孫建永 伏 輝

(長沙醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實驗室,長沙 410219)

四氧化三鉛是解剖學(xué)技術(shù)中用于血管灌注造影最常用的造影劑之一。郝麗文[1]、漆光平[2]、樓新法[3]、唐茂林[4]等已經(jīng)對材料、技術(shù)、方法等方面進行了較為深入的探究。郝麗文等[1]指出應(yīng)用乳膠-四氧化三鉛懸濁液用于大動物造影研究還有待探討。查閱國內(nèi)文獻未見應(yīng)用血管造影劑乳膠-四氧化三鉛懸濁液進行羊動脈灌注的方法和影像學(xué)效果的相關(guān)報道。為此,筆者使用乳膠-四氧化三鉛懸濁液對山羊動脈灌注的方法和影像學(xué)效果進行了探究。

1 材料和方法

1.1 器材

天平、500ml量杯、細濾網(wǎng)、玻璃棒、20ml注射器、止血鉗、手術(shù)刀、剪刀、7號外科手術(shù)線、玻璃插管、帶閥門的導(dǎo)管、橡膠管、數(shù)碼相機等。

1.2 使用藥品及準備

1000ml生理鹽水、5ml肝素、紅色乳膠2L、四氧化三鉛(Pb3O4,衡陽市凱信化工試劑有限公司,橙紅色粉末狀) 500 g、氨水500 ml。將灌注所需的玻璃插管和注射器等物品用氨水浸泡,以防止使用時乳膠液凝固[2]。血管沖洗液的準備,1000ml生理鹽水中加入5ml肝素,充分混勻。

1.3 灌注液的配置

填充劑采用市場直接購得的紅色乳膠,經(jīng)細濾網(wǎng)3次過濾后,用500ml量杯量取1000ml過濾后乳膠。用托盤天平稱取1000g Pb3O4,緩慢加入乳膠中,用玻璃棒充分攪拌均勻,制成灌注所需的乳膠-四氧化三鉛懸濁液。

1.4 山羊準備

成年黑山羊3只,雌雄不拘,宰殺,切開頸總動脈放血,觀察動脈無血液流出之后,沿腹前壁正中縱行切開腹壁,將腸管等腹腔內(nèi)容物用手掏出,顯露腎以下腹主動脈,同時鈍性分離腸系膜下動脈和直腸上部并結(jié)扎。剪斷腸系膜上動脈和直腸上部結(jié)扎處以上的部分。于第1～2或第2～3腰椎椎間隙處截斷山羊腰部,同時將腹主動脈和下腔靜脈一并離斷。留取山羊腹主動脈下段及后肢血管行動脈灌注。

1.5 插管

玻璃插管一端插入腹主動脈,一端與橡膠管連接。分離腹主動脈,用7號外科手術(shù)線將插管固定在腹主動脈上。將含有5ml 肝素的1000ml生理鹽水懸吊于1.5m高度處,用帶有閥門的導(dǎo)管將生理鹽水通過玻璃導(dǎo)管的橡膠端與山羊連接。打開閥門,釋放生理鹽水沖洗動脈,同時按摩山羊的大腿部肌肉,觀察其下腔靜脈斷端處流出液體顏色。待流出的液體顏色由紅色變?yōu)榍宄簳r,關(guān)閉導(dǎo)管閥門,沖洗完畢。將導(dǎo)管與玻璃插管的橡膠端分離,懸吊羊腿,使血管內(nèi)的液體完全流出。

1.6 乳膠-四氧化三鉛懸濁液灌注方法

充分混勻制備好的乳膠-四氧化三鉛懸濁液,過濾至500ml燒杯中。將羊腿平放,取20ml去針頭空注射器,抽取10ml氨水現(xiàn)行注入山羊動脈,再將其活塞推至注射器前端,連接玻璃插管橡膠后,抽出管內(nèi)的部分氣體,形成負壓,助手持止血鉗夾閉玻璃插管的橡膠頭處,然后拔出注射器,并抽取20ml乳膠-四氧化三鉛懸濁液,隨即接入玻璃插管橡膠端,同時助手放開止血鉗,緩慢推入乳膠-四氧化三鉛懸濁液,直至玻璃插管的橡膠端由于壓力變?yōu)榍驙?。此時可見腹主動脈及左右髂血管已經(jīng)完全充盈。助手持止血鉗夾閉玻璃插管的橡膠端,在緊貼夾閉處止血鉗的上下端分別用7號外科手術(shù)線結(jié)扎,放開止血鉗。

灌注量視個體差異而定,雙側(cè)羊腿注射乳膠-四氧化三鉛懸濁液灌注量為30～50ml。

灌注完成后靜置10～15min,觀察有無漏液現(xiàn)象。隨即將標本置于充滿冰塊的儲物箱內(nèi),運往醫(yī)院影像科進行X線、CT血管拍攝并重建血管。冷藏保存2～3d待乳膠-四氧化三鉛懸濁液凝固化后,再行解剖山羊觀察血管灌注情況。

2 結(jié)果

造影劑乳膠-四氧化三鉛懸濁液顯影明顯,X線攝片(圖1)及CT(圖2)可清晰觀察山羊髂血管及股動脈分支分布。解剖可肉眼觀察到穿支血管及其細小分支(圖3)。

圖1 X線圖像. 圖2 CT重建圖像. 圖3 山羊后肢標本解剖效果.

3 討論

3.1 乳膠-四氧化三鉛懸濁液灌注試劑的選擇

3.1.1 乳膠的使用特點 (1) 使用方便,不易沉降,有利于標本的灌注;(2) 乳膠對溫度要求不高,常溫下即可制備乳膠-四氧化三鉛懸濁液,同時也降低了鉛中毒的風(fēng)險。由于不需要特殊設(shè)備,操作過程簡單,用時較短;(3) 灌注速度可操控,2～3d即可固化,解剖時觀察血管不易斷裂。缺點是由于乳膠顆粒大的特性,灌注前需搖勻,需要進行3次過濾,方能獲得較為滿意的溶劑;灌注液搖勻后放置時間不可太久,最好在1～2min 內(nèi)實行灌注。

3.1.2 明膠與四氧化三鉛的配方 樓新法等[3]于2006年實驗得出明膠與四氧化三鉛的最佳配方為300 Bloom的明膠5g,40℃ 蒸餾水100ml,四氧化三鉛100g,灌注量為20～30ml/kg。但是明膠屬熱填充劑,操作不易控制。本次實驗使用乳膠和四氧化三鉛的比例為100ml：100g,經(jīng)腹主動脈至0.2mm之間的血管顯影效果滿意。

3.2 注意事項

實驗場所的選取要求遠離食品生產(chǎn)銷售場所,需在實驗室進行,減少環(huán)境污染。通風(fēng)良好,環(huán)境空曠,實驗操作中注意操作人員的個人安全防護,采取實驗材料及時回收,專門處理等措施。

3.3 經(jīng)驗總結(jié)

在加壓灌注中,若發(fā)現(xiàn)乳膠滲出,用止血鉗及時夾住導(dǎo)管,停止灌注,及時進行結(jié)扎處理后繼續(xù)加壓灌注,直至玻璃插管的橡膠端由于壓力變?yōu)榍驙?。實驗中可?模擬生理條件的大劑量含有肝素的生理鹽水以恒定速度沖洗血管,并按摩大腿肌肉,效果較為滿意。在推注乳膠-四氧化三鉛懸濁液時一定要緩慢勻速進行。在解剖中顯示,此配比濃度下的乳膠-四氧化三鉛懸濁液對0.2mm以下的部分細小動脈未能完全灌注,有待改進溶液的濃度。

參 考 文 獻

[1] 郝麗文,段永壯,王增濤,等.氧化鉛懸濁液灌注法在血管研究中的應(yīng)用[J].中國臨床解剖學(xué)雜志,2007,25(6)：721-723.

[2] 漆光平,杜亞政,潘愛華,等.乳膠血管灌注的技術(shù)探討[J].湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2000,25(4)：411-412.

[3] 樓新法,梅勁,Christopher R,等.明膠-氧化鉛血管造影術(shù)的優(yōu)化[J].中國臨床解剖學(xué)雜志,2006,24(2)：259-262.

[4] Tang M,Yin Z,Morris S F.A pilot study on three-dimensional visualization of perforator flaps by using angiography in cadavers[J].Plast Reconstr Rurg,2008,122(2)：429-437.