橡膠樹膠乳產(chǎn)量和2個(gè)水通道蛋白基因表達(dá)差異的影響。結(jié)果表明,乙烯利處理可上調(diào)HbPIP2;1在膠乳和樹皮中的表達(dá),上調(diào)HbTIP1;1在膠乳表達(dá)但下調(diào)其在樹皮中的表達(dá),下調(diào)HbPIP1;1在膠乳和樹皮中的表達(dá);HbPIP2;1和HbTIP1;1對其他3種激素的反應(yīng)與乙烯利類似,HbPIP1;1可輕微受生長素誘導(dǎo),但不受脫落酸和水楊酸調(diào)控。利用cDNA文庫篩選方法克隆橡膠樹多元醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因HbPLT1和HbPLT2。發(fā)現(xiàn)HbPLT1和HbPLT2的表達(dá)模式響應(yīng)于不同的刺激而變化;與HbPLT1相比,乙烯利刺激和機(jī)械傷口誘導(dǎo)乳管和內(nèi)部樹皮細(xì)胞中HbPLT2顯著上調(diào);并結(jié)合蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和水通道蛋白的表達(dá)和定位情況,提出該質(zhì)粒膜蛋白參與刺激產(chǎn)膠[52-54]。

2.2.4 產(chǎn)膠植物天然橡膠產(chǎn)量與質(zhì)量 該聚類出現(xiàn)銀膠菊(Guayule)、天然膠乳(Nature rubber latex)、膠乳產(chǎn)量(Latex yield)、質(zhì)量(Quality)和性能(Performance)等關(guān)鍵詞。Coffelt等[55]進(jìn)行銀膠菊生長周期中膠乳產(chǎn)量和生物量的最佳收割時(shí)期試驗(yàn)。Salvucci等[56]在模擬夏季和冬季的溫度和光周期下誘導(dǎo)銀膠菊的營養(yǎng)活躍期和休眠期,對其在營養(yǎng)活躍期和休眠期的碳水化合物和類異戊二烯產(chǎn)物的光合作用和同化分配進(jìn)行研究。Pearson等[57]評估商業(yè)化種植向日葵的生物量及其生物量的分配,確定了膠乳濃度、產(chǎn)量、品種遺傳多樣性以及影響膠乳質(zhì)量的因素;開發(fā)了一種適用于低分子量產(chǎn)膠植物的膠乳提取方法(加速溶劑萃?。?,用于提取和定量向日葵天然膠乳。Buranov等[58]采用混合法和流動法分別提取哈薩克斯坦和烏茲別克斯坦的橡膠草(蒲公英)膠乳,并利用溶劑循序提取法進(jìn)行橡膠草固體膠的提取。

2.2.5 橡膠林土壤有機(jī)碳、內(nèi)生菌多樣性與病害 該聚類出現(xiàn)橡膠林(Rubber plantation)、森林(Forest)、熱帶雨林(Tropical rain forest)、農(nóng)林系統(tǒng)(Agroforestry system)、土地利用(Land use)、碳(Carbon)、有機(jī)質(zhì)(Organic matter)等關(guān)鍵詞,表明該時(shí)期的研究熱點(diǎn)由橡膠林土壤微生物碳向有機(jī)碳轉(zhuǎn)變。通過比較印度喀拉拉邦5種土地利用類型(庭院、自然林、單一種植的椰子林、水稻田和橡膠林)的土壤碳儲量。發(fā)現(xiàn)有高密度樹木的如森林和小尺寸的庭院的碳儲量較高。通過比較亞馬遜中部地區(qū)不同植物覆蓋(原始森林、次生林、牧場、柑橘林、橡膠林)下的土壤肥力、礦質(zhì)氮和微生物量。發(fā)現(xiàn)橡膠林是土壤有機(jī)質(zhì)變化最小的植物覆蓋。研究了入侵蚯蚓對云南西雙版納南部橡膠林土壤活性碳的影響。發(fā)現(xiàn)蚯蚓可以沿著土壤垂直剖面重新分布活性碳,保護(hù)土壤表層積累的LOC,而土壤下層的積累的LOC不受保護(hù)[59-61]。多樣性(Diversity)、生物多樣性(Biodiversity)、真菌(Fungi)和孢子(Microcyclus ulei)等代表該時(shí)期還出現(xiàn)橡膠林內(nèi)生菌多樣性研究。分離和鑒定了橡膠樹葉片和莖段的內(nèi)生真菌分離物,其主要分布于子囊菌屬、青霉屬、擔(dān)子菌門、接合菌門等。研究了從野生橡膠樹分離獲得橡膠南美葉疫病菌菌株的方法。進(jìn)行了AMF菌根菌對橡膠樹苗木生長、生物物理參數(shù)和解剖學(xué)方面影響的試驗(yàn)[62-64]。而病害(Disease)、致病性(Pathogenicity)、生物防治(Biological control)和抗性(Resistance)等表明橡膠樹病害也是該聚類研究熱點(diǎn)之一。主要涉及對南美葉疫病、棒孢霉落葉病的抗性和防治藥劑篩選等[65-66]。樹皮(Bark)、毀林(Deforestationde)還代表了橡膠樹死皮病研究。通過分析死皮橡膠樹氰化作用的發(fā)生及其對次生韌皮部生理和病理的影響,比較健康和死皮橡膠樹樹皮韌皮部的超微結(jié)構(gòu)和樹皮形成層結(jié)構(gòu)的變化,發(fā)現(xiàn)患病樹皮梭形細(xì)胞經(jīng)歷變形分裂,乙烯利刺激加速健康樹皮梭形細(xì)胞的分裂[67-69]。

2.3 2012~2016年天然橡膠研究熱點(diǎn)分析

該時(shí)期圖譜的節(jié)點(diǎn)與連線數(shù)量均為122,關(guān)鍵詞形成5個(gè)網(wǎng)絡(luò)聚類,分別是“產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成”、“橡膠樹分子標(biāo)記與miRNAs”、“橡膠樹防御蛋白對非生物脅迫的分子響應(yīng)”、“熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林的土地利用變化效應(yīng)”和“天然橡膠膠乳微生物降解”(見圖3)。

2.3.1 產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成 該聚類出現(xiàn)銀膠菊(Guayule)、蒲公英(Taraxacum brevicorniculatum)、替代來源(Alternative source)、天然膠乳(Natural rubber latex)、生物合成(Biosynthesis)等關(guān)鍵詞,表明該時(shí)期研究熱點(diǎn)由橡膠樹天然橡膠生物合成轉(zhuǎn)向產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成??寺×硕探瞧压⒓琢u戊酸途徑的3-羥基-3-甲基-戊二酸酰輔酶A合酶(HMGS)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGR)。通過抑制俄羅斯蒲公英中TkSRPP3的表達(dá),發(fā)現(xiàn)橡膠含量和聚合長度均明顯下降。證明SRPP在橡膠粒子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和天然橡膠合成中均起重要作用。沉默短角蒲公英乳管中的CPT,顯著抑制乳管橡膠粒子形成和橡膠生物合成。研究低溫誘導(dǎo)下銀膠菊中天然橡膠生物合成途徑的轉(zhuǎn)移酶活性,如HMGS、HMGR、FPS等及其基因表達(dá)譜。研究異戊烯二磷酸異構(gòu)酶基因(EuIPI)轉(zhuǎn)化杜仲過表達(dá)植株,產(chǎn)生天然橡膠生物合成反式-聚異戊二烯的能力。從杜仲中分離參與天然橡膠合成甲羥戊酸途徑的6個(gè)基因,5個(gè)編碼全長反式異戊二烯基二磷酸合成酶基因[70-75]。

2.3.2 橡膠樹分子標(biāo)記與miRNAs 該聚類出現(xiàn)微衛(wèi)星標(biāo)記(Microsatellite marker)、EST-SSR標(biāo)記(EST-SSR marker)等,說明橡膠樹分子輔助育種發(fā)展到分子標(biāo)記遺傳多樣性研究階段。根據(jù)橡膠樹樹皮轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果挖掘到39 257個(gè)EST-SSR標(biāo)記,隨機(jī)選擇110個(gè)標(biāo)記在13個(gè)品種中產(chǎn)生多態(tài)性比率為55.45%。運(yùn)用EST-PCR和EST-SSR標(biāo)記分析橡膠樹種質(zhì)資源的遺傳多樣性[76-77]。另外,RNA序列(RNA-Seq)、克?。∕olecular cloning)、基因表達(dá)(Gene expression)和轉(zhuǎn)錄組(Transcriptome)等表明小RNA調(diào)控的表觀遺傳也是關(guān)注熱點(diǎn)。鑒定與橡膠樹非生物逆境相關(guān)的48個(gè)保守miRNAs和10個(gè)新的miRNAs,預(yù)測的靶基因涉及刺激應(yīng)答、抗氧化和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等,推測miRNAs可能在調(diào)控氧化還原中起作用;與橡膠樹產(chǎn)量相關(guān)的56個(gè)保守miRNAs和20個(gè)新的miRNAs,涉及逆境響應(yīng)、代謝反應(yīng)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等[78-79]。

2.3.3 橡膠樹防御基因及其對非生物脅迫的分子響應(yīng) 該聚類包含非生物脅迫(Abiotic stress)、乙烯(Ethylene)、茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate)、脫落酸(Abscisic acid)、干旱(Drought)、響應(yīng)(Response)等關(guān)鍵詞。分析了HbWRKY1基因的功能,發(fā)現(xiàn)外界損傷、乙烯利或茉莉酸刺激可以誘導(dǎo)膠乳中HbWRKY1基因表達(dá),該基因與脅迫應(yīng)答反應(yīng)有關(guān)。從橡膠樹中分離出編碼14-3-3蛋白的cDNA,命名為Hb14-3-3c。通過酵母雙雜交篩選,在橡膠樹膠乳中鑒定Hb14-3-3c的11個(gè)相互作用蛋白,認(rèn)為參與了橡膠生物合成、應(yīng)激、防御反應(yīng)等。克隆和鑒定調(diào)節(jié)乙烯利和茉莉酸信號途徑中發(fā)揮重要作用的AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子,命名為HbEREBP1。發(fā)現(xiàn)割膠、機(jī)械損傷、外源乙烯利和茉莉酸甲酯刺激誘導(dǎo)其表達(dá)量下調(diào),推測HbEREBP1可能是防御基因家族成員的負(fù)調(diào)節(jié)因子[80-82]。

2.3.4 熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林土地利用變化效應(yīng) 熱帶雨林(Tropical rain forest)、土地利用變化(Land use change)、橡膠林(Rubber plantation)、生物多樣性(Biodiversity)、動力學(xué)(Dynamics)和模型(Model)等關(guān)鍵詞,說明該時(shí)期橡膠林由生物多樣性、生態(tài)效應(yīng)與土壤有機(jī)碳轉(zhuǎn)向熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林的土地利用變化效應(yīng)研究。Fox等[83]利用土地利用轉(zhuǎn)化及其動力學(xué)效應(yīng)模型(CLUE-s)對東南亞蒙大拿的土地利用/覆被變化進(jìn)行模擬研究。目前約有9%的覆被由當(dāng)?shù)氐臉淠?、灌木和草本植物組成,預(yù)計(jì)將在50年期間被樹木、茶葉等常綠灌木取代,4%由擴(kuò)張種植的橡膠樹取代。Boithias等[84]在泰國東北部一個(gè)限水區(qū),基于水分養(yǎng)分和光捕獲農(nóng)林系統(tǒng)(WaNuLCAS)動力學(xué)模型預(yù)測橡膠林水分利用、生長和膠乳產(chǎn)量。分析印度熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林后,5種類型蚯蚓對土壤有機(jī)碳、磷鉀利用率等的影響。評估亞馬遜酸性土壤和貧瘠土壤中土地利用類型轉(zhuǎn)變下種植的包括橡膠在內(nèi)的12種作物(木材、果樹和棕櫚)的土壤肥力和養(yǎng)分需求[85-86]。中國(China)出現(xiàn)頻次較高,說明對中國熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林的土地利用變化效應(yīng)是國際研究熱點(diǎn)。Meng等[87]調(diào)查了熱帶土地利用變化下云南南部橡膠林甲殼動物群落和物種分布,以及天然林地、開放土地、農(nóng)田和不同樹齡橡膠林下食蚜蠅和野生蜜蜂物種豐富度和群落組成結(jié)構(gòu)。發(fā)現(xiàn)5 a和8 a的橡膠林沒有顯著指標(biāo)??值的物種分布,20 a和40 a的橡膠林物種種類減少。Li等[88]評估了云南西雙版納大面積熱帶森林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林和茶葉種植園的土地利用變化下,土壤無機(jī)氮和坡度的變化。

2.3.5 天然橡膠膠乳微生物降解 該聚類包含生物降解(Biodegradation)、細(xì)菌降解(Bacterial degradation)、微生物降解(Microbial degradation)、土壤(Soil)和鑒定(Identification)等關(guān)鍵詞。Watcharaku等[89]從土壤中分離鑒定一株天藍(lán)色鏈霉菌(Streptomyces coelicolor)菌株CH13,能夠生物降解木薯淀粉/天然橡膠高分子聚合物和橡膠手套。Hesham等[90]報(bào)道嗜熱芽孢桿菌菌株ASU7作為降解天然橡膠膠乳的有效來源,將編碼16S rRNA的基因序列和系統(tǒng)發(fā)育分析應(yīng)用于細(xì)菌屬和種的鑒定。Shah等[91]分離的新菌株AF-666被鑒定為芽孢桿菌屬,是在含聚異戊二烯培養(yǎng)基上生長能力最強(qiáng)的菌株,可以降解聚異戊二烯橡膠。Hiessl等[92]通過基因組測序預(yù)測放線菌轉(zhuǎn)化菌株VH2的天然膠乳生物降解途徑。

2.4 2002~2016年天然橡膠研究歷程分析

2002~2016年共檢索到天然橡膠研究主題文獻(xiàn)1 724篇。從關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)圖譜(圖1-3)和高頻關(guān)鍵詞列表(表2)可以看出,3個(gè)時(shí)期的節(jié)點(diǎn)數(shù)逐漸增多,關(guān)鍵詞詞頻上升,表明天然橡膠研究的逐漸擴(kuò)展和深入。2002~2016年,關(guān)鍵詞中出現(xiàn)Arabidopsis、Protein、Plant、Cloning、Gene、Identification、Biosynthesis,并且Guayule、Biosynthesis關(guān)鍵詞詞頻在2007~2016年上升,表明橡膠樹天然橡膠生物合成與調(diào)控一直是研究熱點(diǎn),并轉(zhuǎn)向產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成及產(chǎn)量、質(zhì)量研究。2002~2006年,Chitinase、Enzyme關(guān)鍵詞的出現(xiàn),表明早期以橡膠樹防御蛋白和基因研究為主,后期逐漸轉(zhuǎn)向橡膠樹產(chǎn)排膠、膠乳再生和流動、非生物脅迫應(yīng)答的關(guān)鍵蛋白和基因研究。Tropical rain forest、Rubber plantation、Land use關(guān)鍵詞的出現(xiàn)及詞頻的上升,反映出橡膠林生態(tài)效應(yīng)、生物多樣性和土壤有機(jī)碳也一直是科學(xué)家關(guān)注的研究熱點(diǎn),并逐漸轉(zhuǎn)向熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林土地利用變化效應(yīng)研究。另外,China、Xishuangbanna出現(xiàn)頻次較高,說明對中國西雙版納橡膠林土地利用變化效應(yīng)研究也是國際熱點(diǎn)。

3 討論

從微觀層面上,2002~2016年“天然橡膠生物合成與調(diào)控”主題始終是天然橡膠領(lǐng)域關(guān)注的研究熱點(diǎn)之一。2002~2006年,“天然橡膠生物合成與調(diào)控”主題重點(diǎn)關(guān)注橡膠樹天然橡膠生物合成關(guān)鍵蛋白和基因,以及金屬、溫度、茉莉酸類物質(zhì)的輔助調(diào)節(jié)作用;乳管是天然橡膠合成的主要場所,2007~2011年,該主題重點(diǎn)關(guān)注橡膠樹乳管關(guān)鍵蛋白及其基因表達(dá);由于橡膠樹受種植面積限制,難以滿足全球日益增長的對天然橡膠的需求,因此該時(shí)期還涉及產(chǎn)膠植物天然橡膠質(zhì)量和產(chǎn)量研究;隨著美國等國家大規(guī)模擴(kuò)大種植銀膠菊、蒲公英(橡膠草)等產(chǎn)膠植物[16],2012~2016年,該主題重點(diǎn)關(guān)注產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成關(guān)鍵基因研究。另外,“橡膠樹膠乳再生關(guān)鍵蛋白和基因”主題也是該領(lǐng)域持續(xù)關(guān)注的熱點(diǎn)。該主題早期以橡膠樹產(chǎn)排膠及防御關(guān)鍵蛋白與基因研究為主,后期逐漸轉(zhuǎn)向橡膠樹膠乳再生及其對外界刺激或非生物脅迫的分子響應(yīng)。

從宏觀層面上,2002~2016年橡膠林的研究熱點(diǎn)主要集中在4個(gè)方面:橡膠林的土壤碳(土壤有機(jī)碳、微生物碳等),橡膠林的生物多樣性(植物、動物和微生物的生物多樣性),橡膠林的生態(tài)環(huán)境效應(yīng)(氣體排放、光合特性、水分利用等),橡膠林的病害(南美葉疫病、棒孢霉落葉病、死皮病等)。從時(shí)間變化來看,該主題早期關(guān)注橡膠林土壤碳、生態(tài)效應(yīng)與生物多樣性研究,后期逐漸轉(zhuǎn)向熱帶雨林轉(zhuǎn)變?yōu)橄鹉z林的土地利用變化效應(yīng)研究,并側(cè)重于對中國西雙版納橡膠林土地利用變化效應(yīng)研究。

從科研領(lǐng)域?qū)用嫔?,隨著天然橡膠研究的不斷擴(kuò)大和深入,該研究領(lǐng)域還體現(xiàn)了多學(xué)科的交叉和融合。如進(jìn)行橡膠樹雜交育種、遺傳轉(zhuǎn)化和分子標(biāo)記等輔助育種技術(shù)研究,涉及植物學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)等學(xué)科;利用生物化學(xué)研究方法與醫(yī)學(xué)相結(jié)合,開展了早期的天然橡膠制品膠乳蛋白提取和檢測研究;綜合運(yùn)用土壤學(xué)、環(huán)境科學(xué)與微生物技術(shù),開展了天然橡膠微生物降解研究,并成為近年來新興發(fā)展的熱點(diǎn)領(lǐng)域。

4 結(jié)論

以可視化圖譜呈現(xiàn)不同時(shí)期(2002~2006、2007~2011、2012~2016年)天然橡膠領(lǐng)域的研究熱點(diǎn):早期為橡膠樹天然橡膠生物合成與調(diào)控,產(chǎn)排膠及防御關(guān)鍵蛋白與基因,橡膠林生物多樣性、生態(tài)效應(yīng)與土壤碳等;中后期為橡膠樹膠乳再生及其對外界刺激或非生物脅迫的分子響應(yīng),產(chǎn)膠植物天然橡膠生物合成及其產(chǎn)量質(zhì)量研究,橡膠林土地利用變化效應(yīng)等。階段性研究熱點(diǎn)為橡膠林南美葉疫病、棒孢霉落葉病等病害,橡膠樹小RNA表觀遺傳,天然橡膠制品膠乳蛋白過敏等;新興研究熱點(diǎn)為天然橡膠膠乳微生物降解。

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