非手術(shù)牙周治療在慢性牙周炎的治療中仍是金標準，包括機械去除細菌生物膜、刮除牙結(jié)石和根面平整，為微生物的平衡與牙周健康創(chuàng)建一個良好的局部環(huán)境［1-2］。但單純的牙周治療成功率波動較大。為了提高療效，局部或全身使用藥物被建議作為非手術(shù)牙周治療的輔助治療［3-4］。

大黃素是大黃發(fā)揮臨床功效的重要有效成分［5］，其藥理作用廣泛［6-7］。因大黃素具有抑菌抗炎等作用，使大黃素對牙周炎的治療成為可能。本研究在肥胖復合牙周炎大鼠模型建立的基礎(chǔ)上，予以單純的非手術(shù)牙周治療及牙周治療結(jié)合大黃素局部給藥治療，觀察大黃素對肥胖大鼠血清胰島素抵抗及炎癥因子水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及實驗流程 選擇肥胖復合牙周炎大鼠16只，隨機分為兩組，牙周治療組（對照組8只）和牙周治療加藥物組（藥物組，8只）。對照組予以拆除結(jié)扎線，并進行局部牙周非手術(shù)治療（齦上潔治，齦下刮治，1%過氧化氫液沖洗，上碘甘油）。藥物組在牙周治療的同時，局部予以大黃素凝膠（大黃素的配制：將2.15 mg大黃素溶于10 mL 0.4%羧甲基纖維素鈉中制成大黃素凝膠）置入牙周袋內(nèi)。牙周治療后2周過量麻醉處死大鼠。大鼠及普通飼料和高脂飼料均由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗設(shè)計經(jīng)南方醫(yī)科大學動物倫理委員會審核通過。高脂飼料的能量比：蛋白20%、碳水化合物20%、脂肪60%，約5.24 kcal/g。大黃素標準品純度大于98%，購于廣州市藥品檢驗所。

1.2 采血時間點及檢測指標 在牙周治療后2周（大鼠處死前），兩組大鼠采血前大鼠禁食12 h，眼底靜脈叢采血2 mL檢測血糖、胰島素、CRP、TNF?α。HOMA?IR=空腹血糖（mmol/L）×空腹胰島素（mIU）/22.5，HOMA?β=20×空腹胰島素（mIU）/［空腹血糖（mmol/L）-3.5］［8］。

1.3 牙周組織病理檢測 在牙周治療后2周，兩組大鼠采血后腹腔內(nèi)10%水合氯醛1 mL/100 g致死，取上頜第一、二恒磨牙的頜骨組織、牙齒及牙周組織，經(jīng)生理鹽水清洗后，立即放入4%多聚甲醛溶液中固定48 h，在滴水條件下進行組織修整，修整為大小約1.5 cm×0.5 cm的小塊放入EDTA脫鈣液（pH=7，4℃）脫鈣8周，石蠟包埋，制成上頜第二恒磨牙切片，做HE染色，用顯微鏡觀察組織結(jié)構(gòu)，并計算釉牙骨質(zhì)界至結(jié)合上皮冠方的距離，即附著水平。

1.4 統(tǒng)計學方法 血清學指標以均數(shù)±標準差表示，采用SPSS 17.0對實驗數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗，檢驗水準α=0.05（雙側(cè)）。

2 結(jié)果

2.1 兩組代謝指標的比較 藥物組空腹血糖水平低于對照組，空腹胰島素略高于對照組，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。HOMA?IR與HOMA?β兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組之間血清代謝指標的比較Tab.1 Comparison of serum metabolic indices between the two groups ±s

表1 兩組之間血清代謝指標的比較Tab.1 Comparison of serum metabolic indices between the two groups ±s

組別對照組藥物組t值P值空腹血糖（mmol/L）5.06±0.69 4.93±0.72 0.415 0.683空腹胰島素（mIU/mL）68 186.60±9 241.29 71 649.31±8 101.83-0.891 0.385 HOMA?IR 16.64±3.28 16.67±3.43-0.020 0.984 HOMA?β 974.54±419.37 1 082.14±301.38-0.644 0.528

2.2 兩組大鼠血清CRP及TNF?α的比較 非手術(shù)牙周治療結(jié)合局部使用大黃素后，大鼠的血清CRP水平出現(xiàn)了下降，TNF?α水平也出現(xiàn)了明顯的下降（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組大鼠血清CRP及TNF?α的比較結(jié)果Tab.2 Comparison of serum CRP and TNF?α between the two groups ±s

表2 兩組大鼠血清CRP及TNF?α的比較結(jié)果Tab.2 Comparison of serum CRP and TNF?α between the two groups ±s

組別對照組藥物組t值P值例數(shù)8 8 CRP（ng/mL）140.99±32.10 115.22±19.50 2.170 0.044 TNF?α（pg/mL）318.49±12.48 304.21±7.74 3.074 0.007

2.3 兩組大鼠牙周組織的情況比較 牙周組織的HE染色后光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，兩組大鼠的牙齦上皮均無明顯的破潰，纖維性增生明顯，上皮屏障得到修復，溝內(nèi)上皮仍位于釉牙骨質(zhì)的根方（圖1）。藥物組大鼠的牙周附著水平低于對照組［（122.27±3.80）μmvs.（121.44± 3.50）μm］，但兩組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

圖1 大鼠牙周組織HE染色光鏡觀察Fig.1 Light microscopic observation of periodontal tissues in rats using HE staining

3 討論

慢性牙周炎是菌斑微生物引起的一種慢性感染性疾病，牙周袋內(nèi)的細菌及其產(chǎn)生的炎癥物質(zhì)可以通過破潰的袋內(nèi)上皮源源不斷地進入循環(huán)系統(tǒng)中，導致全身的炎癥介質(zhì)水平的不斷升高。因此，慢性牙周炎又被稱為“低濃度系統(tǒng)性炎癥”［9］。非手術(shù)牙周治療作為牙周系統(tǒng)治療計劃中最基礎(chǔ)的治療措施，仍無法被其他牙周治療方法所取代。非手術(shù)牙周治療結(jié)合局部牙周組織給藥的輔助治療也越來越多地應(yīng)用于臨床。本實驗中采用基礎(chǔ)治療加局部大黃素凝膠給藥，并觀察藥物對大鼠血清胰島素抵抗及炎癥因子水平的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，藥物組大鼠較對照組大鼠較快恢復進食的活躍性。藥物組大鼠空腹血糖出現(xiàn)了下降趨勢，空腹胰島素水平則略微上升，兩組比較差異無顯著性。兩組之間的胰島素抵抗基本無太大變化。有研究［10］表明大黃素可以降低淀粉酶和炎癥因子的釋放，進而改善胰腺功能。在本研究中，藥物組胰島細胞功能指數(shù)出現(xiàn)了上升，兩組差異無統(tǒng)計學意義，這可能與局部給藥的濃度不足以改善胰腺功能以及治療的時間較短有關(guān)。

慢性牙周炎常伴隨不斷增高的CRP水平［11］。CRP不僅是心血管疾病的重要預(yù)測因子［12-13］，也是2型糖尿病的預(yù)測因子［14］。本研究發(fā)現(xiàn)，藥物組大鼠的血清CRP水平低于對照組，兩組之間差異有統(tǒng)計學意義。TNF?α主要是由脂肪組織的巨噬細胞分泌表達的炎性細胞因子，可以通過影響IRS蛋白水平的表達來抑制胰島素信號的傳遞，進而引起胰島素抵抗［15-16］。有研究［10］也證實大黃素可明顯抑制大鼠胰酶及TNF?α、IL?6的釋放，并且誘導已受損、不可恢復的腺泡細胞凋亡，從而改善大鼠的胰腺功能。本研究藥物組的TNF?α水平出現(xiàn)了顯著下降。這表明大黃素不僅有助于改善牙周袋的局部炎癥，可能也有利于降低血清炎癥介質(zhì)水平。

有研究［17］認為牙周炎患者給予適量大黃素治療可以促進成骨細胞的形成，減緩牙周炎的進程。對照組及藥物組的治療均可以使牙周局部屏障得到很好的修復，雖然兩組大鼠的溝內(nèi)上皮仍位于釉牙骨質(zhì)界的根方，牙周附著水平兩組之間差異無明顯統(tǒng)計學意義。

目前，大黃素應(yīng)用于口腔疾病的研究較少。本研究中非手術(shù)牙周治療輔以大黃素局部給藥，可以顯著降低血清炎癥因子水平，但對空腹血糖、胰島素以及胰島素抵抗等代謝指標的影響，還需要進一步的研究。

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