王 軍 張松林 和旭梅 何 璐 范粉靈

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院結(jié)構(gòu)性心臟病科，西安 710061)

心血管疾病是由多種信號途徑調(diào)控的病理過程，目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)經(jīng)典的心血管疾病相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因子，其中氧化應(yīng)激對其發(fā)生起到了重要的調(diào)控作用[1,2]。生長分化因子-15(Growth differentiation factor-15，GDF-15)是TGF-β家族中的一員，在炎癥、外傷、心腦血管疾病、腫瘤等應(yīng)激狀態(tài)下可大量表達(dá)[3-5]。有研究顯示，GDF-15在缺血/再灌注模型心肌中有強(qiáng)烈表達(dá)，心肌細(xì)胞在缺血/再灌注損傷中也可檢測到GDF-15表達(dá)水平的升高[6,7]，因此研究者推測心臟中GDF-15的表達(dá)可能是避免缺血/再灌注損傷的新型防御機(jī)制；GDF-15基因敲除可明顯增加小鼠的心肌肥厚，并伴隨舒張和收縮功能的惡化[8]。也有研究發(fā)現(xiàn)，GDF-15在缺血損傷的心肌中表達(dá)強(qiáng)烈，并可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡[9,10]。以上的研究說明，GDF-15基因可能是一個(gè)新的心臟保護(hù)因子。但關(guān)于GDF-15對心肌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制尚未清楚。因此，本研究通過制備H2O2誘導(dǎo)損傷H9C2心肌細(xì)胞模型，檢測細(xì)胞的增殖及凋亡情況及機(jī)制，為心血管疾病的治療提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1試劑和儀器 大鼠心肌細(xì)胞H9C2購自上海博谷生物細(xì)胞庫；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒、RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自美國Invitrogen公司；增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒、CCK8試劑盒、二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，BCA)試劑盒、膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-異硫/碘化丙錠(PI)細(xì)胞凋亡試劑盒、DCFH-DA探針均購自中國碧云天試劑公司；GDF-15、Ki67、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)、磷酸化的絲氨酸蘇氨酸激酶(Phosphorylated Serine/threonine kinase,p-AKT)均購自美國SANTA CRUZ；酶標(biāo)儀購自美國Molecular Devices；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購自瑞士Roche；流式細(xì)胞儀購自美國BD公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) H9C2心肌細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2～3 d傳代1次。

1.2.2H2O2對H9C2心肌細(xì)胞增殖的影響 將H9C2心肌細(xì)胞1 000個(gè)/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h后，0、25、50、100、200、400 μmol/L的H2O2作用于細(xì)胞24 h，每孔中加入CCK8試劑10 μl，置于培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育2 h，收集細(xì)胞。利用空白對照孔調(diào)零，酶標(biāo)儀測定570nm的吸光度A，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞增殖率=(實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞A/對照組細(xì)胞A)×100%。

1.2.3分組及轉(zhuǎn)染 實(shí)驗(yàn)分為4組，即Control組(細(xì)胞不經(jīng)特殊處理)、NC組(細(xì)胞轉(zhuǎn)染不具有任何干擾作用的pcDNA3.1載體)、H2O2組(加入H2O2200 μmol/L)、GDF-15+H2O2組(細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-GDF-15，然后加入終濃度為200 μmol/L的H2O2)。根據(jù)LipofectamineTM2000脂質(zhì)體介導(dǎo)法進(jìn)行轉(zhuǎn)染。24 h后對各組細(xì)胞進(jìn)行檢測。

1.2.4各組細(xì)胞GDF-15的表達(dá)檢測 采用RT-PCR及Western blot檢測GDF-15的表達(dá)。RT-PCR基本步驟如下：收集轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)24 h的細(xì)胞，利用Trizol提取細(xì)胞中的總RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，以GAPDH作為內(nèi)參基因，用SYBR Green qPCR試劑盒對GAPDH和GDF-15進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。GAPDH和GDF-15的引物序列如下：GDF-15 F：5′-CATTGCCTGAGCAGCGACG-3′，R：5′-GGTAGGCTTCGGGGAGACC-3′。GAPDH F：5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′，R：5′-GAAGATGGTGATGGGATT-TC-3′。PCR反應(yīng)條件及反應(yīng)體系按照試劑盒的說明進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取Ct均值，通過2-ΔΔCt法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。Western blot簡要步驟如下：提取各組細(xì)胞中的蛋白，BCA試劑盒對蛋白進(jìn)行定量，取40 μg蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電轉(zhuǎn)膜1.5 h至硝基纖維素膜，37℃、5%的脫脂奶粉封閉1 h，4℃孵育GDF-15、GAPDH(皆按照1∶1 000稀釋)一抗過夜，次日加入二抗，37℃孵育2 h。增強(qiáng)型化學(xué)法(ECL)顯影，Quantity one軟件對蛋白灰度值進(jìn)行分析。

1.2.5各組細(xì)胞活力檢測 按照1.2.3分組處理細(xì)胞，24 h后收集細(xì)胞，每孔中加入CCK8試劑10 μl，培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h，酶標(biāo)儀于570 nm處測定吸光值(A)。每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6各組細(xì)胞凋亡率檢測 收集按照1.2.3處理后的細(xì)胞，采用Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡。預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞，再加入300 μl結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，取100 μl細(xì)胞懸液至流式管中，加入Annexin V-FITC及PI 各5 μl，混勻后室溫避光孵育15 min，反應(yīng)管中再加入400 μl的PBS。1 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀，檢測細(xì)胞的凋亡情況。

1.2.7各組細(xì)胞活性氧簇(Reactive oxygen species，ROS)檢測 收集按照1.2.3處理后的細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，加入磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞，再加入含有20 μmol/L的2′,7′-二氯二氫熒光素黃二乙酸酯(DCFH-DA)的磷酸鹽緩沖液于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h，加入不含胎牛血清的培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞以去掉未反應(yīng)的DCFH-DA，重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長為488 nm和發(fā)射波長為525 nm)。以熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.8各組細(xì)胞Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)檢測 參照1.2.4方法檢測增殖相關(guān)蛋白Ki67、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax及PI3K/AKT信號通路相關(guān)蛋白PI3K和p-AKT的蛋白表達(dá)。

1.2.9PI3K/AKT信號通路抑制劑對心肌細(xì)胞的影響 10 μmol/L的PI3K/AKT信號通路抑制劑LY294002處理H9C2心肌細(xì)胞，通過CCK8法及流式細(xì)胞術(shù)分別檢測GDF-15+H2O2組及PI3K/AKT信號通路抑制劑組的細(xì)胞活力及凋亡率，Western blot檢測Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1不同濃度H2O2對H9C2心肌細(xì)胞增殖的影響 由表1可知，不同濃度H2O2處理H9C2心肌細(xì)胞后，細(xì)胞活力均受到抑制，且有濃度依賴性(t25=2.867，P25=0.046；t50=4.628，P50=0.010；t100=8.457，P100=0.001；t200=15.084，P200=0.000；t400=19.574，P400=0.000)。由于200 μmol/L的H2O2處理H9C2心肌細(xì)胞后可抑制將近一半的細(xì)胞增殖，因此選擇200 μmol/L的H2O2作為研究對象。

2.2各組細(xì)胞GDF-15表達(dá)檢測 通過RT-PCR檢測各組細(xì)胞中GDF-15的mRNA表達(dá)，Western blot檢測GDF-15蛋白表達(dá)，結(jié)果如圖1和表2所示，與Control組比較，H2O2組GDF-15的mRNA及蛋白表達(dá)均顯著升高(tmRNA=12.802，PmRNA=0.000；t蛋白=6.590，P蛋白=0.003)，NC組GDF-15的mRNA及蛋白表達(dá)均無明顯變化(P>0.05)；與H2O2組比較，GDF-15+H2O2組GDF-15的mRNA及蛋白表達(dá)均顯著升高(tmRNA=8.183，PmRNA=0.001；t蛋白=6.086，P蛋白=0.004)。

2.3各組細(xì)胞活力檢測 Control組、NC組、H2O2組和GDF-15+H2O2組的細(xì)胞活力分別為(100.00±4.62)%、(96.88±4.21)%、(55.12±3.69)%、(73.65±5.23)%，4組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=66.783,P<0.01)。與Control組比較，H2O2組細(xì)胞活力顯著降低(t=13.147，P=0.000)，NC組細(xì)胞活力無明顯變化(P>0.05)；與H2O2組比較，GDF-15+H2O2組的細(xì)胞活力顯著升高(t=5.014，P=0.007)。見圖2。

2.4各組細(xì)胞凋亡率檢測 Control組、NC組、H2O2組和GDF- 15+H2O2組的細(xì)胞凋亡率分別為(3.65±0.53)%、(3.44±0.62)%、(23.26±1.65)%、(14.31±1.36)%，4組比較差異顯著(F=207.989,P<0.01)。H2O2組細(xì)胞凋亡率顯著高于Control組(t=19.599，P=0.000)，而GDF-15+H2O2組細(xì)胞凋亡顯著低于H2O2組(t=7.250，P=0.002)。見圖3。

表1不同濃度H2O2對H9C2心肌細(xì)胞增殖的影響

Tab.1EffectsofdifferentconcentrationsofH2O2onproliferationofH9C2cardiomyocytes

H2O2concentrationCellviability(%)0μmol/L10000±41525μmol/L9018±4241)50μmol/L8432±4151)100μmol/L7226±3881)200μmol/L5431±3211)400μmol/L4119±3141)F103144P<001

Note：Compared with 0 μmol/L,1)P<0.05.

圖1 Western blot檢測細(xì)胞中GDF-15的蛋白表達(dá)Fig.1 Western blot was used to detect protein expression of GDF-15 in cells

2.5各組細(xì)胞ROS水平檢測 ROS水平檢測結(jié)果如圖4所示，Control組、NC組、H2O2組和GDF-15+H2O2組的ROS相對水平分別為(17.62±2.65)、(18.88±3.12)、(59.68±6.18)、(32.15±5.41)，4組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=54.388,P<0.01) 。H2O2組ROS水平顯著高于Control組(t=10.831，P=0.000)，而GDF-15+H2O2組的ROS水平顯著低于H2O2組(t=5.806，P=0.004)。

2.6各組細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測 Control組、NC組、H2O2組和GDF-15+H2O2組Ki67的蛋白表達(dá)分別為(0.688±0.053)、(0.681±0.064)、(0.111±0.014)、(0.362±0.042)，Bcl-2的蛋白表達(dá)分別為(0.321±0.029)、 (0.335±0.032)、(0.097±0.010)、(0.212±0.021)，Bax的蛋白表達(dá)分別為(0.131±0.016)、(0.139±0.020)、(0.415±0.036)、(0.297±0.021)，H2O2組Ki67、Bcl-2的蛋白表達(dá)顯著低于Control組(tKi67=18.231，PKi67=0.000；tBcl-2=12.648，PBcl-2=0.000)，Bax的蛋白表達(dá)顯著高于Control組(t=12.486，P=0.000)；而GDF-15+H2O2組Ki67、Bcl-2的蛋白表達(dá)顯著高于H2O2組(tKi67=9.820，PKi67=0.001；tBcl-2=8.564，PBcl-2=0.001)，Bax的蛋白表達(dá)顯著低于H2O2組(t=4.904，P=0.008)。見圖5。

表2各組細(xì)胞中GDF-15的mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)

Tab.2mRNAandproteinexpressionofGDF-15ineachgroupofcells

GroupsGDF?15mRNAexpressionGDF?1proteinexpressionControl1000±01110247±0032NC0955±01080221±0027H2O23144±02681)0436±00381)GDF?15+H2O25466±04122)0668±00542)F20740384001P<001<001

Note：Compared with Control group,1)P<0.05;compared with H2O2group,2)P<0.05.

2.7各組細(xì)胞PI3K/AKT信號通路PI3K、p-AKT的蛋白表達(dá) Control組、NC組、H2O2組和GDF-15+H2O2組PI3K的蛋白表達(dá)分別為(0.462±0.041)、(0.445±0.048)、(0.118±0.012)、(0.302±0.021)，p-AKT的蛋白表達(dá)分別為(0.277±0.031)、(0.292±0.032)、(0.074±0.009)、(0.132±0.018)，4組的PI3K和p-AKT蛋白比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F1=66.840，F(xiàn)2=47.342，P<0.01)，H2O2組PI3K、p-AKT的蛋白表達(dá)均顯著低于Control組(tPI3K=13.947，PPI3K=0.000；tp-AKT=10.892，Pp-AKT=0.000)，而GDF-15+H2O2組PI3K、p-AKT的蛋白表達(dá)均顯著高于H2O2組(tPI3K=13.177，PPI3K=0.000；tp-AKT=4.992，Pp-AKT=0.008)。見圖6。

圖2 各組細(xì)胞活力檢測結(jié)果Fig.2 Cell viability test results of each groupNote:Compared with Control group,*.P<0.05;compared with H2O2 group,#.P<0.05.

圖3 各組細(xì)胞凋亡率檢測結(jié)果Fig.3 Apoptosis rate of each groupNote:A.The apoptosis rate of each group was detected by flow cytometry;B.The apoptosis rate of each group;compared with Control group,*.P<0.05;compared with H2O2 group,#.P<0.05.

圖4 各組細(xì)胞ROS水平檢測結(jié)果Fig.4 ROS levels in each group of cellsNote:Compared with Control group,*.P<0.05;compared with H2O2 group,#.P<0.05.

圖5 各組細(xì)胞Ki67、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)檢測結(jié)果Fig.5 Expression of Ki67,Bcl-2 and Bax proteins in each groupNote:A.Western blot test result diagram;B.The relative expression of protein;compared with Control group,*.P<0.05;compared with H2O2 group,#.P<0.05.

圖6 各組細(xì)胞PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果Fig.6 Expression of PI3K and p-AKT proteins in each groupNote:A.Western blot test result diagram;B.The relative expression of protein;compared with control group,*.P<0.05;compared with H2O2 group,#.P<0.05.

圖7 PI3K/AKT信號通路抑制劑對心肌細(xì)胞凋亡的影響Fig.7 Effects of inhibitors of AKT signaling pathway on cardiomyocyte apotosis

圖8 PI3K/AKT信號通路抑制劑對Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)的Fig.8 Effects of inhibitors of PI3k/AKT signaling pathway on Ki67,Bcl-2，Bax,PI3K and p-AKT protein expressionNote: 1.GDF-15+H2O2 group;2.PI3K/AKT signaling pathway inhibitor group.

2.8PI3K/AKT信號通路抑制劑對心肌細(xì)胞的影響 GDF-15+H2O2組及PI3K/AKT信號抑制劑組的細(xì)胞活力分別為(97.88±2.45)%、(80.21±4.37)%，凋亡率分別為(13.75±1.02)%、(20.13±1.43)%，Ki67的蛋白表達(dá)分別為(0.352±0.036)、(0.215±0.026)，Bcl-2的蛋白表達(dá)分別為(0.182±0.020)、(0.115±0.013)，Bax的蛋白表達(dá)分別為(0.120±0.016)、(0.306±0.032)，PI3K的蛋白表達(dá)分別為(0.335±0.037)、(0.223±0.034)，p-AKT的蛋白表達(dá)分別為(0.091±0.011)、(0.037±0.008)，PI3K/AKT信號抑制劑組細(xì)胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表達(dá)均顯著低于GDF-15+H2O2組(t細(xì)胞活力=6.109，P細(xì)胞活力<0.05；tBcl-2=4.865，PBcl-2<0.05；tp-AKT=6.877，Pp-AKT<0.05)，細(xì)胞凋亡率及Bax蛋白表達(dá)顯著高于GDF-15+H2O2組(t凋亡率=6.291，P凋亡率<0.05；tBax=9.005，PBax<0.05)。見圖7，圖8。

3 討論

大量研究顯示，多種心血管疾病在病理?xiàng)l件下會產(chǎn)生大量的活性氧及氧自由基，引起心肌細(xì)胞及組織的氧化應(yīng)激損傷，從而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞的凋亡[11-13]。降低由氧化應(yīng)激導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡有重要的研究意義。GDF-15是一個(gè)分泌蛋白，是TGF-β家族成員之一，正常情況下在心臟中不表達(dá)或微量表達(dá)，而在心血管疾病的心臟中GDF-15的表達(dá)明顯升高[14,15]。臨床研究證實(shí)，GDF-15在外周血中的濃度與冠心病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，并且與心血管事件的發(fā)生和死亡率密切相關(guān)[16,17]；在小鼠的梗死心肌內(nèi)，GDF-15蛋白快速誘導(dǎo)表達(dá)，這可能說明在梗死后的創(chuàng)面修復(fù)和愈合中GDF-15起到重要作用[18,19]；在心肌梗死誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠心肌組織，心肌收縮功能LVEF指標(biāo)可隨心肌組織中GDF-15表達(dá)升高而降低[20,21]。以上的研究說明GDF-15在心血管疾病中的作用，但GDF-15對H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞增殖凋亡的影響尚未清楚。

H2O2是常用的氧化應(yīng)激損傷模型[22,23]。因此，本研究首先用不同濃度的H2O2處理心肌細(xì)胞，通過CCK8檢測細(xì)胞增殖情況，以此確定H2O2的最佳濃度。接下來檢測上調(diào)GDF-15表達(dá)對H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞增殖凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)上調(diào)GDF-15表達(dá)后心肌細(xì)胞的增殖顯著升高，凋亡降低。這提示GDF-15可通過提高心肌細(xì)胞活力及降低凋亡對心肌細(xì)胞起保護(hù)作用。

GDF-15對心肌細(xì)胞增殖凋亡的影響是通過何種方式，目前也尚未明確。多種基因均可影響心肌細(xì)胞的增殖，如Ki67、PCNA等，ROS及Bcl-2和Bax可影響心肌細(xì)胞的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，病理狀態(tài)下，ROS產(chǎn)生量增多，導(dǎo)致生物功能缺失及線粒體功能障礙，進(jìn)而引起心肌細(xì)胞的損傷[24,25]。心肌細(xì)胞中長期有大量的ROS暴露時(shí)，也會引起心肌細(xì)胞的凋亡、纖維化、壞死，最后導(dǎo)致心律失常、心肌重構(gòu)等[26,27]。Ki67是一種細(xì)胞增殖抗原，可以作為檢測細(xì)胞增殖活性的一個(gè)重要指標(biāo)，目前已得到廣泛應(yīng)用[28,29]。Bcl-2和Bax是Bcl-2家族的抑凋亡蛋白和促凋亡蛋白，在細(xì)胞凋亡過程中，Bax移位到線粒體膜上，導(dǎo)致膜電位發(fā)生變化，Bax空間構(gòu)象變大從而發(fā)生活化。Bax發(fā)生活化后可誘導(dǎo)線粒體釋放細(xì)胞色素C，從而誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。Bcl-2和Bax可結(jié)合形成二聚體，抑制或促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[30,31]。已有多項(xiàng)研究證實(shí)可通過上調(diào)Bcl-2和下調(diào)Bax以降低心肌細(xì)胞的凋亡[32,33]。因此，本研究檢測各組細(xì)胞中ROS水平及Ki67、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)上調(diào)GDF-15表達(dá)后ROS水平降低，Ki67、Bcl-2表達(dá)上調(diào)，Bax表達(dá)下調(diào)。通過以上實(shí)驗(yàn)可初步推斷上調(diào)GDF-15表達(dá)影響心肌細(xì)胞增殖凋亡的機(jī)制可能與降低ROS水平，上調(diào)Ki67、Bcl-2表達(dá)和下調(diào)Bax表達(dá)有關(guān)。

PI3K/AKT信號可影響細(xì)胞的增殖凋亡，通過調(diào)控下游的Bcl-2、Bax等多種靶蛋白，從而調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)過程[34,35]。研究顯示，在H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化損傷中，可通過激活PI3K/AKT信號通路促進(jìn)細(xì)胞的增殖及降低細(xì)胞凋亡[36-38]。PI3K激活的AKT可通過磷酸化作用抑制或激活下游的P21、Caspase9等靶蛋白，從而介導(dǎo)多種細(xì)胞因子、胰島素等促進(jìn)細(xì)胞增殖，并發(fā)揮抗凋亡作用[39,40]。本研究中為了證實(shí)上調(diào)GDF-15表達(dá)是否可引起心肌細(xì)胞PI3K/AKT信號的變化，通過Western blot檢測PI3K和p-AKT的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示，PI3K和p-AKT的蛋白表達(dá)均顯著升高。這提示上調(diào)GDF-15表達(dá)可通過激活PI3K/AKT信號通路降低心肌細(xì)胞的氧化損傷。

綜上所述，上調(diào)GDF-15表達(dá)可促進(jìn)H2O2誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞增殖，降低細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞中ROS水平，Ki67、Bcl-2、Bax表達(dá)及PI3K/AKT信號通路有關(guān)。本研究為GDF-15在心血管疾病心肌細(xì)胞增殖凋亡機(jī)制的研究奠定了一定基礎(chǔ)。后續(xù)的研究將在體內(nèi)對GDF-15的作用進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

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