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巴貝蟲(chóng)病(Babesiosis)是經(jīng)蜱和輸血傳播的人獸共患血液寄生蟲(chóng)病，以發(fā)熱、溶血、貧血、脾腫大為主要臨床表現(xiàn)。其中田鼠巴貝蟲(chóng)是感染人類最常見(jiàn)的種類。1957年南斯拉夫報(bào)道了世界上首例人體巴貝蟲(chóng)病的確診病例以來(lái)，全世界已報(bào)道了上百例人感染巴貝蟲(chóng)病例[1]。巴貝蟲(chóng)病在世界各地流行，死亡率高[2]。我國(guó)云南、內(nèi)蒙、浙江、山東、臺(tái)灣等地均有散在的病例報(bào)道[3]。本病例為福建省首次正式報(bào)道經(jīng)病原學(xué)及分子生物學(xué)等方法綜合診斷的人巴貝蟲(chóng)病。通過(guò)對(duì)此病例的回顧性分析，提高對(duì)人巴貝斯蟲(chóng)病的診斷水平，從而減少漏診及誤診。

1 資料與方法

1.1流行病學(xué)資料 追問(wèn)病史，患者出生及生長(zhǎng)于城鎮(zhèn)中，自訴家中無(wú)喂養(yǎng)貓狗等寵物，也無(wú)圈養(yǎng)豬、牛、馬、羊等動(dòng)物。2017年7月及8月曾分別前往廣東深圳及湖南長(zhǎng)沙兩地大城市務(wù)工，9月中旬至福建寧德市霞浦縣水門(mén)鄉(xiāng)務(wù)工，其居住地為農(nóng)村，且工作環(huán)境周邊有大量灌木叢及樹(shù)林，但患者否認(rèn)有蜱叮咬史，且尚未采集到蜱蟲(chóng)。11月8日因外傷導(dǎo)致脾破裂在寧德市霞浦醫(yī)院進(jìn)行了脾切除手術(shù)，手術(shù)中有輸血。11月28日康復(fù)出院。12月10日患者因“血紅蛋白尿、發(fā)冷、發(fā)熱”再次就診于霞浦縣醫(yī)院，按“溶血性貧血”治療一段時(shí)間后未見(jiàn)明顯好轉(zhuǎn)，12月16日轉(zhuǎn)至寧德市醫(yī)院就診，以“發(fā)熱待查”收住院，12月17日寧德市醫(yī)院血檢發(fā)現(xiàn)大量可疑惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)狀體，初步診斷為惡性瘧，因暫時(shí)缺少抗瘧藥物，12月19日患者轉(zhuǎn)院至福州市傳染病院就診。12月20日傳染病院將患者血樣送至福建省疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病科進(jìn)行檢驗(yàn)。外周血涂片發(fā)現(xiàn)大量疑似惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)狀體，但蟲(chóng)體形態(tài)有異。瘧疾免疫學(xué)快速檢測(cè)試劑結(jié)果：僅在“C”處出現(xiàn)紅色反應(yīng)線，表明樣本為瘧原蟲(chóng)陰性(圖2)。

1.2 方法

1.2.1病原學(xué)檢測(cè) 血常規(guī)及尿常規(guī)檢查。外周血涂片用吉姆薩染液染色后鏡檢。

1.2.2免疫學(xué)檢測(cè) 抽取外周血進(jìn)行瘧疾快速診斷試劑(RDT)檢測(cè)。

1.2.3分子生物學(xué)檢測(cè)

1.2.3.1DNA提取 提取患者來(lái)自福州市傳染病院就診時(shí)抽取的第一次血樣本的DNA，使用血液基因組DNA提取試劑盒(購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.3.2PCR過(guò)程 應(yīng)用巴貝蟲(chóng)18S rRNA引物，上游引物：5′-AATACCCAA-TCCTGACACAGGG-3′；下游引物：5′-TTAAATACGA-ATGCCAAC-3′。PCR反應(yīng)體系50μL：預(yù)混Tap酶25μL、10μmol/L上下游引物各2.0μL、DNA模板10μL、雙蒸水8μL。PCR擴(kuò)增條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，60℃40 s，72 ℃ 40 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。取5μL擴(kuò)增產(chǎn)物點(diǎn)樣于1.5%瓊脂糖，80V凝膠電泳45min，凝膠成像系統(tǒng)觀察[8]，將陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。

1.2.3.3DNA序列分析 將測(cè)序獲得的DNA序列通過(guò)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)，進(jìn)行BLAST同源性比對(duì)。

2 結(jié) 果

2.1實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果 血常規(guī)結(jié)果顯示W(wǎng)BC 22.47×109/L、N 50.1%、L 36.7%、RBC 2.17×1012/L、Hb 75g/L、HCT 22.5%。尿常規(guī)結(jié)果顯示尿膽原1+、膽紅素3+、尿蛋白3+。外周血涂片(圖1)：約有70%的紅細(xì)胞被寄生，大多數(shù)受染的紅細(xì)胞內(nèi)含1～4個(gè)的環(huán)狀體，形態(tài)與惡性瘧原蟲(chóng)極為相似(箭頭處)，但無(wú)瘧色素沉著，胞漿量少而稀薄。

2.2瘧疾快速診斷試劑(RDT)檢測(cè) 如圖2顯示僅在對(duì)照線處出現(xiàn)紅色反應(yīng)線，表明血樣為瘧原蟲(chóng)陰性。

2.3PCR擴(kuò)增及序列比對(duì) 提取患者外周血液基因組DNA，用田鼠巴貝蟲(chóng)特異性引物擴(kuò)增，獲得約400 bp大小的擴(kuò)增條帶(圖3),PCR產(chǎn)物送克隆測(cè)序，測(cè)序結(jié)果顯示長(zhǎng)度為412 bp的序列，經(jīng)BLAST序列比對(duì)與田鼠巴貝蟲(chóng)(登錄號(hào)： KX008036)的同源性為99%。

圖1 蟲(chóng)體形態(tài) (吉姆薩染液染色)Fig.1 Parasite morphology (giemsa’s staining)

圖2 瘧疾RDT檢測(cè)結(jié)果Fig.2 Result of RDT about malaria

注：M：DNA標(biāo)志物；1：田鼠巴貝蟲(chóng)陽(yáng)性對(duì)照；2，3：患者的血樣；4：空白對(duì)照?qǐng)D3 PCR檢測(cè)結(jié)果Fig.3 Result of PCR

3 討 論

本病例為福建省首次正式報(bào)道的經(jīng)病原學(xué)及分子生物學(xué)等方法綜合診斷的人田鼠巴貝蟲(chóng)病?；颊叱霈F(xiàn)無(wú)規(guī)律的發(fā)熱、血紅蛋白尿及溶血性貧血等癥狀；血涂片鏡檢可見(jiàn)約70%的紅細(xì)胞內(nèi)寄生了1～4個(gè)似惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)狀體的蟲(chóng)體；用田鼠巴貝蟲(chóng)特異性引物PCR擴(kuò)增到陽(yáng)性條帶，經(jīng)過(guò)BLAST序列比對(duì)與田鼠巴貝蟲(chóng)的同源性為99%。故可確診為人巴貝蟲(chóng)病。

感染巴貝蟲(chóng)后可表現(xiàn)為癥狀不典型，或?yàn)橹滤佬愿腥綶4]。脾切除及免疫缺陷者為巴貝蟲(chóng)病的高危人群，無(wú)癥狀感染者可能在接受脾臟切除手術(shù)、接受免疫抑制藥物治療或罹患惡性疾病的情況下會(huì)惡化為嚴(yán)重的甚至致命的巴貝蟲(chóng)感染。巴貝蟲(chóng)病的傳播途徑除了蜱叮咬外，輸血感染也是一個(gè)重要途徑，無(wú)癥狀感染者可能通過(guò)輸血無(wú)意識(shí)的將巴貝蟲(chóng)傳染給受血者,受血者往往此時(shí)已經(jīng)存在免疫低下或其他嚴(yán)重的基礎(chǔ)疾病,輸血后引起巴貝蟲(chóng)感染的后果往往更為嚴(yán)重。因此在防止經(jīng)蜱傳播的同時(shí)，也要注意輸血的安全。本例患者曾因外傷進(jìn)行脾切除手術(shù)時(shí)予以輸血，其否認(rèn)有蜱蟲(chóng)叮咬史，在其工作及暫時(shí)居住地目前也尚未捕獲蜱蟲(chóng)，因此輸血感染巴貝蟲(chóng)病的可能性較大，但其受血血源暫時(shí)無(wú)法追蹤檢測(cè)。所以要注意檢測(cè)隱性感染人群，發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀感染者并對(duì)其及時(shí)進(jìn)行治療，最大限度的降低他們作為供血者導(dǎo)致受血者被感染的機(jī)率。

福建省部分地區(qū)鼠類(尤其是野鼠)存在田鼠巴貝蟲(chóng)感染，是巴貝蟲(chóng)病的自然疫源地[5]。近年來(lái)，隨著生活水平的提高和旅游業(yè)的發(fā)展，人群與野鼠接觸的機(jī)會(huì)也逐漸增加，被蜱蟲(chóng)叮咬的概率也加大。同時(shí)福建省外出非洲務(wù)工及旅游的人口在逐年增多，非洲是瘧疾的高發(fā)區(qū)，由于巴貝蟲(chóng)與瘧原蟲(chóng)的形態(tài)及其引起的臨床癥狀相似[6]，尤其在低度感染和混合感染情況下，巴貝蟲(chóng)病與瘧疾不易區(qū)分，極易發(fā)生誤診，本病例在福建省寧德市醫(yī)院就曾被診斷為惡性瘧。因此還需加強(qiáng)對(duì)瘧疾流行區(qū)回歸人員巴貝蟲(chóng)病的檢測(cè)，減少漏診和誤診。醫(yī)務(wù)人員應(yīng)提高對(duì)該病的認(rèn)識(shí)，對(duì)凡是有近期輸血史、脾切除史以及近期到過(guò)瘧疾流行區(qū)且血涂片檢查發(fā)現(xiàn)有獨(dú)特的蟲(chóng)體特征(三聯(lián)體型或馬耳他十字形)者應(yīng)考慮感染巴貝蟲(chóng)病的可能，對(duì)有蜱咬史或脾腫大以及輕度黃疸、脾臟切除的人也應(yīng)疑為本病[7]。

巴貝蟲(chóng)病嚴(yán)重威脅人類健康。目前，由于國(guó)內(nèi)巴貝蟲(chóng)病病例報(bào)道有限，國(guó)內(nèi)報(bào)道的巴貝蟲(chóng)病人均為被動(dòng)發(fā)現(xiàn)的病例，巴貝西蟲(chóng)病在臨床上還未被醫(yī)生充分認(rèn)識(shí)和關(guān)注，經(jīng)常導(dǎo)致誤診和漏診，因此必須引起相關(guān)部門(mén)的足夠重視。

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